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过程，本课题组采用超高效液相色谱串联飞行时间质谱                            2.5.1  色谱条件      色谱柱：ACQUITY UPLC BEH（100
        技术，通过体外人工胃、肠液研究体系，揭示肉苁蓉总苷                           mm×2.1 mm，1.7 µm）；流动相：0.2％甲酸水（A）-乙腈溶
        在体外经胃、肠转化代谢的规律，从体外角度阐明肉苁                            液（B），梯度洗脱（0～2 min，10％→12％B；2～7 min，
        蓉总苷在胃、肠中的代谢过程，为进一步阐明其药效物                            12％B；7～10 min，12％→17％B；10～17 min，17％→
        质基础提供依据。                                            23％B；17～18 min，23％B；18～19 min，23％→25％B；
        1 材料                                                19～20 min，25％→10％B）；流速：0.2 mL/min；检测波
        1.1 仪器                                              长：330 nm；柱温：25℃；进样量：5 µL。
            Acquity 超高效液相色谱仪、Waters 2695 液相色谱               2.5.2  质谱条件     离子源：电喷雾离子源，正、负离子切
        系统、LE204E/02电子分析天平（美国奥豪斯国际有限公                       换检测；干燥气温度：30 ℃；雾化气压力：30 psi；干燥气
        司）；Neofuge 13R 高速冷冻离心机（上海力申科学仪器                     流速：8.0 L/min；毛细管电压：3.5 kV；鞘气流速：12.0
        有限公司）；1290 型 6530 系列飞行时间质谱联用仪（美                     L/min；鞘气温度：400 ℃；扫描范围：质荷比（m/z）50→
        国安捷伦科技有限公司）。                                        1 000；流速：0.2 mL/min。
        1.2 药品与试剂                                           2.6 肉苁蓉总苷在人工胃液中的成分分析
            肉苁蓉总苷（本课题组参考文献[12]方法自制，含量                           取“2.2”项下的供试品溶液、“2.4.1”项下的人工胃液
        以 毛 蕊 花 糖 苷 计 为 62.5％）；毛 蕊 花 糖 苷（批 号 ：              孵育样品各1 mL，按“2.5”项下色谱与质谱条件于正、负
        111530-201411，纯 度 ：＞98％）、松 果 菊 苷（批 号 ：              离子模式下进样分析。应用超高效液相色谱串联飞行
        111670-201304，纯度：＞98％）均购自中国食品药品检                    时间质谱技术对肉苁蓉总苷进行定性分析，通过与对照
        定研究院；胃蛋白酶（批号：417B0314，活力：3 000～                     品的保留时间（tR ）及一、二级质谱信息进行比较，利用
        3 500 U）、胰酶（批号：417B0314，活力：3 000～3 500 U）           Agilent Masshunter Qualitative Analysis B.07.00 软件对
        均购自国药集团北京试剂有限公司；甲醇、乙腈、甲酸均                           数据进行处理，其中的准分子离子峰的 m/z 可初步判断
        为色谱纯；水为纯净水。                                         化合物的分子量、元素组成和经验分子式，再结合数据
        2 方法与结果                                             库检索各级质谱信息和已有文献报道，对其化学成分进
        2.1  空白灌流液的制备                                       行了结构推测。正、负离子模式下各样品在人工胃液中
            精 密 称 取 7.80 g NaCl、0.35 g KCl、0.37 g CaCl2、    代谢的总离子流图分别见图1、图2。
        1.37 g NaHCO3、0.32 g NaH2PO4、0.02 g MgCl2、1.40 g 葡      依据各色谱峰在正离子模式下得到的分子离子峰
        萄糖，加水定容至 1 000 mL 量瓶中，调 pH 至 7.40，即得                及其对应碎片离子所得的分子量与试验前期及相关文
        空白灌流液。                                              献报道   [14-16] 对比参考，共推测出36个化合物，其中7个原
        2.2  供试品溶液的制备                                       型成分（如芥子醛葡萄糖苷、松果菊苷）、29 个代谢产物
            取肉苁蓉总苷 100 g，加入空白灌流液定容至 100                    （如 Methyl-O-Kankanoside J、乙酰化管花肉苁蓉苷 B）；
        mL，再用0.22 µm滤膜过滤，即得供试品溶液。                           负离子模式下共推测出33个化合物，其中7个原型成分
        2.3  人工胃、肠液的制备                                     （如Kankanoside M、胡萝卜苷）、26个代谢产物（如Meth-
        2.3.1  人工胃液的制备          参考文献[13]方法，取 16.4           yl-O-Kankanoside E、羟基化丁香苷）。正、负离子模式下
