Page 81 - 《中国药房》2026年9期
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对湿度为（50±15）%，12 h明/12 h暗循环。本研究动物                   2.6 小鼠结肠组织病理学观察
          实验已获川北医学院实验动物伦理委员会批准（动物伦                               取“2.4”项下经4%多聚甲醛固定的结肠组织适量，
          理编号：NSMC伦理动物审〔2025〕036号）。                          经组织包埋、切片（厚5 μm）后，常规进行HE染色，然后
          2 方法                                               在显微镜下观察其病理学变化。
          2.1 药液制备                                           2.7 小鼠结肠组织中 Occludin、ZO-1、AhR 蛋白表达
             （1）黄芩汤：按照黄芩汤组方，取黄芩 9 g、白芍 6 g、                  检测
          炙甘草6 g、大枣49 g，加入10倍量水，经2次煎煮、过滤                         采用Western blot法检测。取“2.4”项下冻存的结肠
          后，收集滤液并浓缩成质量浓度为 9.1 g/mL 的药液（以                     组织（每组取3只小鼠样本）适量，使用裂解液提取组织
          生药量计，下同）。（2）抗菌药物混悬液：取各抗菌药物适                        中总蛋白，经 BCA 法测定总蛋白浓度以及进行变性处
          量，用生理盐水制备成每 1 L 含 0.5 g 万古霉素、1.0 g 氨               理后，上样进行 SDS-PAGE 电泳分离、转膜，并以 5% 脱
                                                     [10]
          苄西林、1.0 g新霉素和1.0 g甲硝唑的抗菌药物混悬液 。                    脂奶粉封闭；将膜与 Occludin、ZO-1、AhR、GAPDH 一抗
          2.2 分组、造模与给药                                      （稀释度均为1∶1 000）在4 ℃下孵育过夜；以TBST缓冲

              小鼠适应性饲养1周后，按体重随机分为正常组、模                        液洗膜后，加入二抗（稀释度为1∶5 000），在室温下孵育
          型组、菌群消耗-模型组、菌群消耗-黄芩汤组、黄芩汤组                         1 h；显影后，采用 Image J 图像分析软件分析条带灰度
          和美沙拉嗪组（阳性对照组），每组6只。菌群消耗-模型                         值，以目的蛋白与内参蛋白（GAPDH）条带的灰度值比
          组、菌群消耗-黄芩汤组小鼠先饮用抗菌药物混悬液10 d                        值表示目的蛋白的表达水平。
                        [11]
          以消耗肠道菌群 ，其余各组小鼠饮用蒸馏水。实验第                           2.8 小鼠肠道菌群组成分析
          11 天，除正常组外，其余各组小鼠均饮用 2.5%DSS 溶液                        取“2.4”项下除美沙拉嗪组外其余各组小鼠冻存的
          7 d，制备 UC 模型[以疾病活动指数（disease activity in‐          粪便样品，进行 16S rRNA 菌群测序。具体检测由成都
                                                 [12]
          dex，DAI）评分＞0.5分为造模成功的判断标准] 。造模                     思达钉生物科技有限公司完成，主要流程包括 DNA 提
          成功后，正常组、模型组、菌群消耗-模型组小鼠灌胃等                          取与检测、对16S V3～V4区（以341F和806R为引物）进
          体积生理盐水，菌群消耗-黄芩汤组、黄芩汤组小鼠灌胃                          行 PCR 扩增、PCR 产物的混样和纯化、测序文库构建和
          黄芩汤（9.1 g/kg，按体表面积换算得到的临床等效剂                       测序。对测序结果进行质控分析后，得到最终的有效数
          量），美沙拉嗪组小鼠灌胃美沙拉嗪药液（0.4 g/kg，按体                     据，然后使用 QIIME2 软件进行肠道菌群生物信息学分
          表面积换算得到的临床等效剂量），灌胃体积均为 10                          析——（1）Alpha 多样性分析：包括 Chao1 指数和 Shan‐
          mL/kg；每天灌胃1次，连续10 d。                               non 指数分析；（2）Beta 多样性分析：包括主坐标分析
          2.3 体重变化比和DAI评分测定                                 （principal coordinate analysis，PCoA）和非度量多维排列
              实验期间每天观察/测定小鼠大便、体重、活动情况                       （non-metric multidimensional scaling，NMDS）分析；（3）
                           [12]
          等，并参照文献方法 计算各组小鼠的DAI评分[DAI评                        从门、属水平分析各组小鼠肠道菌群的物种组成。
          分＝（体重下降比例评分+大便性状评分+便血评分）/3]，                       2.9 小鼠粪便色氨酸靶向代谢组学分析
          并计算各组小鼠的体重变化比[体重变化比＝末次体重/                              取“2.4”项下除美沙拉嗪组外其余各组小鼠冻存的
          初次体重]。                                             粪便样品，送至成都思达钉生物科技有限公司完成色氨
          2.4 样本采集及结肠长度测定                                    酸靶向代谢组学检测，主要分析粪便中IPA、IAA、IEt、N-
              末次给药后，所有小鼠禁食、不禁水12 h，称重后收                      乙酰-5-羟色胺（N-acetylserotonin，NAS）含量。
          集各组小鼠 9：00－10：00 时段的粪便，于－80 ℃下保                    2.10 统计学方法
          存。小鼠以异氟烷麻醉后，采用摘眼球法取血，血样于                               采用SPSS 25.0软件进行数据分析。符合正态分布
          4 ℃下保存，备用。取血后将小鼠处死，剖开腹腔，摘取                         的计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素方差分
          结直肠组织，留取盲肠至肛门间的肠段，测定其长度。                           析，进一步组间两两比较采用LSD-t检验；不符合正态分
          截取部分结肠组织于－80 ℃下保存，用于分子生物学检                         布的计量资料以 M（P25，P75 ）表示，多组间比较采用非参
          测；其余肠段用4%多聚甲醛固定，用于病理学观察。                           数 Kruskal-Wallis H 检验，进一步组间两两比较采用
          2.5 小鼠血清中炎症因子含量检测                                  Mann-Whitney U检验。检验水准α=0.05。
              取“2.4”项下各组小鼠的血液样品适量，离心后收集                      3 结果
          上层血清。按照相应ELISA试剂盒说明书方法操作，检                         3.1 小鼠体重变化比、DAI评分及结肠长度测定结果
          测血清中炎症因子（IL-6、IL-10、TNF-α、IL-22）含量。                    与正常组比较，模型组小鼠体重变化比显著降低


          中国药房  2026年第37卷第9期                                                China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 9    · 1175 ·
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