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完甲基苯丙胺后（对照组为注射生理盐水后），立刻观察 料采用 x±s 表示，经方差齐性检查符合方差齐性后，多
各组大鼠的行为，并按文献标准 进行评分：大鼠静止不 组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用
[5]
动或几乎没有活动，记为0分；大鼠正常活动，偶有向前 LSD-t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
运动，记为1分；大鼠活动且伴有频繁向前探索行为，记 3 结果
为 2 分；大鼠活动且伴有持续向前探索行为，记为 3 分； 3.1 天麻素注射液对大鼠刻板行为的影响
大鼠出现重复抬头、摇头或旋转的背腹运动，记为4分； 与对照组比较，甲基苯丙胺组大鼠的刻板行为评分
大鼠出现迅速抬头、摇头或旋转的背腹运动，记为5分。 均显著升高（P＜0.05）。与甲基苯丙胺组比较，常规剂
得分越高，则表明大鼠刻板行为越严重。 量、加倍剂量天麻素组大鼠的刻板行为评分均显著降低
2.3 大鼠纹状体标本采集 （P＜0.05），且加倍剂量天麻素组大鼠在第 2 次、第 5 次
注射甲基苯丙胺后即刻的刻板行为评分均显著低于常
在“2.1.1”“2.1.2”项下各组大鼠给药完毕并末次观
规剂量天麻素组（P＜0.05）。天麻素注射液对大鼠刻板
察“2.1.1”项下各组大鼠的刻板行为后，处死并剖取其脑
行为的影响见图1。
组织中的纹状体。一侧脑半球的纹状体经4％多聚甲醛
5
溶液固定、石蜡包埋后制作切片，室温下保存；另一侧脑 对照组
甲基苯丙胺组
半球的纹状体用液氮冷冻 30 min 后，置于－80 ℃条件 分 4 常规剂量天麻素组
下保存。 刻板行为评分， 3 加倍剂量天麻素组
2.4 大鼠纹状体细胞的凋亡率检测 2 Δ
采用TUNEL染色法进行检测。取“2.3”项下室温保 1 Δ
存的纹状体切片，采用TUNEL染色试剂盒进行染色，以 0
0 1 2 3 4 5 6
二甲苯封片后在显微镜下观察，随机选择3个视野，并记 甲基苯丙胺注射次数
＊
#
录 TUNEL 阳性细胞（镜下阳性细胞呈棕黄色）总数，并 注：与对照组比较，P＜0.05；与甲基苯丙胺组比较，P＜0.05；与
常规剂量天麻素组比较，P＜0.05
Δ
计算细胞凋亡率：细胞凋亡率＝TUNEL 阳性细胞数/全
＊
Note：vs. control group， P＜0.05；vs. methamphetamine group，
部细胞数×100％。 # P＜0.05；vs. regular-dose of gastrodin group，P＜0.05
Δ
2.5 大鼠纹状体中MDA、SOD、GPx、NO水平检测 图1 天麻素注射液对大鼠刻板行为的影响（n＝10）
取“2.3”项下于－80 ℃下保存的大鼠纹状体组织适 Fig 1 Effects of Gastrodin injection on the stereo-
量，用 RIPA 裂解液进行裂解、提取蛋白，用 BCA 蛋白定 typed behavior of rats（n＝10）
量试剂盒测定蛋白含量。然后，按相应试剂盒说明书操 3.2 天麻素注射液对大鼠纹状体中 NO 水平和 nNOS
作，采用多功能酶标仪分别检测 MDA、SOD、GPx、NO 蛋白表达量的影响
水平。 与对照组比较，甲基苯丙胺组大鼠纹状体中 NO 水
2.6 大 鼠 纹 状 体 中 Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、 平和 nNOS 蛋白表达量均显著升高（P＜0.01）。与甲基
nNOS蛋白表达量检测 苯丙胺组比较，常规剂量、加倍剂量天麻素组大鼠纹状
体中 NO 水平和 nNOS 蛋白表达量均显著降低（P＜
采用 Western blotting 法进行检测。取“2.3”项下
0.01）；且加倍剂量天麻素组NO水平显著低于常规剂量
于－80 ℃下保存的大鼠纹状体组织适量，按“2.5”项下
天麻素组（P＜0.01），但两组nNOS蛋白表达量比较差异
方法进行裂解、蛋白提取和定量。取蛋白样本30 μg，与
无统计学意义（P＞0.05）。天麻素注射液对大鼠纹状体
上样缓冲液混合，然后煮沸使蛋白变性，采用十二烷基
中 nNOS 蛋白表达影响的电泳图见图 2，对 NO 水平和
磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，再电转膜至硝酸纤
nNOS蛋白表达量的影响见表1。
维素膜上。将膜以5％脱脂牛奶在室温下封闭2 h后，分
别加入 Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、nNOS 一抗（稀释 nNOS
度均为1∶1 000）以及β-actin抗体（稀释度为1∶5 000），于
4 ℃孵育过夜；次日加入二抗（稀释度为 1 ∶ 2 000），在室 β-actin
温下孵育 1 h。加入 ECL 化学发光试剂后，采用凝胶成 对照组 甲基苯丙胺组 常规剂量 加倍剂量
天麻素组 天麻素组
像仪进行曝光，采用 Image J V1.8.0 软件分析蛋白条带 图2 天麻素注射液对大鼠纹状体中nNOS蛋白表达影
灰度值，以目标蛋白与内参β-actin的灰度值比值作为目 响的电泳图
标蛋白的表达量。 Fig 2 Electrophoretogram of the effects of Gastrodin
2.7 统计学方法 injection on the protein expression of nNOS in
采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。计量资 striatum of rats

·1174 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 10 中国药房 2020年第31卷第10期