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磨片面积×100％]。上述试验重复3次。 少，差异均有统计学意义（P＜0.01），详见图1、表1。
2.5 女贞子提取物对成骨细胞增殖的影响
采用MTT法检测。取对数生长期的MC3T3-E1Sub-
clone l4细胞，以5×10 个/孔的密度接种于96孔板（勿需
3
骨磨片）中，培养24 h后，用PBS洗掉未贴壁的细胞。将
细胞随机分为空白对照组，女贞子醇提物低、中、高剂量
组，女贞子水煎物低、中、高剂量组，并设置不含细胞和 A.空白对照组 B.女贞子醇提物低剂量组
药物的阴性对照组，每组设置6个复孔。吸弃上清液，空
白对照组和阴性对照组加入成骨细胞α-MEM完全培养
基（含 50 μg/mL L-抗坏血酸、10 mmol/mL β-甘油磷酸
钠、10 －8 mol/mL地塞米松的成骨细胞α-MEM培养基，下
同）100 μL，各给药组加入含相应药物的成骨细胞
α-MEM 完全培养基 100 μL，培养 48 h。弃去培养基，每
C.女贞子醇提物中剂量组 D.女贞子醇提物高剂量组
孔加入 5 mg/mL MTT 溶液 20 μL，培养 4 h 后，吸弃上清
液，每孔加入DMSO 150 μL，振荡10 min，使用酶标仪于
490 nm波长处检测各孔的A值，计算各组细胞的相对增
殖率[相对增殖率（％）＝（给药组平均A值－空白对照组
平均 A 值）/（空白对照组平均 A 值－阴性对照组平均 A
值）×100％]。上述试验重复3次。
E.女贞子水煎物低剂量组 F.女贞子水煎物中剂量组
2.6 女贞子提取物对成骨细胞APK活性的影响
采用 APK 活性测定法 [10-11] 检测。取对数生长期的
MC3T3-E1Subclone 14 细胞，以 1×10 个/孔的密度接种
4
于96孔板（勿需骨磨片）中，培养24 h后，用PBS洗掉未
贴壁的细胞。按“2.5”项下方法分组（不设置阴性对照
组）、给药，每组设置 4 个复孔。培养 72 h 后，吸弃培养
基，用PBS清洗2次，使用1％TritonX-100裂解液于4 ℃ G.女贞子水煎物高剂量组
图 1 女贞子提取物对破骨细胞分化影响的显微图
下裂解 30 min。取各孔裂解后的细胞适量，按 AKP 测
（TRACP染色，×40）
试盒说明书处理后，使用酶标仪于 520 nm 波长处检测
Fig 1 Micrographs of the effects of L. lucidi Fructus
各孔的 A 值；采用 BCA 法测定各组细胞的蛋白浓度，并
extract on osteoclast differentiation（TRACP
将 A 值换算 AKP 活性[每克组织蛋白与测试盒底物于 staining，×40）
37 ℃反应 15 min 产生 1 mg 游离酚即为 1 个活性单位
表1 女贞子提取物对破骨细胞分化和骨吸收功能的影
（U/g prot）]。上述试验重复3次。
响（x±±s，n＝3）
2.7 统计学方法
Tab 1 Effects of L. lucidi Fructus extract on osteoclast
采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析。计量资
differentiation and bone resorption function
料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组
（x±±s，n＝3）
间比较采用LSD法。P＜0.05为差异有统计学意义。 TRACP活 TRACP阳性 骨吸收陷 骨陷窝面积
3 结果 组别 性，U/L 细胞数，个 窝，个 百分率，％
3.1 女贞子提取物对破骨细胞分化和骨吸收功能的 空白对照组 22.753±0.220 368.250±66.430 125.333±0.577 100.000±0.000
女贞子醇提物低剂量组 18.801±0.163 ＊＊ 196.750±26.718 ＊＊ 100.333±2.082 ＊＊ 81.193±0.741 ＊
影响 女贞子醇提物中剂量组 16.331±0.229 ＊＊ 128.750±34.045 ＊＊ 83.667±8.021 ＊＊ 66.788±0.503 ＊＊
3.1.1 TRACP 活 性 及 其 阳 性 细 胞 数 空 白 对 照 组 女贞子醇提物高剂量组 0.845±0.291 ＊＊ 52.750±24.404 ＊＊ 7.667±2.082 ＊＊ 13.223±0.559 ＊＊
女贞子水煎物低剂量组 24.290±0.634 405.500±56.052 143.333±2.517 ＊＊ 102.756±1.015
TRACP 阳性细胞较多，且体积较大。与空白对照组比
女贞子水煎物中剂量组 19.700±0.261 ＊＊ 231.250±52.376 ＊＊ 117.667±5.132 90.723±0.760 ＊
较，各给药组TRACP阳性细胞均有不同程度的减少；其 女贞子水煎物高剂量组 17.078±0.418 ＊＊ 198.250±54.775 ＊＊ 95.000±2.000 ＊＊ 78.501±1.077 ＊
中女贞子醇提物各剂量组和水煎物中、高剂量组细胞的 注：与空白对照组比较，P＜0.05， P＜0.01
＊
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TRACP 活性均显著降低，TRACP 阳性细胞数均显著减 Note：vs. blank control group， P＜0.05， P＜0.01
＊＊
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