Page 68 - 2020年2月第31卷第3期

由图 4 可知，TE-1/EC-1 空白组在不同的软琼脂层 组细胞的凋亡情况，并用 CellQuest 软件分析细胞凋亡
有多个圆形和类圆形细胞克隆形成，细胞轮廓清晰、结 率。各组细胞凋亡率检测结果见表4。
构紧密、排列整齐、形态规则，TE-1/EC-1 各加药组细胞 表3 各组细胞周期检测结果（x±±s，n＝3）
克隆数明显减少、变小，且克隆球呈现不规则的多边形、 Tab 3 Cell cycle of cells in each group（x±±s，n＝3）
棍棒形，边缘不光滑，结构松散，皱缩变小，轮廓不清晰。 不同细胞周期的百分率，％
组别
表2 各组细胞克隆形成率（x±±s，n＝3） G1期 S期 G2期
TE-1空白组 61.20±1.17 31.52±0.35 7.29±1.49
Tab 2 Colony forming rate of cells in each group（x±± TE-1瓜蒂水提物组 22.94±0.55 ＊＊ 17.55±0.54 ＊＊ 59.52±0.20 ＊＊
s，n＝3） TE-1瓜蒂醇提物组 14.81±0.68 ＊＊# 14.81±0.84 ＊＊# 70.52±0.39 ＊＊#
EC-1空白组 57.12±0.24 32.25±0.80 10.62±0.56
组别 细胞克隆形成率，％ EC-1瓜蒂水提物组 23.10±0.44 ＊＊ 31.96±1.20 44.94±0.78 ＊＊
TE-1空白组 44.13±1.23
EC-1瓜蒂醇提物组 20.62±0.49 ＊＊# 30.50±0.91 ＊＊# 48.88±0.52 ＊＊#
TE-1瓜蒂水提物 24.63±1.52 ＊＊
＊＊
TE-1瓜蒂醇提物 21.17±1.06 ＊＊# 注：与 TE-1/EC-1 空白组比较， P＜0.01；与 TE-1/EC-1 瓜蒂水提
EC-1空白组 48.25±1.11 物组比较，P＜0.05
#
EC-1瓜蒂水提物 25.96±0. 63 ＊＊ Note：vs. TE-1/EC-1 blank group， ＊ ＊ P＜0.01；vs. TE-1/EC-1
EC-1瓜蒂醇提物 23.04±0.95 ＊＊# #
Muskmelon Pedicel water extract group，P＜0.05
＊＊
注：与 TE-1/EC-1 空白组比较， P＜0.01；与 TE-1/EC-1 瓜蒂水提 表4 各组细胞的凋亡率检测结果（x±±s，n＝3）
#
物组比较，P＜0.05
Tab 4 Apoptotic rate of cells in each group（x±±s，n＝
Note：vs. TE-1/EC-1 blank group， ＊ ＊ P＜0.01；vs. TE-1/EC-1
3）
Muskmelon Pedicel water extract group，P＜0.05
#
细胞凋亡率，％
由表 2 可知，与 TE-1/EC-1 空白组比较，TE-1/EC-1 组别
早期凋亡率 晚期凋亡率
瓜蒂各加药组的细胞克隆形成率显著降低（P＜0.01）； TE-1空白组 1.67±0.15 16.00±0.28
与TE-1/EC-1瓜蒂水提物组比较，TE-1/EC-1瓜蒂醇提物 TE-1瓜蒂水提物组 17.24±0.96 ＊ 46.19±0.64 ＊
TE-1瓜蒂醇提物组 12.85±1.29 ＊# 29.90±1.06 ＊#
组细胞克隆形成率显著降低（P＜0.05）。
EC-1空白组 0.88±0.13 16.57±0.61
2.8 瓜蒂水提物和醇提物对两种细胞周期的影响 EC-1瓜蒂水提物组 10.13±0.51 ＊ 35.31±1.20 ＊
将 TE-1、EC-1 细胞以 1×10 个/mL 的浓度接种于直 EC-1瓜蒂醇提物组 15.98±1.39 ＊# 58.51±1.83 ＊#
5
注：与TE-1/EC-1空白组比较，P＜0.05；与TE-1/EC-1瓜蒂水提物
＊
径10 cm的培养皿中，于37 ℃、5％CO2条件下贴壁培养
组比较，P＜0.05
#
24 h 后，将细胞分为 TE-1 空白组、TE-1 瓜蒂水提物组、
＊
Note：vs. TE-1/EC-1 blank group， P＜0.05；vs. TE-1/EC-1 Musk-
TE-1 瓜蒂醇提物组、EC-1 空白组、EC-1 瓜蒂水提物组、
melon Pedicel water extract group，P＜0.05
#
EC-1瓜蒂醇提物组，每组3个平行。各加药组分别加入 由表 4 可知，与 TE-1/EC-1 空白组比较，TE-1/EC-1
含有瓜蒂水提物或醇提物 IC50浓度的药液，空白组加入 各加药组细胞的早、晚期凋亡率均显著升高（P＜0.05）；
RMPI 1640含血清培养基，继续培养48 h后，用15 mL离 与TE-1瓜蒂水提物组比较，TE-1瓜蒂醇提物组早、晚期
心管收集细胞，2 000 r/min 离心 3 min 或弃上清，1 mL 细胞凋亡率均显著降低（P＜0.05）；与 EC-1 瓜蒂水提物
PBS 重悬细胞，加入乙醇固定细胞（终体积分数为 组比较，EC-1 瓜蒂醇提物组早、晚期细胞凋亡率均显著
70％），于4 ℃下过夜。弃掉乙醇，PBS洗去固定液，加入 升高（P＜0.05）。
500 μL PI/RNase A 染色工作液，室温避光孵育 30 min 2.10 瓜 蒂 水 提 物 和 醇 提 物 对 两 种 细 胞 中 EGFR、
后，用 400 目筛网过滤细胞。用流式细胞仪分析各组细 PKC-α蛋白表达的影响
胞的周期，并用 Modifit LT 软件分析不同细胞周期的百 按“2.8”项下方法“将 TE-1、EC-1 细胞以……培养
分率。各组细胞周期的检测结果见表3。 48 h后”操作，收集细胞。采用Western blotting法检测各
组细胞中 EGFR、PKC-α蛋白的表达情况。将所收集的
与 TE-1/EC-1 空白组比较，TE-1/EC-1 各加药组 G2
期细胞百分率显著升高（P＜0.01），G1期、S 期细胞百分 各组细胞处理后上样，进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰
率显著降低（P＜0.05）；与 TE-1/EC-1 瓜蒂水提物组比 胺（SDS-PAGE）凝胶电泳，转膜，封闭，洗涤，加入EGFR、
较，TE-1/EC-1 瓜蒂醇提物组 G2期细胞百分率显著升高 PKC-α一抗（1 ∶ 2 000）孵育，洗涤，加入二抗（1 ∶ 1 000）反
（P＜0.05）。 应，洗涤后，以 ECL 试剂盒进行曝光、显影、定影，洗片。
2.9 瓜蒂水提物和醇提物对两种细胞凋亡的影响 采用 Image 图像分析软件对蛋白的相对表达量进行分
按“2.8”项下方法“将 TE-1、EC-1 细胞以……培养 析，以目标蛋白与内参蛋白（β-actin）的灰度比值表示。
48 h 后”操作，收集细胞，按 Annexin Ⅴ-FITC 细胞凋亡 各组细胞中 EGFR、PKC-α蛋白表达的电泳图见图 5，相
检测试剂盒操作说明处理细胞。用流式细胞仪检测各 对表达量的测定结果见表5。

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