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再于－20 ℃放置 24 h，然后在 4 ℃条件下以 4 000 r/min             2.5.3  脏器指数测定        将大鼠处死，解剖后取出肝、脾
        离心 30 min；取上清液，冷冻干燥成冻干粉，－20 ℃保                     和结肠，生理盐水涮洗干净后，用滤纸吸干表面水分，称
        存。临用前配制抗原乳化剂，即精密称取上述冻干粉（8                          质量，计算脏器指数：脏器（肝、脾、结肠）指数（mg/g）＝
        mg/只），以生理盐水-完全弗氏佐剂（1 ∶ 1，V/V）为溶剂制                  脏器湿质量（mg）/体质量（g）。
        备成 80 mg/mL 的乳化液（先将冻干粉完全溶解于相应                      2.5.4  结肠黏膜损伤情况评定             取结肠，沿肠系膜剪
        体积生理盐水中，再加入相应体积完全弗氏佐剂，涡旋                           开，冰生理盐水洗净内容物，平铺于白瓷板上，量取结肠
        混匀至乳化状态）。                                          长度和宽度，并参照文献标准 方法进行结肠黏膜损伤
                                                                                     [11]
        2.3 造模                                             （Colonmucosa damage index，CMDI）评分。
            将 70 只大鼠适应性喂养 1 周，然后随机选取 8 只作                  2.5.5  结肠组织中 IL-2、PGE2、MPO 水平测定           将结肠
        为正常对照组，进行普通饲料喂养，其余62只大鼠进行                          纵向剪取一半，称质量，加适量冰生理盐水匀浆制成
        湿热型 UC 造模。即在普通饲料喂养的基础上，喂以高                         10％组织匀浆液，以3 500 r/min离心10 min，取上清液，
        糖高脂、辛辣饮食并联合TNBS灌肠：造模大鼠每天自由                         按相应试剂盒方法操作检测匀浆液中 IL-2、PGE2、MPO
        饮用 200 g/L 蜂蜜水，第 2 天灌服油脂 15 g/kg，并于灌服              水平。
        油脂的隔天灌服老白干 20 mL/kg，交叉灌服造模持续                       2.5.6  结肠组织病理变化的检查             将结肠纵向剪取一
        20 d；于湿热造模的第6天和第18天，制备抗原乳化剂，
                                                           半，用 10％中性福尔马林固定，包埋，常规制作 5 μm 病
        并于大鼠左侧足趾、右侧足趾、腹股沟、背部等多点皮下                          理切片，行苏木精-伊红（HE）染色后在显微镜下观察其
        注射（1.0 mL/只），引起大鼠局部免疫反应；第 21 天，造
                                                           病理变化，并从上皮细胞和炎性细胞浸润两个方面进行
        模大鼠禁食不禁水24 h后，异氟醚轻度麻醉，俯卧位，将
                                                           病理组织学（Histopathological score，HS）评分 。（1）上
                                                                                                   [12]
        连有直径2.0 mm导管的注射器经大鼠肛门轻轻插入至
                                                           皮细胞：0 分，正常形态；1 分，有杯形细胞丢失；2 分，杯
        8 cm 处，缓慢注入 TNBS 乙醇溶液（15 mg TNBS 溶于
                                                           形细胞大面积丢失；3分，隐窝细胞丢失；4分，隐窝细胞
        300 mL/L乙醇溶液0.6 mL中），拔出导管，使大鼠保持倒
                                                           大面积丢失。（2）炎性细胞浸润：0分，没有浸润；1分，浸
                           [8]
        立姿态 10 s，完成造模 。正常对照组用生理盐水代替
                                                           润在隐窝基底层；2分，浸润到达黏膜肌层；3分，浸润深
        TNBS乙醇溶液按上述方法平行操作。
                                                           入到黏膜肌层，伴随黏膜增厚和明显水肿；4 分，浸润到
        2.4  分组与给药
                                                           达黏膜下层。每只大鼠的 HS 评分为“上皮细胞”评分+
                                          [9]
            完成造模后第 5 天，参照文献标准 进行疾病活动
                                                          “炎性细胞浸润”评分。
        指数（Disease activity index，DAI）评分，并按炎症的严重
                                                           2.6  统计学方法
        程度对大鼠进行分层：0～3 分，极轻度炎症；4～6 分，轻
                                                               采用 SPSS 17.0 统计学软件对数据进行统计分析。
                                                  [10]
        度炎症；7～9 分，中度炎症；10～12 分，重度炎症 。剔
                                                           计量资料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分
        除极轻度炎症和重度炎症的造模大鼠后，将剩余48只大
                                                           析，组间两两比较采用 LSD 检验。P＜0.05 表示差异具
        鼠随机分 6 组：即模型对照组、美沙拉嗪组（300 mg/kg，
                                                           有统计学意义。
        参考人临床等效剂量并按动物体表面积法换算而得）、
        肠炎宁组（300 mg/kg，参考人临床等效剂量并按动物体                      3 结果
                                                           3.1  Ento-A对湿热型UC模型大鼠一般情况的影响
        表面积法换算而得）和Ento-A低、中、高剂量组（50、100、
        200 mg/kg，以提取物计） ，每组 8 只（♀♂各半）。正常                      正常对照组大鼠饮食正常，毛发光滑、洁白、干净，
                             [6]
                                                           精神状态良好，体质量增加，大便（黑色）和尿液均正
        对照组和模型对照组大鼠灌胃等体积生理盐水（0.25
        mL/100 g），其余各组大鼠灌胃相应药物；每天给药1次，                     常。模型对照组大鼠进食减少，出现明显的体质量减
        连续给药14 d。                                          轻，毛发稀疏、松散无光泽，精神状态差，出现拱背、扎堆
        2.5 指标检测                                           等现象；随着造模时间推移，大鼠粪便由黑色变为黄色，
        2.5.1  一般情况观察和DAI评分           每天称大鼠体质量，            且在灌油日松软、潮湿，灌酒日干燥；在造模后期，部分
        观察大鼠一般状态及大便形状。并于给药第 0、4、7、14                       大鼠肛周和尾巴底部覆盖着黄色黏稠稀便，并伴有恶
        天进行 DAI 评分 ，计算每只大鼠的 DAI 分值评估疾病                     臭，尿液量减少且发黄，此症状符合临床湿热型UC患者
                      [9]
                                                                                        [2]
        活动情况。                                              腹泻、里急后重、小便短赤的特点 。灌胃美沙拉嗪和肠
        2.5.2  血清中 IL-8、IL-17、SOD、MDA 水平测定         腹主      炎宁后，大鼠精神状态明显好转，活动增多，未见黄色黏
        动脉采血，在4 ℃下以3 000 r/min离心10 min，分离上层                稠大便，粪便基本成型转为黑色；灌胃低、中、高剂量En-
        血清，按 ELISA 试剂盒操作检测血清中 IL-8、IL-17、                  to-A 后，大鼠一般状态有不同程度地改善，扎堆蜷卧现
        SOD、MDA水平。                                         象减少，肛门污秽也减少，粪便基本成型且颜色转为黑


        中国药房    2020年第31卷第1期                                                China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 1  ·37  ·
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