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2.7 沙苑子多糖对软骨细胞中 TGF-β 1、BMP-2 蛋白表 率均显著降低（P＜0.05），沙苑子多糖低剂量组细胞培
达水平的影响考察 养 24、48、72、96 h 后细胞增殖抑制率均显著升高（P＜
采用 Western blotting 检测。将软骨细胞以 1×10 6 0.05），沙苑子多糖中剂量组细胞培养 24、48、72、96 h 后
个/孔接种于 6 孔板中，按“2.2”项下方法进行分组和给 细胞增殖抑制率差异无统计学意义，详见表1。
药，每组设置 5 个复孔，于 5％CO2、37 ℃条件下培养 72 表1 各组细胞增殖抑制率测定结果（x±±s，n＝5，％％）
h。收集细胞至 1.5 mL 离心管中，加入 1 mL 细胞裂解 Tab 1 Results of cell proliferation inhibition rate for
液，于 4 ℃摇床上裂解 4 h，再于 4 ℃条件下以 12 000 cells in each group（x±±s，n＝5，％％）
r/min离心10 min，取上清进行BCA蛋白定量。取蛋白， 组别 24 h 48 h 72 h 96 h
正常对照组 0 0 0 0
进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶电
阳性对照组 －7.48±1.25 ＊ －12.75±2.20 ＊ －23.54±4.17 ＊ －32.40±5.31 ＊
泳，再转移至 PVDF 膜，室温封闭 2 h 后，加入 TGF-β 1、 沙苑子多糖高剂量组 －9.86±1.22 ＊# －15.98±3.01 ＊# －26.83±4.54 ＊# －41.86±5.92 ＊#
BMP-2一抗（1∶1 000），孵育过夜；以TBST缓冲液洗膜3 沙苑子多糖中剂量组 －7.45±1.19 ＊ －12.82±2.22 ＊ －23.20±4.19 ＊ －33.18±5.63 ＊
次，每次5 min；再加入相应二抗（1 ∶ 10 000），室温孵育2 沙苑子多糖低剂量组 －5.63±1.02 ＊# －9.83±1.08 ＊# －20.85±4.26 ＊# －28.77±5.49 ＊#
#
＊
h；以 TBST 缓冲液洗膜 2 次，每次 5 min；然后加入化学 注：与正常对照组比较，P＜0.05；与阳性对照组比较，P＜0.05
＊
Note：vs. normal control group， P＜0.05；vs. positive control
发光液，以β-actin 为内参，采用化学发光成像系统分析
#
group，P＜0.05
蛋白条带的相对灰度值来表示目的蛋白的表达水平。
3.3 细胞周期检测结果
2.8 统计学方法 与正常对照组比较，阳性对照组和沙苑子多糖高、
采用SPSS 23.0软件进行试验数据分析。计量资料 中、低剂量组 G1/G0期细胞百分比均显著降低，S 期细胞
以 x±s 表示，多组间数据比较采用单因素方差分析，组 百分比均显著升高（P＜0.05）。与阳性对照组比较，沙
间两两比较采用SNK-q检验，组内不同时间点数据比较 苑子多糖高剂量组G1/G0期细胞百分比显著降低，S期细
采用t检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。
胞百分比显著升高（P＜0.05）；沙苑子多糖低剂量组G1/G0
3 结果 期细胞百分比显著升高，S期细胞百分比显著降低（P＜
3.1 细胞形态观察结果 0.05）；沙苑子多糖中剂量组 G1/G0期和 S 期细胞百分比
软骨细胞培养0 h时，细胞呈现球形悬浮状态；培养 差异无统计学意义，详见图2、表2。
48 h时，大部分细胞已出现贴壁，细胞形态拉长，呈多角
1 600 1 600 G1/G0：63.12％
形，偶见椭圆形贴壁细胞；培养 72 h 时，细胞融合成单 G1/G0：75.12％ G2/M：7.21％
G2/M：3.73％
1 200 S：21.15％ 1 200 S：29.67％
层，多数呈现细长梭型外观，少部分仍为椭圆形外观，表 个 个
明软骨细胞分离培养成功，详见图1。 细胞数量， 800 细胞数量， 800
400 400
0 0
0 40 80 120 160 0 40 80 120 160
DNA含量，％ DNA含量，％
A.正常对照组 B.阳性对照组
1 600 1 600
G1/G0：57.62％ G1/G0：63.33％
G2/M：8.85％ G2/M：7.51％
1 200 S：33.53％ 1 200 S：29.16％
A. 培养0 h B. 培养48 h 个 个
细胞数量， 800 细胞数量， 800
400 400

0 0
0 50 100 150 200 0 50 100 150 200
DNA含量，％ DNA含量，％
C.沙苑子多糖高剂量组 D.沙苑子多糖中剂量组
1 600
C. 培养72 h G1/G0：68.45％
G2/M：7.71％
图1 软骨细胞的形态学显微图（×100） 个 1 200 S：23.84％
Fig 1 Micrograph cell morphology of fibrochondro- 细胞数量， 800
cytes（×100） 400
3.2 细胞增殖抑制率测定结果
0
与正常对照组比较，阳性对照组和沙苑子多糖高、 0 50 100 150 200
DNA含量，％
中、低剂量组细胞培养 24、48、72、96 h 后的细胞增殖抑 E.沙苑子多糖低剂量组
制率均显著降低（P＜0.05）；与阳性对照组比较，沙苑子 图2 各组细胞周期流式图
多糖高剂量组细胞培养24、48、72、96 h后细胞增殖抑制 Fig 2 Cell cycle flow charts for cells of each group

·1100 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 9 中国药房 2020年第31卷第9期