Page 65 - 2020年2月第31卷第3期

structure of cell were sloop，the cell structure was loose，and most of the cell contour disappeared and became round. The
formation rate of cell clone was decreased significantly（P＜0.01）. The percentage of G2 phase cells increased significantly（P＜
0.01），while that of G1 and S phase cells decreased significantly（P＜0.05）. The apoptotic rate of cells increased significantly in
early and late stage（P＜0.05）. Relative protein expression of EGFR and PKC-α were decreased significantly（P＜0.01）. Compared
with TE-1/EC-1 Muskmelon Pedicel water extract group，formation rate of cell clone was decreased significantly in TE-1/EC-1
Muskmelon Pedicel ethanol extract group （P＜0.05）；cell was increased significantly at G2 phase （P＜0.05）；relative protein
expression of EGFR and PKC-α were decreased significantly（P＜0.01）. The apoptotic rate of cells in early and late stage in TE-1
Muskmelon Pedicel ethanol extract group was decreased significantly（P＜0.05），the apoptotic rate of cells in early and late stage
in EC-1 Muskmelon Pedicel ethanol extract group was increased significantly（P＜0.05）. CONCLUSIONS：Water extract and
ethanol extract of Muskmelon Pedicel could influence the proliferation，migration and clone formation ability of TE-1 and EC-1
cell，promote cell apoptosis，the mechanism of which may be associated with the down-regulation of EGFR and PKC-α protein.
KEYWORDS Muskmelon Pedicel；Esophageal carcinoma；Water extract；Ethanol extract；Cell proliferation；Cell migration；
Cloning formation；Mechanism

食管癌是全球十大癌症之一，2018 年新增病例 公司）；RE5299FACSCalibur 型流式细胞仪（美国 BD 公
572 000 例 ，死 亡 率 居 全 球 第 6 位 ，5 年 生 存 率 低 于 司）；BPN-80CW型细胞培养箱（美国Kendro 公司）；Ax-
[3]
20％ [1-2] ，其中亚洲是食管癌的高发区 。由于对食管癌 iovert20型倒置显微镜（德国Zeiss公司）。
发病机制的认识有限，目前缺乏特异性的临床诊断指 1.2 药品与试剂
标，加之其早期症状不典型，故大部分患者确诊时已处 瓜蒂药材（批号：20103112）购自河南本草国药馆，
于中晚期，错失了手术机会；而且临床化疗副作用较大， 经河南中医药大学药学院陈随清教授鉴定为真品；RP-
[4]
化疗耐药不断出现，致使化疗效果欠佳 。虽然近几年 MI1640 培养基（美国 Gibco 公司，批号：1877236）；胎牛
出现了针对表皮生长因子受体（EGFR）、程序性细胞死 血清（澳大利亚 AusGenex 公司，批号：FBSSA00518-2）；
亡蛋白 1 通路（PD1-PDL1）等的靶向治疗方法 [5-6] ，但肿 MTT（批号：511C023）、胰蛋白酶（批号：20326B）均购自
瘤的发生发展涉及多阶段、多个基因及多条信号通路的 美 国 Sigma 公 司 ；乙 二 胺 四 乙 酸（EDTA，批 号 ：
异常，机制复杂，致使靶向药物的研发和应用也受到限 0105-1KG）、二甲基亚砜（DMSO，批号：821D036）均购
制，大部分食管癌患者仍然不能得到有效的治疗 。 自美国 Amresco 公司；青霉素干粉（华北制药股份有限
[7]
为寻找抗肿瘤作用的有效新药，本课题组前期以人 公司，批号：H20013036，规格：80 万单位）；链霉素干粉
食管癌细胞为模型，做了大量的中药方剂筛选，发现《伤 （山东鲁抗股份有限公司，批号：120913，规格：100 万单
[8]
寒论》中瓜蒂散水提物能够明显抑制食管癌细胞增殖 。 位）；流式细胞周期检测试剂盒（江苏凯基生物技术股份
瓜蒂是葫芦科植物甜瓜（Cucumis melo L.）的果蒂，其性 有限公司，批号：KGA511-KGA512）；流式细胞凋亡检测
味苦寒有毒，归足阳明胃经，具有涌吐痰食、祛湿退黄的 试 剂 盒（杭 州 联 科 生 物 技 术 股 份 有 限 公 司 ，批 号 ：
[9]
功效 。有研究发现，瓜蒂水提物、醇提物对人胃腺癌 AP101）；兔抗EGFR单克隆抗体（批号：GR320346-9）、兔
SGC-7901 细 胞 、人 肺 癌 NCI-H460 细 胞 、人 肝 癌 抗 PKC-α单克隆抗体（批号：GR316444-6）、兔抗人肌动
SMMC-7721细胞、人白血病K562细胞及小鼠成纤维细 蛋白β（β-actin）单克隆抗体（批号：GR3176819-2）均购自
胞 L929 的增殖有明显抑制作用 。其主要成分葫芦素 英国Abcam公司；山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二抗（北
[10]
类成分，也具有强大的抗肿瘤作用，同时可以降压、抑制 京康为世纪生物科技有限公司，批号：00051405）；水为
心肌收缩力、减慢心律及抗炎 [11-13] 。 超纯水。
为了进一步明确瓜蒂抗食管癌细胞的主要成分及 1.3 细胞
机制，笔者研究瓜蒂水提物和醇提物对人食管癌 TE-1、 人食管癌细胞株 TE-1、EC-1 为河南中医药大学中
EC-1 细胞的增殖、迁移、克隆形成、细胞周期、细胞凋亡 医方证信号传导重点实验室保存。
的影响；同时考察其对细胞EGFR及其下游的中心分子 2 方法与结果
蛋白激酶 C-α（PKC-α）蛋白表达的影响，进行初步的分 2.1 瓜蒂提取物的制备
子机制研究，以期为瓜蒂临床应用及新药研发提供参考。 2.1.1 瓜蒂水提物 称取瓜蒂药材20 g，加入350 mL水
1 材料 浸泡 1 h，武火煮沸，文火煎煮约 1 h，放至室温后过滤，
1.1 仪器 55 ℃旋蒸至药液浓稠，50 ℃真空干燥 48 h 后刮取药物
xCElligence型实时无标记细胞功能分析（RTCA）仪 粉末、称质量，得率为 141.2 mg/g；取适量瓜蒂水提物粉
（美国ACEA生物公司）；ELx800型酶标仪（美国Bio-Tek 末用DMSO适量溶解，加水制成质量浓度为300 mg/mL

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