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博落回[Macleaya cordata（Willd）R.Br.]是罂粟科博         生物科技有限公司）；SP50型强阳离子交换树脂（苏州知
        落回属多年生草本植物，全草入药，在我国主要集中分                           益微球科技有限公司）；C18 制备级填料（75 μm，日本
        布于江苏、浙江、云南、贵州、湖南、湖北、广西、广东及台                        Cosmosil 公司）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，
                [1]
        湾等地区 。博落回富含生物碱，至今已被分离并鉴定                           水为纯净水。
        的单体生物碱达74个，其中含量最高且生物活性较强的                          1.3 药材
        为苯并异喹啉类生物碱，主要包括血根碱、白屈菜红碱、                              博落回药材购自湖南，经苏州大学药学院陆叶副教
        原阿片碱和别隐品碱等          [2-6] 。其中，血根碱具有明显的抗            授鉴定为罂粟科植物博落回（Macleaya cordata）的果荚。
        菌、抗肿瘤以及保肝护肝等药理活性                [7-12] 。在欧美和日      2 方法与结果
        本等发达国家，血根碱常作为抗菌药物的替代品被广泛                           2.1 血根碱的含量测定
        用于畜牧业及鱼类养殖          [13-14] 。目前，我国对于高纯度的           2.1.1  色谱条件      色谱柱：Cosmosil C18-R-Ⅱ（250 mm×
        血根碱尚无便捷、高效的规模化分离纯化方法。尽管大                           4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.2％醋酸溶液（25 ∶ 75，
        孔吸附树脂法用于提取纯化黄酮类及内酯酮类天然产                            V/V）；流速：1 mL/min；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃；进
        物有着优异的表现        [15-16] ，但由于血根碱及其类似物独特             样量：20 μL。在该色谱条件下，血根碱与相邻峰的分离
                                                   [13]
        的苯并杂原子共轭体系结构导致其化学性质特殊 ，使                           度均大于1.5，理论板数大于5 000（图略）。
        用大孔吸附树脂对其进行纯化时需使用大量的甲醇、乙                           2.1.2  对照品溶液的制备           精密称定血根碱对照品
        醇等有机溶剂，造成纯化成本高、难于规模化生产。生                           12.86 mg，置于 50 mL 量瓶中，加入甲醇适量，超声（功
        物碱成分在中性或酸性条件下以正离子形式存在，可采                           率：250 W，频率：40 kHz，下同）使其完全溶解后定容，摇
        用阳离子交换树脂进行富集分离。离子交换树脂商品                            匀，即得。
        化已数十年，其质量可靠、成本较低、环境污染小，近些                          2.1.3  供试品溶液的制备          精密称取“2.2”项下制备的
        年越来越多的应用于黄酮类、生物碱类等天然产物的分                           博落回提取物样品25.48 mg，置于50 mL量瓶中，加入甲
        离纯化 。因本研究目标产物血根碱为季铵型生物碱 ，                          醇适量，超声使其完全溶解后定容，即得。
                                                     [13]
              [17]
        采用离子交换树脂柱进行纯化分离具有一定优势。因                            2.1.4  线性关系考察        取“2.1.2”项下对照品溶液 1.0、
        此，本研究旨在开发一种高效的离子交换工艺，用于制                           2.0、4.0、6.0、8.0 mL，分别置于 10 mL 量瓶中，以甲醇稀
        备高纯度的血根碱，为后续该生物碱的进一步研究开发                           释定容至刻度，摇匀，经 0.45 μm 微孔滤膜过滤，制得系
        奠定工艺基础。                                            列质量浓度的线性对照品溶液。取上述稀释溶液与原
        1 材料                                               未经稀释的对照品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件分别进
        1.1  仪器                                            样测定。以血根碱质量浓度（x，μg/mL）为横坐标、峰面
            1260 型高效液相色谱（HPLC）仪（美国 Agilent 公               积（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程为：y＝
        司）；APPS10D型制备液相色谱仪、Φ15 mm型GCC可压                    101.07x－398.04（r＝0.999 2，n＝3）。结果表明，血根碱
        缩玻璃柱（苏州利穗科技有限公司）；ME215S 型电子天                       质量浓度在25.72～257.2 μg/mL范围内线性关系良好。
        平、PB-10型pH计（德国Sartorius公司）；MP2002型电子               2.1.5  精密度试验       取“2.1.4”项下质量浓度为 154.3
        天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；N-1001型旋转                       μg/mL的线性对照品溶液适量，按“2.1.1”项下色谱条件
        蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；SHZ-82 型恒温振荡                       连续进样测定6次，记录峰面积。结果，血根碱峰面积的
        器（金坛市富华仪器有限公司）；DZF型电热恒温真空干                         RSD为1.07％（n＝6），表明仪器精密度良好。
        燥箱（上海迈捷实验设备有限公司）；Simplicity UV型超                   2.1.6  稳定性试验       取“2.1.3”项下供试品溶液适量，分
        纯水机（德国Millipore公司）；KQ-250E型医用超声波清                  别于室温下放置 0、2、4、6、8 h 时，按“2.1.1”项下色谱条
        洗器（昆山舒美超声仪器有限公司）。                                  件进样测定，记录峰面积。结果，血根碱峰面积的 RSD
        1.2 药品与试剂                                          为 1.53％（n＝5），表明供试品溶液于室温下放置 8 h 内
            血根碱对照品[本实验室自制，批号：20170501，纯                    基本稳定。
        度：97.1％（按HPLC测定、归一化法计算）]；CM-FF型弱                   2.1.7  加样回收率试验         取已知含量的博落回提取物
        阳离子交换树脂、SP-HP 型强阳离子交换树脂[博格隆                        样品 12 mg，共 6 份，精密称定，分别加入质量浓度为
       （上海）生物技术有限公司]；CGC100×4型弱阳离子交换                       1.528 mg/mL 对照品溶液（按“2.1.2”项下方法制备）2
        树脂、PCG600F型反相树脂、PCG900F型反相树脂[漂莱                    mL，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项
        特（中国）有限公司]；S40 型强阳离子交换树脂（苏州赛                       下色谱条件进样测定，记录峰面积，按标准曲线法计算
        分科技有限公司）；PIPO-02 型大孔吸附树脂（广州牌牌                      含量并计算加样回收率。结果，平均加样回收率为


        中国药房    2019年第30卷第16期                                            China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 16  ·2227  ·
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