Page 100 - 2019年11月第30卷第21期

凝固收缩后，3 000 r/min 离心 10 min，分离血清，然后 （P＞0.05）。给药 8 d 后，与正常组比较，模型组大鼠体
于－20 ℃保存，备用。按相应试剂盒说明书操作，检测 质量显著降低（P＜0.01），此外还出现了明显的食欲不
血清中 ET、D-LA 的含量，考察其对小肠黏膜生物屏障 振、精神萎靡、活力下降等症状。与模型组比较，人工蝉
功能的影响。 花高剂量组大鼠体质量均显著升高（P＜0.01），食欲不
2.3 血清中sIgA、TNF-α、IFN-γ、IL-15含量测定 振、精神萎靡等情况也得到明显改善。各组大鼠体质量
取“2.2”项下血清，按相关试剂盒说明书操作，对血 测定结果见表1。
清中sIgA、TNF-α、IFN-γ、IL-15的含量进行测定，考察其 表1 各组大鼠体质量测定结果（x±±s，n＝8，g）
对小肠黏膜免疫功能的影响。 Tab 1 Results of body weight of rats in each group
2.4 血清中MPO活性测定 （x±±s，n＝8，g）
取“2.2”项下血清，按试剂盒说明书操作，对血清中 组别 给药前 给药第8天
正常组 206.50±10.73 243.00±6.93
G-CSF的含量进行测定。大鼠取血后，腹腔解剖取小肠
模型组 236.75±15.08 193.75±13.96 ＊＊
组织约40 mg匀浆[组织与生理盐水比为1∶10（mg/mL）]， 人工蝉花高剂量组 219.50±21.24 202.38±23.62 ##
用于试剂盒检测，剩余部分病理组织检查待用。按检测 人工蝉花中剂量组 211.75±20.13 191.00±16.42
人工蝉花低剂量组 219.50±10.99 193.13±12.57
试剂盒说明书操作，对小肠组织中MPO活性进行测定，
##
＊＊
注：与正常组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.01
考察其对小肠炎症因子的影响。
＊＊
Note：vs. normal group， P＜0.01；vs. model group，P＜0.01
##
2.5 小肠组织中MDA含量测定 3.2 对小肠黏膜屏障功能的影响结果
取“2.4”项下小肠组织，按检测试剂盒说明书操作， 与正常组比较，模型组大鼠血清中 ET、D-LA 含量
对小肠组织中 MDA 的含量进行测定，考察其对小肠组 显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，人工蝉花高、中、
织过氧化水平的影响。 低剂量组大鼠血清中 ET、D-LA 含量均显著降低（P＜
2.6 小肠黏膜病理学观察 0.05或P＜0.01），且呈剂量依赖性趋势。各组大鼠血清
将小肠于10％多聚甲醛溶液固定24 h，然后进行常 中ET、D-LA含量测定结果见图1。
规组织包埋、石蜡切片等操作，经苏木精-伊红（HE）染色
2.0
后显微镜下观察小肠黏膜病理变化。 ＊＊
2.7 小肠组织中ZO-1、Claudin 1蛋白表达测定 1.5 ## #
2.7.1 ZO-1 蛋白 取“2.4”项下小肠组织，按检测试剂 EU/mL 1.0 ##
盒说明书操作，对小肠组织中ZO-1的含量进行测定。 ET，
0.5
2.7.2 Claudin 1蛋白 取大鼠小肠组织石蜡切片，经脱
蜡、梯度脱水后，进行抗原修复，用磷酸盐缓冲液（PBS） 0 正常组 模型组 人工蝉花 人工蝉花 人工蝉花
高剂量组 中剂量组 低剂量组
洗涤 3 次；用 2％牛血清白蛋白（BSA）室温封闭 30 min，
A. ET
PBS 洗涤 2 次；滴加适量用 2％BSA 稀释的 Claudin 1 一
10 ＊＊
抗（1 ∶ 200），4 ℃过夜；次日用PBS洗涤2次，滴加适量二 ##
8 ## ##
抗，室温下封闭2 h，用PBS洗涤2次；滴加DAPI染液，室
温下染色10 min，PBS洗涤2次；用滤纸吸取多余的PBS D-LA，mol/L μ 6
溶液，滴加少量抗荧光猝灭剂，盖片，荧光显微镜下观察 4
2
Claudin 1蛋白表达情况（蓝色荧光为DAPI，绿色荧光为
Claudin 1蛋白），并应用Image J 1.8.0软件测定灰度值对 0 正常组 模型组 人工蝉花 人工蝉花 人工蝉花
高剂量组 中剂量组 低剂量组
蛋白表达进行定量分析。
B. D-LA
2.8 统计学方法
注：与正常组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜0.01
#
＊＊
##
采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。所有结 Note：vs. normal group， ＊ ＊ P＜0.01；vs. model group，P＜0.05，
#
果均以x±s的形式表示，多组间均数比较采用单因素方 ## P＜0.01
差分析，两组间均数比较采用t检验。P＜0.05表示差异 图1 各组大鼠人血清中ET、D-LA含量测定结果
有统计学意义。 Fig 1 Results of serum contents of ET and D-LA of
3 结果 rats in each group
3.1 一般情况观察结果 3.3 对小肠黏膜免疫功能的影响结果
给药前，各组大鼠间体质量差异均无统计学意义 与正常组比较，模型组大鼠血清中sIgA、IL-15含量

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