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号 ：171006，规格：0.31 g/粒）；芍药苷对照品（批号：
X12A8C33627，纯度：≥98％）、丹皮酚对照品（批号：
Z08J6L1，纯度：98≥％）均购自上海源叶生物科技有限
公司；苦杏仁苷对照品（东京 TCI 公司，批号：H3BBD-
GE，纯度：≥97％）；乙酸对照品（批号：J181172，纯度：≥
99.9％）、丙 酸 对 照 品（批 号 ：SHBD0049V，纯 度 ：≥
99.5％）、丁 酸 对 照 品（批 号 ：SHBG8089V，纯 度 ：≥
99％）、戊酸对照品（批号：G1818016，纯度：≥99.5％）、
异戊酸对照品（批号：C1702044，纯度：≥99.5％）、2-乙基
丁酸对照品（内标，批号：STBH4972，纯度：≥99％）均购
自默克生命科学上海有限公司；异丁酸对照品（国药集
团上海化学试剂有限公司，批号：20180104，纯度：≥
99％）；苯甲酸雌二醇注射液（湖北武当动物药业有限责
任公司，批号：170721，规格：1 mL∶1 mg）；缩宫素注射液
（宁波市三生药业有限公司，批号：S171110，规格：2 mL∶
10单位）；一氧化氮（NO）测定试剂盒（批号：20180503）、
丙二醛（MDA）测定试剂盒（批号：20180502）均购自南
京建成生物工程研究所；QIAamp DNA Stool Mini Kit
®
试剂盒（德国 Qiagen 公司，批号：160050377）；2×Taq
PCR Mix 试剂[天根生化科技（北京）有限公司，批号：
KT201801]；DL2000 DNA Marker（批 号 ：A2501C）、
DL5000 DNA Marker（批号：AHF1916）均购自宝生物工
程（大 连）有 限 公 司 ；Rep-PCR 引 物 [ 上 游（Rep1r）：
5′-IIIICGICGICATCIGGC-3′，下游（Rep2i）：5′-ICGICT-
TATCIGGCCTAC-3′]、Eric-PCR 引 物 [ 上 游（Eric1f）：
5′-ATGTAAGCTCCTGGGGATTCAC-3′，下游（Eric2r）：
5′-AAGTAAGTGACTGGGGTGAGCG-3′]均由南京金
斯瑞生物科技有限公司设计、合成；乌来糖（上海沪试实
验室器材股份有限公司）；琼脂糖、溴化乙锭（美国Sigma
公司）；5×氨基丁三醇-硼酸（TBE，上海生工生物工程技
术有限公司）；氯化钠注射液（批号：SD18082803，规格：
250 mL∶ 2.25 g，作生理盐水用）；乙醚、硫酸、无水乙醇等
其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
1.3 动物
SPF 级健康 SD 大鼠 36 只，雌性，体质量（200±20）
g，由浙江省医学科学院提供，生产许可证号：SCXK（浙）
2014-0001。所有大鼠均在 SPF 级动物房中分笼适应性
饲养1周，室温（24±2）℃，每12 h昼夜交替。
2 方法
2.1 溶液配制、造模与样品收集
2.1.1 给药溶液的配制 称取芍药苷、丹皮酚、苦杏仁
苷对照品以及桂枝茯苓胶囊内容物各适量，用 0.5％羧
甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液配制成芍药苷、丹皮酚、苦
杏仁苷以及胶囊内容物质量浓度分别为 3.0、2.0、2.4、
200 g/L的混悬液，临用新配。
2.1.2 分组、造模与给药 取大鼠 36 只，随机分为正常
·1322 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 11
组、模型组、胶囊组（桂枝茯苓胶囊内容物，1 000 mg/kg）、
芍药苷组（15.0 mg/kg）、丹皮酚组（10.3 mg/kg）、苦杏仁苷
组（12.1 mg/kg），每组6只。胶囊组剂量设置参考本课题
组前期研究，各成分组剂量设置参考现有文献的定量分
析结果 [15-16] 。通过注射苯甲酸雌二醇和缩宫素复制大鼠
痛经模型：除正常组大鼠于背部皮下注射等体积生理盐
水外，其余各组大鼠均于背部皮下注射苯甲酸雌二醇注
射液，每天 1 次，连续 10 天（其中第 1、10 天每只注射 0.2
mL，其余各天每只注射 0.1 mL）；于皮下注射苯甲酸雌
二醇的第4天起，各给药组大鼠均灌胃相应药物，模型组
大鼠灌胃0.5％CMC-Na混悬液，正常组大鼠灌胃生理盐
水，灌胃量均为5 mL/kg，每天1次，连续7天；于第10天
末次给药 1 h 后，模型组和各给药组大鼠单次腹腔注射
缩宫素注射液1.0 mL，若大鼠出现扭体反应则表明模型
[17]
成功 。
2.1.3 样品收集 分别于腹腔注射缩宫素后 1、48 h 时
收集大鼠粪便，并于 48 h 时用 20％乌来糖溶液麻醉大
鼠，处死，摘除子宫，并收集结肠内容物，于－80 ℃保存，
备用。
2.2 药效指标评价
于摘除子宫前，观察并记录注射缩宫素后30 min内
大鼠的扭体次数，并计算扭体反应抑制率：扭体反应抑
制率＝（模型组大鼠平均扭体次数－给药组大鼠平均扭
体次数）/模型组大鼠平均扭体次数×100％。空白组大
鼠未见扭体反应，记为“0”。
取“2.1.3”项下子宫样本适量，于冰浴条件下采用玻
璃匀浆器进行匀浆处理。取匀浆液适量，分别采用硫代
巴比妥酸法、硝酸还原酶法以酶标仪检测各组大鼠子宫
组织中NO、MDA的含量，严格按照试剂盒说明书操作。
2.3 结肠内容物中SCFAs含量测定
2.3.1 GC 条件 色谱柱：Agilent DB-FATWAX 毛细管
柱（30 m × 0.25 mm，0.25 μ m）；升 温 程 序 ：初 始 温 度
80 ℃，以 7 ℃/min 升至 190 ℃（保持 2 min）；载气：高纯
氮气（纯度：≥99.999％）；流速：1 mL/min；进样口温度：
240 ℃；火焰离子化检测器（FID）温度：240 ℃；进样量：
2 μL；分流比：5∶1。
2.3.2 样品处理 称取“2.1.3”项下结肠内容物适量，加
水0.4 mL和50％硫酸溶液0.1 mL，涡旋5 min，以12 000
r/min 离心 10 min。吸取上清液 0.4 mL，加入乙醚 0.5
mL，涡旋5 min，以12 000 r/min离心10 min，取上层有机
层396 μL，加入质量浓度为1.25 g/L的内标溶液（以乙醚
为溶剂配制，临用现配）4 μL，混匀，取适量进行GC分析。
2.3.3 方法学考察 分别取乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、
异戊酸和戊酸对照品适量，用乙醚配制成质量浓度均为
1 g/L的混合对照品贮备液。取上述混合对照品贮备液
用乙醚逐级稀释后，进行标准曲线、定量下限、精密度、
中国药房 2020年第31卷第11期