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表4 加样回收率试验结果（n＝6） 2.5 聚类分析
Tab 4 Results of recovery tests（n＝6） 采用Excel 2007软件汇总含量测定原始数据。结果
编号 氨基酸 加样回收率范围，％ 平均加样回收率，％ RSD，％ 显示，海藻真品及其混伪品中均含有所测出 17 种氨基
1 Asp 97.41～101.82 99.25 1.90 酸，且各氨基酸成分含量与总氨基酸含量的变化趋势保
2 Thr 95.76～101.62 98.75 2.15
3 Ser 97.52～103.40 99.74 2.11 持一致，其中Glu、Asp、Leu、Ala、Gly、Val含量相对较高，
4 Glu 98.39～102.51 100.03 1.44 且包括2种人体必需氨基酸。采用PASW Statistics 18.0
5 Gly 98.54～101.82 100.38 1.38 软件，根据17种氨基酸含量使用组间联接的聚类方法对
6 Ala 97.44～100.58 99.44 1.30 18 批样品进行聚类分析，以“平方 Euclidean 距离”为度
7 Cys 88.44～92.88 90.60 1.92
8 Val 93.41～99.18 95.81 2.08 量标准，绘制海藻及其混伪品中氨基酸含量的树状图，
9 Met 93.52～98.38 95.97 1.63 见图2。
10 Ile 96.80～99.24 97.96 1.03 由图 2 可知，18 批样品可聚为 4 类，S1～S6 一类，
11 Leu 99.58～102.98 101.56 1.45 S7～S9聚为一类，S10～S12、S16～S18聚为一类，S13～
12 Tyr 93.52～96.23 95.11 1.07
13 Phe 95.81～98.18 97.11 0.88 S15聚为一类，与种源鉴定结果相符，表明本方法可将海
14 His 92.92～96.43 95.09 1.66 藻与其混伪品区别。
15 Lys 92.48～98.05 96.36 2.14 3 讨论
16 Arg 96.71～99.20 97.93 1.06
17 Pro 96.24～98.90 97.63 0.93 3.1 氨基酸分析检测方法的选择
表5 18批样品中的氨基酸含量结果（n＝3，mg/g）
Tab 5 Results of content determination of amino acids in 18 batches of samples（n＝3，mg/g）
样品编号 Asp Thr Ser Glu Gly Ala Cys Val Met Ile Leu Tyr Phe His Lys Arg Pro 氨基酸总含量
S1 9.589 3.486 3.437 13.66 5.334 6.254 0.608 1 5.098 1.255 4.054 7.622 1.671 4.765 2.978 4.669 3.889 4.489 82.85
S2 9.548 4.530 4.281 10.94 4.903 6.162 0.583 0 4.820 1.839 3.743 7.189 2.426 4.554 3.722 4.433 3.597 3.931 81.20
S3 10.71 4.894 4.497 12.07 5.382 6.263 0.584 3 5.047 1.753 3.914 7.316 2.154 4.549 3.314 4.293 4.076 3.942 84.76
S4 10.20 4.535 4.409 13.45 4.980 6.376 0.462 2 4.775 1.881 3.742 7.124 2.195 4.406 3.062 4.539 3.989 3.799 83.93
S5 9.140 4.748 4.088 11.77 4.529 6.137 0.451 4 4.506 1.781 3.615 6.771 2.076 4.134 3.454 4.545 4.033 7.093 82.57
S6 10.48 4.506 4.289 11.69 5.189 6.133 0.590 2 5.136 1.834 3.947 7.397 2.070 4.533 3.981 4.189 3.937 2.505 82.61
S7 13.41 6.134 6.227 15.90 7.233 8.200 0.468 0 6.380 2.612 5.076 9.842 3.206 6.017 3.395 5.580 5.356 5.380 110.4
S8 12.78 4.998 5.091 13.96 6.102 7.567 0.448 3 5.667 1.800 4.520 8.561 2.380 5.225 3.080 5.355 4.860 5.044 97.43
S9 12.01 5.680 5.279 13.82 6.194 7.168 0.441 2 5.879 2.329 4.555 8.708 2.577 5.319 3.586 5.078 4.906 3.672 97.20
S10 8.962 3.767 3.538 8.397 3.544 3.960 0.788 1 3.745 1.081 2.468 4.844 1.942 3.202 4.404 3.509 2.278 2.916 63.34
S11 9.017 3.911 3.713 9.070 3.796 4.517 0.564 3 3.778 1.137 2.696 5.192 1.822 3.399 3.911 3.716 2.571 3.758 66.57
S12 8.194 3.818 3.395 8.787 3.576 4.273 0.769 4 3.573 1.090 2.575 4.954 1.675 3.178 4.094 3.280 2.316 3.022 62.58
S13 4.910 2.281 2.196 5.839 2.602 3.015 0.348 5 2.487 0.746 1 1.872 3.631 1.100 2.234 1.390 1.594 1.666 2.004 39.92
S14 5.875 2.632 2.573 6.855 3.078 3.446 0.406 3 2.747 0.900 2 2.094 4.093 1.276 2.522 1.693 1.655 1.934 2.308 46.09
S15 5.113 2.438 2.262 6.131 2.757 3.173 0.344 1 2.683 0.786 0 1.979 3.847 1.030 2.305 1.749 2.193 1.841 2.263 42.89
S16 7.000 3.207 3.213 14.31 3.599 4.907 0.379 0 3.271 1.156 2.425 4.731 1.547 3.117 2.089 2.954 2.461 2.681 62.05
S17 7.131 3.271 3.041 8.393 3.214 4.856 0.579 2 3.644 1.423 2.770 4.959 1.498 3.058 4.485 3.267 2.613 2.530 60.73
S18 7.800 3.486 3.319 9.132 3.549 5.314 0.452 4 3.703 1.261 2.782 5.301 1.508 3.307 3.147 3.419 3.024 2.885 63.39
0 5 10 15 20 25 由于大多数氨基酸本身不具有紫外吸收和荧光发
S10
S12 射的特性，所以通常需要将其衍生化后再采用仪器测
S18 定，常用方法主要为高效液相色谱法 、气相色谱法 、
[24]
[23]
S17
[25]
S11 分光光度法 、近红外法 [26] 、高效阴离子交换色谱积分
S16
[27]
[22]
S13 脉冲安培检测法 、氨基酸分析仪测定法等 ，各有优缺
S15
S14 点。例如，气相色谱法是将氨基酸衍生为易气化的物质
S2 进行分析，虽然方法灵敏度高、分析时间短，但衍生试剂
S6
S3 种类少、衍生操作复杂；近红外法虽然样品前处理简便，
S4
S1 但检测灵敏度低、定量准确度差。氨基酸分析仪测定法
S5 作为液相色谱分析法中重要的一类，专为氨基酸分析而
S8
S9 设计，它是一种柱后衍生法，先采用阳离子交换树脂分
S7
平方Euclidean距离 离氨基酸混合物，再以柱后茚三酮衍生法进行样品检
图2 18批样品中17种氨基酸含量聚类分析树状图 测。该方法前处理过程简单、操作简便、检测稳定性和
Fig 2 Cluster analysis diagram of contents of 17 重复性好。为此，本试验采用氨基酸分析仪检测海藻及
kinds of amino acids in 18 batches of samples 其混伪品中氨基酸含量。
中国药房 2020年第31卷第4期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 4 ·471 ·