Page 74 - 《中国药房》2026年9期

mechanism of action may be related to the inhibition of the activity of the TGF-β1/Smad signaling pathway.
KEYWORDS Oxytropis falcata； processed product； renal fibrosis； TGF-β1/Smad signaling pathway； collagen fiber deposition

慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）的患病率 木精-伊红（HE）、马松（Masson）染色试剂盒（货号分别为
已超过全球人口的10%，肾纤维化（renal fibrosis，RF）是 G1100、G340）均购自北京索莱宝科技有限公司；肌酐
CKD进展至终末期肾病的主要病理特征，最终可导致肾 （creatinine，Cr）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）试
功能完全丧失 [1―2] 。RF主要表现为细胞外基质（extracel‐ 剂盒（货号分别为 C011-2-1、C013-2-1）均购自南京建成
lular matrix，ECM）的 异 常 积 累 和 上 皮 间 质 转 化 生物工程研究所；白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）、肿
（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的形成，并伴随 瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）酶联免疫
[3]
炎症细胞浸润及肾小管上皮细胞凋亡 。西医治疗 RF 吸 附 测 定（ELISA）试 剂 盒（货 号 分 别 为 ml064292、
的主要药物包括肾素-血管紧张素系统抑制剂、钠-葡萄 002859）均购自上海酶联生物科技有限公司；兔源Ⅰ型
[4]
糖共转运蛋白 2 抑制剂等 ，然而这些药物存在一定副 胶原（collagen type Ⅰ，Col-Ⅰ）抗体（货号 ab6308）购自
作用，因此开发新的治疗RF的药物具有重要意义。 英国 Abcam 公司；兔源纤连蛋白（fibronectin，FN）抗体、
镰形棘豆 Oxytropis falcata Bunge 为豆科棘豆属植 辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（货
[5]
物，主要分布在西藏、青海、甘肃等地 ，因其突出的抗炎 号分别为15613-1-AP、SA00001-2）购自武汉三鹰生物技
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疗效，被藏医誉为“三大抗炎药”之一 。研究发现，镰形 术有限公司；兔源 α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle
棘豆的提取物可以改善小鼠肾功能，发挥抗RF作用 [7―8] 。 actin，α-SMA）抗体（货号BM0002）购自美国Boster公司；
然而，镰形棘豆属于毒性草本植物，若不进行炮制，容易 兔源TGF-β1、Smad3、ERK1/2、磷酸化Smad3（p-Smad3）、
[9]
引发肾脏及神经毒性 ，因此，临床应用时常采用复制 磷酸化 ERK1/2（p-ERK1/2）、β-肌动蛋白（β-actin）抗体
法、乳汁制法对其进行炮制，以起到减毒作用。 （货号分别为 bsm-61027R、bsm-52224R、bsm-52259R、
转 化 生 长 因 子 β1 （transforming growth factor- β1， bs-3484R、bsm-54491R、bs-0061R）均购自北京博奥森生
TGF-β1 ）是目前公认的致纤维化因子之一，可通过Smad 物技术有限公司；TGF-β1、Smad3、ERK1、ERK2、β-actin
依赖及非依赖 2 个途径协同调控靶基因转录及蛋白表 基因的引物序列由生工生物工程（上海）股份有限公司
[10]
达，从而诱导 RF 。研究发现，TGF-β1/Smad 信号通路 设计合成，具体信息见表1。
异常激活可促进肾小球硬化和间质纤维化的病理进程， 表1 PCR引物序列和扩增产物长度
在 Smad 非依赖途径中，以丝裂原活化蛋白激酶家族的 基因 引物序列（5′→3′） 扩增产物长度/bp
胞外信号调节激酶 1/2（extracellular signal-regulated ki‐ TGF-β 1 正向：GACTCTCCACCTGCAAGACC 139
反向：GGACTGGCGAGCCTTAGTTT
nase 1/2，ERK1/2）为主，其激活后可促进 Smad3 的磷酸
Smad3 正向：AGAGTTAAAAGCGAAGTTCGGG 100
化，最终介导肾间质的病理性损伤 [11―12] ；ERK1/2 还可放 反向：TTCACGTTCTGCGTGGTGA
大纤维化信号，加速 EMT，诱导成纤维细胞异常增 ERK1 正向：CCAAACAAGCGCATCACAGT 295
殖 [13―14] 。基于此，本研究拟采用马奶炮制镰形棘豆，以 反向：CCACTGGTTCATCTGTCGGA
ERK2 正向：TCCATGTAGCTAGAGTGCCTTC 82
降低其毒性；并基于TGF-β1/Smad信号通路探讨镰形棘
反向：ACCCAGAGCATCAGTCTGTGA
豆炮制品对 RF 大鼠的改善作用及机制，以期为镰形棘 β-actin 正向：ACTCTGTGTGGATTGGTGGC 73
豆防治RF的临床应用提供理论依据。 反向：GCAGCTCAGTAACAGTCCGC
1 材料 1.3 实验动物
1.1 主要仪器 本 研 究 所 用 动 物 为 SPF 级 SD 雄 性 大 鼠 ，体 重
本研究所用主要仪器包括TGL-16型高速低温台式 （200±20）g，共 56 只，均购自中国农业科学院兰州兽医
离心机（德国 Eppendorf 公司）、Multiskan Mk3 型酶标仪 研究所，动物生产许可证号为SCXK（甘）2023-0003。本
（美国Thermo Fisher Scientific公司）、Gentier 96R型实时 实验经西北民族大学伦理委员会审查批准（伦理批号为
定量聚合酶链式反应（PCR）仪（西安天隆科技有限公 xbmu-sm-202588）。
司）、SH-Compact523 型化学发光成像系统（杭州申花科 2 方法
技有限公司）、IX51型荧光显微镜（日本Olympus公司）。 2.1 镰形棘豆炮制品的制备
1.2 主要药品与试剂 本课题组前期采用藏药特色的马奶炮制方法对镰
镰形棘豆（货号20230901）购自西藏那曲市嘉黎县， 形棘豆进行炮制，得到最佳工艺参数为：取镰形棘豆 50
经甘肃省第二人民医院药学部马新换主任中药师鉴定 g，加入12倍量马奶，浸泡60 min，再置于60 ℃干燥箱中
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为豆科棘豆属植物镰形棘豆的干燥全草。马奶粉（货号 烘干，即得 。取上述炮制后的镰形棘豆适量，加入 12
20221105）购自新疆源西域生物科技有限公司；秋水仙 倍量水浸泡0.5 h，煎煮1 h，过滤；再加入8倍量水煎煮0.5
碱（货号H20113208）购自广东彼迪药业有限公司；腺嘌 h，过滤；合并2次滤液，减压浓缩成质量浓度为0.1 g/mL
呤（货号K459001）购自上海笛柏生物科技有限公司；苏 （以生药量计）的镰形棘豆炮制品提取液，备用。

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