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2.2 虎掌南星不同炮制品指纹图谱的研究                               谱，设置时间窗宽度为 0.5 s，采用多点校正法进行色谱
        2.2.1  色谱条件      色谱柱：SymmetryShield RP18 （250      峰匹配，分别生成3种样品的共有模式，并采用中位数法
        mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.1％乙酸水溶液                生成相应的对照指纹图谱。此外，取“2.2.3”项下混合对
       （B），梯度洗脱（0～6 min，100％B；6～30 min，100％B→              照品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱
        90％B；30～40 min，90％B→87％B；40～45 min，87％             图。通过对比样品指纹图谱和混合对照品图谱中各峰
        B→85％ B；45～55 min，85％ B→70％ B；55～70 min，           的保留时间进行色谱峰指认。结果发现，2 种炮制品的
        70％B→65％B；70～75 min，65％B→100％B）；流速：                图谱较为相似，而生品与前两者的图谱差异较大。其
        0.8 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：270 nm；进样量：15              中，在生品的图谱中共确定了22个共有峰，并指认出了
        µL。                                                9 种核苷类成分，分别为腺嘌呤（3 号峰）、尿嘧啶（4 号
        2.2.2  供试品溶液的制备          分别取虎掌南星生品和炮               峰）、次黄嘌呤（7号峰）、尿苷（8号峰）、黄嘌呤（9号峰）、
        制品粉末（过80目筛，下同）各约1 g，精密称定，置于50                      肌苷（11 号峰）、鸟苷（12 号峰）、腺苷（13 号峰）、胸腺嘧
        mL 锥形瓶中，加水 20 mL，称定质量，超声（频率：40                     啶（15号峰）；但在《规范》炮制品和一体化新工艺炮制品
        kHz，功率：500 W）45 min，放至室温，用水补足减失的质                  中仅确定了16个共有峰（16个峰相同），均仅指认出了5
        量，以5 000 r/min离心5 min，取上清液，用0.45 μm微孔              种核苷类成分，分别为腺嘌呤（3 号峰）、次黄嘌呤（7 号
        滤膜滤过，取续滤液，即得。                                      峰）、尿苷（8号峰）、黄嘌呤（9号峰）、肌苷（11号峰）。虎
        2.2.3  混合对照品溶液的制备            分别取各种对照品适             掌南星生品及不同工艺炮制品的叠加指纹图谱和对照
        量，置于同一量瓶中，精密称定，加水溶解并制成含腺嘌                          指纹图谱见图1～图3，混合对照品图谱见图4。
        呤0.025 g/L、次黄嘌呤0.042 g/L、尿苷0.034 g/L、黄嘌呤
        0.019 g/L、肌苷 0.031 g/L、尿嘧啶 0.041 g/L、鸟苷 0.022                                                  S12
                                                                                                       S11
                                                                                                       S10
        g/L、腺苷 0.029 g/L、胸腺嘧啶 0.018 g/L 的混合对照品                                                         S9
                                                                 mV                                    S8
        溶液。                                                      U，                                    S7
                                                                                                       S6
                                                                                                       S5
        2.2.4  精密度试验      取虎掌南星样品粉末（编号：Y1）约                                                            S4
                                                                                                       S3
                                                                                                       S2
        1 g，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，然后按“2.2.1”                                                             S1
                                                                  0   10.87  21.74  32.62  43.43  54.36  65.23  76.10
        项下色谱条件进样，连续测定6次，记录色谱图。以3号                                                   t，min
        峰（腺嘌呤）为参照峰（该峰峰形较好，峰面积稳定适中，                                               A.叠加指纹图谱
        且与相邻峰的分离度良好）测得各共有峰相对保留时间                               51.02
        的 RSD 为 0.111％ ～0.712％ 、相 对 峰 面 积 的 RSD 为
                                                              mV  24.73
        1.173％～4.706％（n＝6），表明该方法精密度良好。                        U，
        2.2.5  重复性试验      取虎掌南星样品粉末（编号：Y1）约                    －1.57
                                                                  0   10.87  21.74  32.62  43.43  54.36  65.23  76.10
        1 g，共 6 份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，                                            t，min
                                                                                 B.对照指纹图谱
        然后按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色图谱。以
                                                           图1 12批虎掌南星生品的HPLC叠加指纹图谱及对照
        3 号峰（腺嘌呤）为参照峰测得各共有峰相对保留时间
                                                                 指纹图谱
        的 RSD 为 0.093％ ～0.416％ 、相 对 峰 面 积 的 RSD 为
                                                           Fig 1 HPLC superimposed fingerprints and control
        1.715％～3.855％（n＝6），表明该方法重复性良好。
                                                                  fingerprint of 12 batches of P. pedatisecta raw
        2.2.6  稳定性试验      取虎掌南星样品粉末（编号：Y1）约
                                                                  product
        1 g，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在室温下放置
        0、2、4、6、8、10、12 h 时，分别按“2.2.1”项下色谱条件进              2.2.8  虎掌南星指纹图谱的相似度分析                采用《中药色
        样测定，记录色谱图。以3号峰（腺嘌呤）为参照峰测得                          谱指纹图谱相似度评价系统》（2004A版）软件，分别以3
        各共有峰相对保留时间的 RSD 为 0.052％～0.851％、相                  种样品的对照指纹图谱为参照，进行对应炮制品的整体
        对峰面积的 RSD 为 0.777％～3.478％（n＝6），表明样品                相似度评价，结果见表1。
        溶液在室温条件下放置12 h内基本稳定。                                   表 1 结果显示，3 种样品（各 12 批）与其各自对照指
        2.2.7  虎掌南星指纹图谱的建立及共有峰的指认                    分     纹图谱之间的相似度均大于0.990。这表明虎掌南星同
        别取虎掌南星生品和 2 种炮制品（各 12 批）约 1 g，按                    一种样品之间具有较高的相似性，提示其炮制程度及饮
       “2.2.2”项下方法制备供试品溶液，然后分别按“2.2.1”项                    片质量均一、稳定。
        下色谱条件进样测定，记录色谱图。将3种样品的色谱                           2.3 不同样品中5种核苷类成分含量的测定
        数据分别导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》                            2.3.1 色谱条件      同“2.2.1”项下色谱条件。
       （2004A 版）中，分别以样品 S1、C1、Y1 的图谱为参照图                   2.3.2  溶液的制备 （1）供试品溶液：按“2.2.2”项下方


        中国药房    2020年第31卷第13期                                             China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 13  ·1603  ·
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