Page 60 - 2020年2月第31卷第3期

表1 20批西洋参样品信息 100
Tab 1 Information of 20 batches of P. quinquefolium 80
samples ％ 60
样品编号 批号 部位 产地 总皂苷含量，％ 死亡率， 40
1 2018001 支根 中国山东 4.45
2 2018002 主根 中国山东 2.98 20
3 2018003 短主根 加拿大魁北克 3.72 0
4 2018004 短主根 加拿大魁北克 4.22 空白对照组 1 μg/mL 5 μg/mL 10 μg/mL 25 μg/mL 50 μg/mL 100 μg/mL 200 μg/mL 400 μg/mL 800 μg/mL
5 2018005 支根 加拿大魁北克 3.47
6 2018006 支根 中国山东 3.61 西洋参提取物组
7 2018007 支根 中国山东 4.01 图1 斑马鱼对西洋参提取物的耐受性考察结果
8 2018008 主根 美国威斯康辛州 4.62
9 2018009 主根 美国威斯康辛州 4.02 Fig 1 Tolerance result of Zebra fish to P. quinquefo-
10 2018010 主根 中国吉林 3.83 lium extract
11 2018011 主根 中国吉林 3.50
12 2018012 主根 中国吉林 3.72 时，斑马鱼幼鱼死亡率均为 0；当西洋参提取物质量浓
13 2018013 主根片 中国吉林 2.57 度≥100 µg/mL 时，斑马鱼幼鱼死亡率随着西洋参提取
14 2018014 主根片 中国吉林 3.75
15 2018015 主根 中国吉林 3.11 物质量浓度的增加而升高。回归分析结果显示，西洋参
16 2018016 短主根 美国威斯康辛州 3.51 提取物的最低致死质量浓度为44.18 µg/mL。为了保证
17 2018017 大号主根 美国威斯康辛州 3.11 实验过程中斑马鱼的正常存量，故将西洋参提取物的给
18 2018018 主根 美国威斯康辛州 2.78
19 2018019 细长条主根 美国威斯康辛州 3.16 药质量浓度设为5、10、25 µg/mL（以生药量计）进行后续
20 2018020 硬质主根 美国威斯康辛州 2.94 心脏保护作用研究。
回流提取 2 h，放冷，再次称质量，用 70％乙醇补足减失 2.4 特非那定对斑马鱼心脏形态的影响考察
的质量，摇匀，滤过，取续滤液25 mL，蒸干。干燥提取物 将发育至24 hpf的斑马鱼受精卵用1 mg/mL链酶蛋
以二甲基亚砜（DMSO）溶解，制成质量浓度为50 mg/mL 白酶 E 脱膜后，体式显微镜下筛选发育正常的幼鱼，然
（以生药量计）的西洋参提取物母液，置于4 ℃冰箱中保 后随机置于 24 孔板中，每孔 10 条。将实验分为不同质
存备用。给药前，取适量母液用蒸馏水稀释为所需质量 量浓度特非那定组（2、2.5、3、4 µg/mL）和空白对照组
浓度。 （0.5％DMSO），每组平行 2 孔（即每组 20 条斑马鱼样
2.2 斑马鱼胚胎的收集 本）。加盖后将斑马鱼置于 28 ℃恒温光照培养箱中孵
实验前将斑马鱼按雌雄比例1 ∶ 1或1 ∶ 2放置于产卵 育48 h后，采用体式显微镜观察斑马鱼心脏部位的形态
缸中，采用隔板将雌雄斑马鱼隔开，次日光照前抽离隔 变化。采用 Image Pro-plus 5.0 软件测量斑马鱼心脏
板，使雌雄斑马鱼自由受精。于抽离隔板时计时为0 hpf SV-BA 间距，录像 20 s 观察其心脏律动及血流情况，以
（Hours post fertilization，受精后时间），抽离隔板后 2 h 此来筛选特非那定最优心脏损伤造模剂量。在每组 20
（2 hpf）收集受精卵，置于清洁培养液中滴加适量亚甲基 条斑马鱼样本中剔除死亡、畸形以及数据异常的斑马鱼
蓝溶液，放置于28 ℃恒温光照培养箱中孵育至24 hpf。 样本，以每组11条斑马鱼为统计学分析样本量（n＝11），
2.3 斑马鱼对西洋参提取物的耐受性考察 采用 SPSS 23.0 软件进行单因素方差分析和 t 检验，P＜
将发育至24 hpf的斑马鱼受精卵用1 mg/mL的脱膜 0.05 表示差异有统计学意义。不同质量浓度特非那定
剂链酶蛋白酶E脱膜处理，体式显微镜下筛选发育正常 对斑马鱼心脏损伤情况观察结果见图 2，对斑马鱼心脏
的幼鱼，然后置于24孔板中，每孔10条。将实验分为不 SV-BA 间距的影响结果见表2。
同质量浓度西洋参提取物组（1、5、10、25、50、100、200、 结果显示，特非那定给药后引起了斑马鱼心脏损
400、800 µg/mL，以 生 药 量 计）和 空 白 对 照 组（0.5％ 伤，包括心包水肿、血细胞在心房心室堆积、卵黄囊下出
DMSO），每组平行 2 孔（即每组 20 条斑马鱼样本）。加 现明显淤血、心房心室律动不齐、血流速度减慢等现象，
盖后将斑马鱼置于 28 ℃恒温光照培养箱中孵育，每隔 各质量浓度特非那定组斑马鱼心脏 SV-BA 间距均较空
24 h更换1次新鲜药液或DMSO。记录给药48 h后斑马 白对照组显著增大（P＜0.05），并且以 2.5 µg/mL 特非那
鱼幼鱼的死亡情况，计算其死亡率，并采用SPSS 23.0统 定组最为明显，故最终选择特非那定的造模剂量为 2.5
计软件通过回归分析计算西洋参提取物的最低致死质 µg/mL。
量浓度，考察斑马鱼对西洋参提取物的耐受性。斑马鱼 2.5 西洋参提取物对斑马鱼的心脏保护作用考察
对西洋参提取物的耐受性考察结果见图1。 将发育至24 hpf的斑马鱼受精卵用1 mg/mL链酶蛋
由图 1 可知，当西洋参提取物质量浓度≤50 µg/mL 白酶 E 脱膜后，体式显微镜下筛选发育正常的幼鱼，然

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