        mL 9.5％HCl，加入800 mL水以及胃蛋白酶10 g，充分混                  肉苁蓉总苷在人工胃液中代谢的化合物信息分别见表
        匀后加水稀释至1 000 mL，即得人工胃液。                             1、表2。
        2.3.2  人工肠液的制备          参考文献[13]方法，取 6.8 g              基于表1，笔者简述几种典型化学成分的MS/MS推
        KH2PO4，加500 mL水使之溶解，采用0.1 mol/L NaOH溶               导过程。
        液调pH至6.8；另取10 g胰酶，加水适量溶解，再将上述                           1 号 峰（tR＝1.914 min）分 子 量 为 726.279 9，m/z
        两液混合，加水稀释至1 000 mL，即得人工肠液。                          727.287 7 为[M+H] 峰，m/z 679.242 8 为[M+H-CH2O-
                                                                             +
        2.4 孵育样品的制备                                         H2O] 峰，m/z 655.206 9 为[M+H-CH2O-C2H2O] 峰，m/z
                                                                                                     +
                                                                +
                                                                                              +
        2.4.1  人工胃液孵育样品的制备              取“2.3.1”项下的人        637.196 6 为 [M + H-CH2O-C2H2O-H2O] 峰 ，推 测 其 为
        工胃液100 mL预温孵5 min后，加入“2.2”项下的供试品                    Methyl-O-Kankanoside J。2 号峰（tR＝2.164 min）分子量
        溶液 5 mL，于 37 ℃下预孵育，1 h 后取样 7 mL，立即用                 为428.131 3，m/z 429.139 1为[M+H] 峰，m/z 397.111 8为
                                                                                          +
                                                                         +
        0.1 mol/L NaOH 溶液调pH至6.7终止反应，加水定容至                  [M+H-CH3OH] 峰，m/z 381.204 3 为[M+H-CH2O-H2O]    +
                                                                                          +
        10 mL，再用0.22 µm滤膜过滤，即得。                             峰，m/z 331.219 4为[M+H-SO3-H2O] 峰，m/z 301.072 8为
                                                                               +
        2.4.2  人工肠液孵育样品的制备              取“2.3.2”项下的人        [M+H-SO3-CH2O-H2O] 峰，推测其为 Kankanoside L sul-
        工肠液100 mL预温孵5 min后，加入“2.2”项下的供试品                    furic acid conjugate；3 号 峰（tR＝2.331 min）分 子 量 为
        溶液 5 mL，于 37 ℃下预孵育，4 h 后取样 7 mL，立即用                 530.163 0，m/z 531.170 8 为[M+H] 峰，m/z 499.147 4 为
                                                                                          +
        0.1 mol/L NaOH 溶液调pH至6.7终止反应，加水定容至                  [M + H-CH3OH] 峰 ，m/z 265.080 6 为 [M + H-C6H8O6-
                                                                          +
        10 mL，再用0.22 µm滤膜过滤，即得。                             3CH2O] 峰 ，推 测 其 为 dehydrodiconiferyl alcohol-4-O-
                                                                   +
        2.5  色谱与质谱条件                                        β-D-glucoside葡糖醛酸结合物；4号峰（tR＝2.631 min）分
        ·54  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 1                                    中国药房    2020年第31卷第1期
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