Page 74 - 2019年8月第30卷第16期

mg 40 mg 45 的博落回提取物溶液（以A相为溶剂配制），以5 mL/min
血根碱动态吸附量， 25 血根碱动态吸附量， 35 流速上样5 min。先以A-B混合相（B相体积比为2％）、
35
40
30
30
20
25
流速为 5 mL/min 进行洗脱，得制备液相色谱图（见图
20
15
15
10
10
5
0
显紫外吸收，表明有成分被洗脱出来；以17 min为起点，
2 3 4 5 6 7 8 9 10 5 0 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 3）。结果显示，从 17 min 开始，洗脱液色谱图中出现明
质量浓度，mg/mL pH值
A.上样液质量浓度对动态吸附量的影响 B.上样pH值对动态吸附量的影响 每10 mL收集1个流分，至40 min时，流出液色谱图中已
mg/mL 1.8 无紫外吸收，停止收集。对已收集的各流分采用“2.1.1”
1.6
血根碱质量浓度， 1.0 留时间比对可知，所有已收集流分中所含成分均为杂
1.4
项下色谱条件进样测定，通过与血根碱对照品溶液的保
1.2
0.8
0.6
0.4
质。然后将混合相中的B相体积比提高至50％[此时混
0.2
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 合洗脱液组成为含 20％甲醇、0.25 mol/L 氯化钠的 20
流分编号
C.动态泄露曲线 mmol/L 醋酸铵溶液（pH 5.5）]继续进行洗脱，至 52 min
图 2 不同条件对血根碱在 CM-FF 型树脂上吸附效果 时，洗脱液色谱图中有明显紫外吸收；此时起，保持上述
的影响 洗脱条件，每10 mL收集1个流分，直至洗脱液无紫外吸
Fig 2 Effects of different conditions on the adsorption 收（见图3）。对上述流分按“2.1.1”项下色谱条件进样测
effect of CM-FF resin to sanguinarine 定，结果第54～74 min期间洗脱物中成分为血根碱。合
别用醋酸调整pH至3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5，并 并这一时间段的洗脱液流分（即精提物溶液），用于进一
以上述溶液分别对柱床进行平衡。另取 8 份“2.2”项下 步脱盐和精制纯化。
制备的博落回提取物适量，以含 20％甲醇的 20 mmol/L 2 700.0 100
醋酸铵溶液制成质量浓度均为 6.0 mg/mL 的溶液。分 2 420.0 90
80
2 140.0
别取上述溶液 30 mL，以醋酸调整至相应 pH 值后，以 5 1 860.0 1 2 70 ％
60
1 580.0
mL/min流速上样，收集流出液，按“2.1”项下方法测定血 mAU 1 300.0 3 50 B相体积比，
1 020.0 40
根碱质量浓度，并按“（1）”项下方法计算 CM-FF 型树脂 740.0 30
460.0 20
的动态吸附量。结果，当上样 pH 为 5.5 时，动态吸附量 180.0 10
－100.0 0
达峰值37.04 mg；当上样pH过低或过高时，树脂动态吸 9 18 27 36 45 54 63 72 81 90
t，min
附量均有所下降（见图2B）。因此，本研究确定博落回提 注：1.洗脱液紫外吸收-时间曲线图（365 nm）；2.洗脱液紫外吸收-
取物溶液上样pH值为5.5。 时间曲线图（270 nm）；3.混合相中B相体积比-时间曲线
（3）上样体积考察。精密称取 CM-FF 树脂适量，按 Note：1. UV absorption-time curves of eluent（365 nm）；2. UV ab-
“（1）”项下方法装填离子交换制备柱，并采用 2 BV 含 sorption-time curves of eluent（270 nm）；3. phase B volumn proportion
in mixed phase-time curve
20％甲醇的20 mmol/L醋酸铵溶液（pH调至5.5）对柱床
图3 博落回提取物离子交换制备液相色谱图
进行平衡。取“2.2”项下制备的博落回提取物适量，以含
Fig 3 Ion exchange preparation LC chromatogram of
20％甲醇的 20 mmol/L 醋酸铵溶液制成质量浓度为 6.0
M. cordata extract
mg/mL 的溶液。取该溶液 50 mL，以 5 mL/min 流速上
样，每5 mL收集1次流分，按“2.1”项下方法测定血根碱 2.3.6 博落回精提物溶液的精制纯化 为除去精提物
质量浓度。以流分编号为横坐标、流分中血根碱质量浓 溶液中的醋酸铵、氯化钠等无机盐，将“2.3.4”项下得到
度为纵坐标绘制动态泄露曲线（见图2C）。结果表明，从 的精提物溶液直接上样至反相 C18制备级色谱柱中，用
6 号流分开始出现明显泄露现象（即可检出血根碱成 2 BV的20％甲醇溶液以15 mL/min流速进行脱盐；然后
分），因此确定6.0 mg/mL的博落回提取物溶液的上样体 以 2 BV 的甲醇同流速洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得
积为25 mL。 到橙红色精制纯化干燥粉末，纯化收率为 71％。经
2.3.5 博落回提取物的动态洗脱条件考察 采用APPS HPLC 法检测，该精制纯化物的纯度为 97％，并通过与
10D 型液相制备系统实时在线监测进行动态洗脱条件 血根碱对照品溶液的保留时间比对可初步判断为血根
考察。根据“2.3.3”项下方法及考察结果，称取CM-FF树 碱。所得精制纯化物的HPLC检测结果见图4。
脂适量，装填 BV 为 20 mL 的离子交换制备柱。配制含 2.4 博落回提取物精制纯化物的结构确证
20％甲醇的20 mmol/L醋酸铵溶液（pH调至5.5）作为洗 取“2.3”项下制备的博落回精制纯化物，经 HPLC
脱液 A 相，配制含 20％甲醇、0.5 mol/L 氯化钠的 20 法、紫外分光光度法、质谱法（MS）和核磁共振氢谱
13
mmol/L醋酸铵溶液（pH调至5.5）作为洗脱液B相。采用 （H-NMR）、碳谱（ C-NMR）分别检测。结果，该化合物
1
2BV 的 A 相对柱床进行平衡；将质量浓度为 6.0 mg/mL 与血根碱对照品保留时间一致，紫外特征吸收波长分别

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