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波长分别为208 nm（白术内酯Ⅱ、β-桉叶醇，0～28 min）、 2.1.6 精密度试验 取北苍术药材（编号：S8）粉末适
340 nm（苍术素，28～45 min）、220 nm（苍术酮，45～60 量，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，然后就按
min）；流速为1 mL/min；柱温为32 ℃；进样量为15 μL。 “2.1.1”项下色谱条件连续进样6次。结果，白术内酯Ⅱ、
2.1.2 混合对照品溶液的制备 精密称取白术内酯Ⅱ、 β-桉叶醇、苍术素、苍术酮峰面积的 RSD 均小于 0.3％
β-桉叶醇、苍术素、苍术酮对照品适量，置于同一量瓶 （n＝6），表明仪器的精密度良好。
中，加甲醇溶解制成质量浓度分别为 10.1、33.0、44.0、 2.1.7 重复性试验 取北苍术药材（编号：S8）粉末适
53.4 μg/mL的混合对照品溶液，备用。 量，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，平行制备 6 份，
2.1.3 供试品溶液的制备 将北苍术药材粉碎后过三 按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并以外
号筛，精密称定药材粉末0.3 g，置于具塞锥形瓶中，精密 标法计算各待测成分含量。结果，白术内酯Ⅱ、β-桉叶
加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声（功率：250 W，频 醇、苍术素、苍术酮的平均含量分别为 0.283 6、0.503 4、
率：40 kHz）处理1 h，放冷，再次称定，用甲醇补足减失的 2.878 1、1.791 8 mg/g，RSD 均小于 1.8％（n＝6），表明方
质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。 法重复性良好。
2.1.4 专属性试验 取“2.1.2”和“2.1.3”项下混合对照 2.1.8 稳定性试验 取北苍术药材（编号：S8）粉末适
品溶液、供试品溶液（编号：S8）和空白溶剂（甲醇），按 量，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，于室温下密闭
“2.1.1”项下色谱条件进行测定。结果，各待测成分均达 放置0、2、4、8、12、24、48 h后，按“2.1.1”项下色谱条件进
到基线分离，白术内酯Ⅱ、β-桉叶醇、苍术素、苍术酮的 样测定，记录峰面积。结果，白术内酯Ⅱ、β-桉叶醇、苍
理论板数均大于 10 000，与各相邻峰间分离度均大于 术素、苍术酮峰面积的RSD均小于0.7％（n＝7），表明供
1.5，且溶剂无干扰（图略）。高效液相色谱图见图1。 试品溶液在室温下放置48 h内稳定。
苍术素
500 2.1.9 加样回收率试验 精密称取已知含量的北苍术
400
mV 300 药材（编号：S8，白术内酯Ⅱ、β-桉叶醇、苍术素、苍术酮
U， 200
100 白术内酯Ⅱ β-桉叶醇 苍术酮 的含量分别为 0.283 6、0.503 4、2.878 1、1.791 8 mg/g）粉
0
0 10 20 30 40 50 60 末 0.3 g，置于具塞锥形瓶中，平行制备 6 份。每份样品
t，min 中均分别加入白术内酯对照品Ⅱ 0.106 2 mg、β-桉叶醇
A.混合对照品溶液
对照品 0.177 9 mg、苍术素 0.973 1 mg、苍术酮 0.537 1
300
苍术素 mg，然后再加甲醇至 50 mL，按“2.1.3”项下方法中“密
mV 200
U， 100 白术内酯Ⅱ β-桉叶醇 塞，称定质量……取续滤液”等步骤操作，制备供试品溶
0 苍术酮 液，再按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，以外标法计算
0 10 20 30 40 50 60
t，min 各待测成分含量并以此计算加样回收率。结果，白术内
B.供试品溶液（编号：S8） 酯Ⅱ、β-桉叶醇、苍术素、苍术酮的平均加样回收率分别
图1 高效液相色谱图 为 102.43％、104.67％、101.34％、103.72％，RSD 均小于
Fig 1 HPLC chromatograms 1.5％（n＝6），表明方法准确度良好，详见表3。
2.1.5 线性关系考察 分别精密量取“2.1.2”项下混合 2.1.10 相对校正因子及相对保留时间的计算 分别精
对照品溶液2.0、1.8、1.2、0.8、0.4、0.2 mL，分别置于2 mL 密吸取“2.1.2”项下的混合对照品溶液 1、3、7、10、15、20
量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成系列线性溶液， μL，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，计算相对校正因
再按“2.1.1”项下色谱条件进样测定。以峰面积为纵坐 子（fk/s ）及相对保留时间（tk/s ）。其中，fk/s＝（Ws×Ak ）/（Wk×
标（y）、质量浓度为横坐标（x）进行线性回归。结果，白 As ），式中 Ws为内参物进样量，As为内参物峰面积，Wk为
术内酯Ⅱ、β-桉叶醇、苍术素、苍术酮的线性范围分别为 成分k的进样量，Ak为成分k的峰面积；tk/s＝tk/ts，式中tk为
1.01～10.10、3.30～33.00、4.40～44.00、5.34～53.40 μg/mL 成分k的保留时间，ts为内参物的保留时间。本试验以苍
（r≥0.999 8），详见表2。 术素为内参物，结果，白术内酯Ⅱ、β-桉叶醇、苍术酮的
表2 4种成分的回归方程和线性范围 平均 fk/s 分别为 3.896 7、5.928 2、9.727 9，RSD 分别为
Tab 2 Regression equation and linear range of 4 com- 0.35％、2.89％、0.36％（n＝6）；平均 tk/s 分别为 0.491 7、
ponents 0.834 8、1.683 3，RSD 分别为 0.12％、0.01％、0.03％（n＝
成分 回归方程 r 线性范围，μg/mL 6），详见表4。
白术内酯Ⅱ y＝480 638.207 1x+742.005 9 0.999 9 1.01～10.10 2.1.11 系统耐用性考察 采用不同高效液相色谱系统
β-桉叶醇 y＝1 031 285.157 0x+1 090.393 5 0.999 8 3.30～33.00
苍术素 y＝8 365 489.434 0x－35 921.531 0 0.999 9 4.40～44.00 （Shimaduz LC-2030、Agilent 1260）和 色 谱 柱（Agilent
苍术酮 y＝1 015 701.887 0x－1 999.849 1 0.999 9 5.34～53.40 XDB-C18、Angela Innoval C18、依利特 ODS-C18 ），考察其

·1316 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 11 中国药房 2020年第31卷第11期