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类、蒺藜皂苷类等有效成分            [4-5] ，具有抗氧化、改善血糖等          2 方法与结果
        作用  [6-10] 。由于藏医经典文献中并未记载其具体的制备                     2.1 四味姜黄汤中10种成分的含量测定
        方法，为此本研究前期按照《古代经典名方中药复方制                            2.1.1  色谱条件      色谱柱：Capcell Pak C18-MGⅡ（250
                                [11]
        剂简化注册审批管理规定》 中经典名方物质基准及经                            mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：乙腈（A）-0.1％磷酸水溶液
        典名方制剂的要求，同时参考《医疗机构中药煎药室管                           （B），梯度洗脱（0～8 min，3％A；8～15 min，3％A→17％
                [12]
        理规范》 制备了藏药四味姜黄汤，并以方中生物碱类                            A；15～20 min，17％ A；20～33 min，17％ A→19％ A；
        成分木兰花碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、盐酸小檗碱，                           33～38 min，19％A→25％A；38～48 min，25％A；48～
        多酚类成分没食子酸、柯里拉京、鞣花酸，姜黄素类成分                           70 min，25％A→80％A）；流速：1.0 mL/min；进样量：10
        双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素等为指标，                           µL；柱温：30 ℃；检测波长：270 nm（0～60 min，没食子
        建立了测定上述成分含量的高效液相色谱法（HPLC）；                          酸、柯里拉京、木兰花碱、鞣花酸、盐酸药根碱、盐酸巴马
        通过 Box-Behnken 响应面法对其煎煮工艺进行优化，以                     汀、盐酸小檗碱）、420 nm（60～70 min，双去甲氧基姜黄
        得到符合临床用药要求的液体制剂，并为藏药四味姜黄                            素、去甲氧基姜黄素、姜黄素） 。
                                                                                     [13]
        汤的新药研究提供参考。                                         2.1.2  混合对照品溶液的制备           精密称取没食子酸、柯
        1 材料                                                里拉京、木兰花碱、鞣花酸、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐
        1.1 仪器                                              酸小檗碱、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素
            1260型HPLC仪，包括G1311B型四元泵、内置真空
                                                            对照品各适量，加甲醇溶解制成含上述各对照品质量浓
        脱气机、G1329B 型标准自动进样器、G1315D 型二极管                     度分别为1.403、1.448 1、1.604、0.58、0.757、0.666、0.923、
        阵列检测器、G1316A型柱温箱、Chemstation色谱工作站
                                                            0.510、0.721、0.819 mg/mL的单一对照品溶液；取上述各
        （美国 Agilent 公司）；UPH-I-10T 型优普纯水制造系统
                                                            单一对照品溶液适量，加甲醇释释，制成上述各对照品
        （成都超纯科技有限公司）；DZKW-4型电子恒温水浴锅
                                                            质量浓度分别为 140.3、144.8、160.4、58、9.462 5、6.66、
        （北京中兴伟业仪器有限公司）；CPA225D 型十万分之
                                                            46.15、12.75、18.025、20.475 µg/mL 的混合对照品溶液，
        一、BSA124S 型万分之一电子分析天平[赛多利斯科学                        于4 ℃冷藏，备用。
        仪器（北京）有限公司]；RE-2000A型旋转蒸发器（上海亚
                                                            2.1.3  供试品溶液的制备         按处方比例称取姜黄、小檗
        荣生化仪器厂）。
                                                            皮、余甘子、蒺藜饮片共60 g，加入8倍量（mL/g）水，浸泡
        1.2  药品与试剂
                                                            60 min 后，煎煮 2 次，每次 65 min，趁热过滤，合并滤液。
            没食子酸对照品（批号：DST180226-008，纯度：≥
                                                            室温下取滤液 1 mL，98～100 ℃水浴挥干，加甲醇溶解
        99％）、柯里拉京对照品（批号：DST170313-012，纯度：≥
        98％）、鞣花酸对照品（批号：DST170105-004，纯度：≥                   并定容至5 mL量瓶中，摇匀，经0.45 µm滤膜滤过，取续
                                                            滤液，即得。
        98％）、双去甲氧基姜黄素对照品（批号：DST171220-21，
                                                            2.1.4  阴性对照溶液        按藏药四味姜黄汤的处方比例
        纯 度 ：≥98％）、去 甲 氧 基 姜 黄 素 对 照 品（批 号 ：
                                                            分别称取各单味药材饮片，按“2.1.3”项下方法分别制备
        DST171220-30，纯度：≥98％）均购自成都德思特生物技
                                                            缺姜黄、小檗皮、余甘子、蒺藜的阴性对照溶液。
        术有限公司；姜黄素对照品（成都曼斯特生物科技有限
        公司，批号：MUST-16050404，纯度：≥99.59％）；盐酸小                 2.1.5 空白对照溶液        以甲醇为空白对照溶液。
                                                            2.1.6  系统适用性试验        取上述混合对照品溶液、供试
        檗碱对照品（批号：Y-035-171216，纯度：＞98％）、盐酸巴
        马汀对照品（批号：Y-156170227，纯度：＞98％）、木兰花                   品溶液、阴性对照溶液各适量，按“2.1.1”项下色谱条件
        碱对照品（批号：M-026170913，纯度：＞98％）、盐酸药根                   进样，记录色谱图，详见图 1。由图 1 可知，各待测成分
        碱对照品（批号：Y-023-171216，纯度：＞98％）均购自成                   基线分离，分离度均大于1.5，其他杂质成分对待测成分
        都瑞芬思生物科技有限公司；乙腈、磷酸为色谱纯，其余                           无干扰，阴性对照对测定亦无干扰，理论板数以没食子
        试剂均为分析纯，水为饮用水（煎煮用）或纯化水（色谱                           酸峰计不低于5 000。
        分析用）。                                               2.1.7  线性关系考察       取“2.1.2”项下混合对照品溶液，
            姜黄饮片（批号：180601231）、蒺藜饮片（批号：                     按“2.1.1”项下色谱条件分别进样2、4、6、8、10、12 µL，记
        190100791）均购自成都康美药业有限公司；余甘子饮片                       录峰面积。以各待测成分进样量（x，µg）为横坐标、峰面
        （批号：20180704）购自成都荷花池药材市场；小檗皮饮                       积（y）为纵坐标进行线性回归，结果见表1。
        片（批号：20190609001）购自青海省西宁市药材市场，均                     2.1.8  定量限与检测限考察           取“2.1.2”项下混合对照
        经成都中医药大学药学院赖先荣教授鉴定，分别为姜科                            品溶液，以甲醇倍比稀释，按“2.1.1”项下色谱条件进样，
        植物姜黄（Curcuma longa L.）的干燥根茎、蒺藜科植物                   以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1分别计算定量限、检测限。结果，没
        蒺藜（Tribulus terrestris L.）的干燥成熟果实、大戟科植              食子酸、柯里拉京、木兰花碱、鞣花酸、盐酸药根碱、盐酸
        物余甘子（Phyllanthus emblica L.）的干燥果实、小檗科               巴马汀、盐酸小檗碱、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄
        植物刺红珠（Berberis dicryophylla Franch.）的干燥内皮。          素、姜黄素的定量限分别为 0.28、14.48、3.21、11.60、


         ·914  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 8                                  中国药房    2020年第31卷第8期
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