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的瓜蒂水提物母液（以提取物粉末计，下同），再用培养 2.5 瓜蒂水提物和醇提物对两种细胞增殖、迁移的影响
基稀释成4 mg/mL药液，0.22 μm滤头过滤除菌，－20 ℃ 2.5.1 增殖试验 在E-Plate View 16 孔板中加入50 µL
冰箱保存，备用。 无血清培养基，于RTCA DP 监测台检测基线后，在每孔
2.1.2 瓜蒂醇提物 取瓜蒂药材 100 g 于粉碎机中粉 中分别加入 100 µL TE-1 细胞或 EC-1 细胞悬液（1×10 5
碎，按照 1 ∶ 7（m/V）加入 95％乙醇 700 mL，混匀，避光浸 个/mL），于超净台中室温沉降30 min后，放回RTCA DP
泡7 d，每日振荡2次，5 min/次；7 d后过滤，55 ℃旋蒸至 监测台检测各孔细胞指数。持续检测24 h后，将细胞分
药液浓稠，50 ℃真空干燥48 h后刮取药物粉末、称质量， 为 TE-1 空白组、TE-1 瓜蒂水提物组、TE-1 瓜蒂醇提物
得率为52.4 mg/g；取适量瓜蒂醇提物粉末按“2.1.1”项下 组、EC-1 空白组、EC-1 瓜蒂水提物组、EC-1 瓜蒂醇提物
“DMSO溶解……备用”处理，即得。 组，每组4个复孔。各加药组每孔加入5 µL瓜蒂相应的
2.2 细胞培养 水提物或醇提物IC50浓度的药液（空白组不加）后继续检
将细胞置于 37 ℃、5％ CO2培养箱中，用含 10％胎
测各组细胞指数变化，共检测 60 h，记录细胞增殖曲
牛血清的 RPMI1640 培养液进行培养。试验时，细胞用 线。各组细胞的增殖曲线见图1。
含 EDTA 胰蛋白酶进行消化，接种于直径 10 cm 培养皿
8
或 96孔培养板中。 7
6
2.3 统计学方法 5 TE-1空白组
采用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析。计量资 细胞指数 4 3 TE-1瓜蒂水提物组
2 TE-1瓜蒂醇提物组
料以 x±s 表示，多组间比较用单因素方差分析，两组比 1
较采用 t 检验。以概率法 计算半数抑制浓度（IC50 ）。 0 0 10 20 30 40 50 60
[16]
时间，h
P＜0.05表示差异有统计学意义。 A. TE-1细胞
2.4 MTT法检测瓜蒂水提物和醇提物对两种细胞生长 3.5
3.0 EC-1空白组
的抑制作用 2.5
4
将 TE-1、EC-1 细胞以 5×10 个/mL 的细胞浓度接种 细胞指数 2.0 EC-1瓜蒂水提物组
1.5
于 96 孔培养板，于 37 ℃、5％ CO2条件下贴壁培养 24 h 1.0 EC-1瓜蒂醇提物组
0.5
后加入含有瓜蒂水提物和醇提物的含血清培养基，药液 0
0 10 20 30 40 50 60
浓度分别为 0（空白组）、1.562 5、3.125、6.25、12.5、25、 时间，h
B. EC-1细胞
50、100、200 μg/mL（每个浓度平行3孔），继续培养48 h；
图1 各组细胞的增殖曲线
去除培养上清，每孔加入 0.5 mg/mL MTT 溶液 100 μL，
Fig 1 Proliferation curves of cells in each group
继续培养 4 h，弃 MTT 溶液，然后加入 150 μL DMSO。
由图1可知，与TE-1/EC-1空白组比较，瓜蒂水提物
用酶标仪于 570、630 nm 波长处分别测定各孔吸光度
（OD 值），计算两种细胞的生长抑制率（％），细胞生长 或醇提物均能明显抑制 TE-1 细胞或 EC-1 细胞的增殖，
抑制率＝（1－加药组平均 OD 值）/空白组平均 OD 值× 且瓜蒂醇提物对细胞的抑制作用更明显，两种提取物在
100％。两种细胞生长抑制率及IC50测定结果见表1。 加药后30 h内有增殖抑制作用。
表 1 两种细胞生长抑制率及 IC50 测定结果（x±±s， 2.5.2 迁移试验 将细胞分为 TE-1 空白组、TE-1 瓜蒂
n＝3） 水提物组、TE-1 瓜蒂醇提物组、EC-1 空白组、EC-1 瓜蒂
Tab1 Growth inhibitory rate and IC50 of two kinds of 水提物组、EC-1 瓜蒂醇提物组，每组 4 个复孔。在
cells（x±±s，n＝3） CIM-Plate16下室空白组每孔中加入165 μL含血清培养

TE-1细胞 EC-1细胞 基，加药组每孔加入 165 μL 含有瓜蒂水提物或醇提物
指标
瓜蒂水提物组 瓜蒂醇提物组 瓜蒂水提物组 瓜蒂醇提物组 IC50浓度的含血清培养基；CIM-Plate16上室中空白组和
药液浓度，μg/mL 各加药组分别加入30 μL无血清培养基，将CIM-Plate16
0 0 0 0 0
1.562 5 －2.03±0.38 23.81±0.60 3.04±0.24 18.66±0.50 置于培养箱中平衡 1 h。在平衡期间制备两种细胞悬
3.125 7.32±1.06 37.56±0.32 3.37±0.88 40.58±0.57 液，调整细胞悬液浓度均为 6×10 个/mL。CIM-Plate16
5
6.25 27.52±1.30 46.69±1.45 12.95±1.48 47.06±0.69
12.5 36.41±0.69 55.19±0.74 27.71±0.34 51.79±1.61 平衡 1 h 后，于 RTCA DP 监测台上检测基线，后在 CIM-
25 46.08±2.83 66.43±2.38 44.04±1.14 54.10±1.00 Plate16 上室中加入 100 μL 细胞悬液，室温沉降 30 min
50 58.96±0.63 71.70±1.62 49.79±0.88 59.35±0.33 后，将 CIM-Plate16 放回 RTCA DP 监测台继续检测各组
100 59.53±0.22 76.34±0.38 51.35±1.30 67.05±2.50
200 63.59±1.97 82.90±2.28 59.86±1.82 76.86±2.07 细胞指数，共检测 48 h，记录细胞迁移曲线。各组细胞
49.24 9.08 76.38 14.53
IC50 的迁移曲线见图2。

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