Page 82 - 2020年2月第31卷第3期

去除药物后 72 h，取每组 4 只家兔（雌雄各半）麻醉 表4 皮肤过敏性评价标准
处死，剪取给药部位皮肤及皮下组织，采用组织标本固 Tab 4 Evaluation criteria of skin sensitization
定液[FAA 液，组成：乙醇-甲醛-冰乙酸-纯化水（70 ∶ 10 ∶ 过敏反应发生率，％ 分级 过敏反应强度
5 ∶ 15，V/V/V/V）]固定，然后进行脱水、透明及浸蜡，常规 0～8 Ⅰ 弱致敏
9～28 Ⅱ 轻度致敏
石蜡包埋切片，苏木精-伊红（HE）染色，中性树胶封片，
29～64 Ⅲ 中度致敏
光学显微镜检查，在100倍下采集病理图像；每组剩余2 65～80 Ⅳ 强致敏
只家兔在停药 7 d 后吸入二氧化碳安乐死，取给药部位 81～100 Ⅴ 极强致敏
皮肤作组织病理学检查，以评价药物引起的病理改变及 注：当过敏反应发生率为0时，可判定为未见皮肤过敏反应
其恢复情况。 Note：If the incidence of skin sensitization is“0”，it’s considered
2.1.4 统计学分析 对每天家兔刺激性评分的积分采 to no skin sensitization
2.2.3 观察指标 激发给药去除封闭片24、48 h后观察
用SPSS 16.0统计软件进行Wilcoxon（给药侧与对照侧比
豚鼠皮肤红斑、水肿等过敏反应症状并评分，并将各组
较）或 Mann-Whitney U（供试品与市售品）检验分析。
P＜0.05表示差异有统计学意义。 出现过敏反应症状（评分＞0）的豚鼠数用于计算过敏反
2.2 豚鼠皮肤过敏实验 应发生率（过敏反应发生率＝该组发生过敏反应的豚鼠
2.2.1 分组与给药 参考 2014 年颁布的《药物刺激性、 数/该组豚鼠总数×100％），根据过敏反应发生率判断过
过敏性和溶血性研究技术指导原则》及相关文献方法 [4-5] 敏反应强度。
开展豚鼠皮肤过敏实验（Buehler 实验）。取豚鼠 60 只， 2.2.4 统计学分析 每天观察豚鼠刺激评分采用SPSS
随机分为4组，分别为供试品组、市售品组、阳性对照组 16.0统计软件进行分析检验，评分用Kruskal-Wallis检验
2
（2，4-二硝基氯苯，致敏浓度 1％，激发浓度 0.1％）和赋 分析，率用χ 检验分析。P＜0.05 表示差异有统计学
形剂对照组，其中供试品组和市售品组各20只，其余各 意义。
组均为10只，雌雄各半。每次致敏前一日用剪刀去除豚 3 结果
鼠左侧肋腹部被毛 3 cm×3 cm 范围，然后用 6％硫化钠 3.1 家兔皮肤刺激性实验结果
溶液脱毛，激发前一日以相同方法对右侧肋腹部脱毛。 供试品和市售品完整皮肤组家兔在给药期间和恢
致敏给药：分别于第0、7、14天（共3次）在豚鼠左侧肋腹 复观察期间，给药侧和对照侧均未出现红斑、水肿等刺
部剃毛区域涂抹相应组别药物，0.2 mL/只，取两片面积为 激性症状，皮肤刺激评分为 0，皮肤刺激强度为无刺激
2 cm×2 cm 的滤纸置于剃毛区域皮肤上，用两层纱布 性。供试品和市售品破损皮肤组家兔在给药第1天去除
（2.5 cm×2.5 cm）和一层牛皮纸覆盖，再用无刺激性胶布 药物1 h后均有个别受试家兔给药侧和对照侧出现短暂
将牛皮纸固定，然后用绷带沿豚鼠给药部位身体缠绕 性轻微的红斑，第5天给药前该症状消失，皮肤刺激评分
2～3 圈加以固定，致敏给药 6 h 后用温水洗去药物。激 为 0～0.33 分，皮肤刺激强度为无刺激性。统计分析结
发给药：第28天在右侧肋腹部给药，操作同致敏给药。 果显示，供试品和市售品组家兔的给药侧与对照侧的皮
2.2.2 皮肤过敏反应评分与评价标准 按《药物刺激 肤刺激评分比较，供试品完整皮肤组与市售品完整皮肤
[4]
性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》 中豚鼠 Bue-
组的皮肤刺激评分比较，供试品破损皮肤组与市售品破
hler 实验的评分标准及评价标准进行皮肤过敏性评价。
损皮肤组的皮肤刺激评分比较，差异均无统计学意义
皮肤过敏反应评分标准见表 3，皮肤过敏性评价标准见
（P＞0.05）。多次给药（7 d）后家兔皮肤刺激评分见表5，
表4。
皮肤刺激强度评分见表6。
表3 皮肤过敏反应评分标准
表5 多次给药后家兔皮肤刺激评分（x±±s，n＝6）
Tab 3 Scoring criteria of skin sensitization
Tab 5 Scores of rabbit skin irritation by multiple
皮肤反应 分值
红斑形成 medication（x±±s，n＝6）
无红斑 0 皮肤刺激反应评分，分
轻微可见红斑 1 组别 区域 结束给药后
中度红斑 2 1 d 2 d 3 d 4 d 5 d 6 d 1 h 24 h 48 h 72 h
重度红斑 3 供试品完整 给药侧 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
水肿性红斑 4 皮肤组 对照侧 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
水肿形成 市售品完整 给药侧 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
无水肿 0 皮肤组 对照侧 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
轻度水肿 1 供试品破损 给药侧 0.25±0.39 0.33±0.52 0.33±0.52 0.13±0.31 0 0 0 0 0 0
中度水肿 2 皮肤组 对照侧 0.25±0.39 0.33±0.52 0.17±0.41 0.17±0.41 0 0 0 0 0 0
重度水肿 3 市售品破损 给药侧 0.25±0.39 0.33±0.52 0.17±0.41 0.17±0.41 0 0 0 0 0 0
总分值 7 皮肤组 对照侧 0.25±0.39 0.33±0.52 0.33±0.52 0.17±0.41 0 0 0 0 0 0

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