Page 65 - 《中国药房》2026年8期
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ISCK03 组），每组 8 只；另取 8 只正常饲养的大鼠，作为 液，孵育30 min；加入PCNA、NF-κB p65、β-actin一抗（稀
对照组（Control 组）。其中，Control 组大鼠灌胃等体积 释比例分别为 1∶500、1∶500、1∶1 000），孵育过夜；加入
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生理盐水；Positive 组大鼠灌胃 250 mg/kg 的维酶素 ； 相应二抗（稀释比例为1∶1 000），孵育30 min；滴加3-3′-
[5]
PNS-L、PNS-H 组大鼠分别灌胃 9、18 mg/kg 的 PNS ； 二氨基联苯胺（DAB）显色液显色、苏木精染色液复染
PNS-H+ISCK03组大鼠灌胃18 mg/kg的PNS和47 mg/kg 后，使用光学显微镜进行观察，并采用Image J软件分析
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的 ISCK03 ；上述药液的配制均以 0.5% 羧甲基纤维素 阳性区域（呈棕色）的平均光密度值，用以表示目的蛋白
钠溶液为溶剂。各组大鼠每天灌胃1次，连续3周。 的表达水平。
2.2 样本采集 2.8 胃黏膜组织中SCF/c-kit信号通路蛋白表达检测
末次给药 12 h 后，取各组大鼠，腹腔注射戊巴比妥 采用 Western blot 法检测。取各组大鼠经冻存的胃
钠（30 mg/kg）麻醉后，采集其腹主动脉血；血样以 3 000 黏膜组织适量，加入RIPA裂解液充分研磨，于4 ℃下以
r/min 离心 15 min，收集上层血清，于－80 ℃下保存，备 12 000 r/min离心20 min，取上清液，以BCA法对所得蛋
用。随后，将各组大鼠处死，剖开腹部，收集其胃黏膜组 白进行定量后再进行变性处理。取变性蛋白适量，进行
织，取一部分用于SEM观察；取一部分冻存，用于ELISA 电泳分离、转膜、封闭；洗膜后，加入 SCF、c-kit、p-c-kit、
和 Western blot 实验；取剩余部分，于 4% 多聚甲醛溶液 β-actin一抗（稀释比例均为1∶1 000），孵育过夜；洗膜后，
中固定，用于HE染色观察及免疫组化实验。 加入相应二抗（稀释比例为1∶1 000），于室温下孵育1 h；
2.3 血清中胃激素及胃黏膜组织中炎症因子表达检测 经显色、成像后，使用 Image J 软件分析蛋白条带灰度
取“2.2”项下各组大鼠经冻存的血清和胃黏膜组织 值，以目的蛋白与内参蛋白（β-actin）的灰度值比值表示
样品适量，按 ELISA 试剂盒说明书操作，以酶标仪检测 各目的蛋白的表达水平，以p-c-kit与c-kit的灰度值比值
其血清中胃激素水平/活性（GAS、MTL水平和PP活性） 表示c-kit蛋白的磷酸化水平。
和胃黏膜组织中炎症因子（TNF-α、IL-10、IL-8）水平。 2.9 统计学方法
2.4 胃黏膜组织病理变化观察
使用SPSS 24.0软件对数据进行统计分析。计量资
取“2.2”项下各组大鼠经固定的胃黏膜组织适量，经 料符合正态分布，以 x±s 表示，多组间比较采用单因素
脱水、透明后进行常规石蜡包埋、切片。取组织切片适
方差分析，进一步两两比较采用 LSD-t 检验。检验水准
量，经脱蜡至水后，依次以苏木精、伊红染液染色；封片 α＝0.05。
后，使用光学显微镜观察其胃黏膜组织的病理改变，并 3 结果
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参照 Dixon 等 的评分标准，从炎症浸润、腺体形态、上
3.1 PNS 对大鼠血清中胃激素及胃黏膜组织中炎症因
皮损伤 3 个方面进行胃黏膜萎缩评分：无损伤，记 0 分；
子表达的影响
轻度损伤，记1分；重度损伤，记2分；总分为0～6分，评
与 Control 组比较，Model 组大鼠血清中 GAS、MTL
分越高表明胃黏膜损伤越重。 水平，PP活性及胃黏膜组织中IL-10水平均显著降低，胃
2.5 胃黏膜上皮细胞超微结构观察
黏膜组织中 TNF-α、IL-8 水平均显著升高（P＜0.05）；与
取“2.2”项下各组大鼠未经冻存、固定的胃黏膜组织
适量，用2.5%戊二醛前固定、1%锇酸后固定（需避光）； Model 组比较，Positive 组和 PNS-L、PNS-H 组大鼠血清
中 GAS、MTL 水平，PP 活性及胃黏膜组织中 IL-10 水平
取固定好的样本，经梯度乙醇脱水后放入乙酸异戊酯中
浸泡 30 min，再经干燥、黏附、镀膜后，使用 SEM 观察其 均显著升高，而胃黏膜组织中 TNF-α、IL-8 水平均显著
降低，且 PNS-H 组上述指标的变化均比 PNS-L 组显著
胃黏膜上皮细胞的超微结构。
（P＜0.05）；与 PNS-H 组比较，PNS-H+ISCK03 组大鼠血
2.6 胃黏膜组织细胞凋亡情况检测
清中 GAS、MTL 水平，PP 活性及胃黏膜组织中 IL-10 水
采用TUNEL染色法检测。取“2.4”项下各组大鼠的
平均显著降低，而胃黏膜组织中 TNF-α、IL-8 水平均显
胃黏膜组织切片，经脱蜡至水后进行抗原修复及通透处
著升高（P<0.05）。结果见表1。
理，并加入 3%H2O2孵育 10 min；加入 TUNEL 反应液覆
盖组织，于37 ℃下避光孵育1 h；加入4′，6-二脒基-2-苯 表1 各组大鼠血清中胃激素水平/活性及胃黏膜组织
基吲哚（DAPI）染液避光染色 10 min 后，使用荧光显微 中炎症因子水平比较（x±s，n＝8）
镜观察胃黏膜组织中细胞的凋亡情况，并计算细胞凋亡 组别 血清 胃黏膜组织
率（细胞凋亡率＝红色荧光凋亡细胞数/总细胞数× GAS/（pg/mL） MTL/（pg/mL） PP/（U/mL） TNF-α/（pg/mL） IL-10/（pg/mL）IL-8/（pg/mL）
Control组 196.33±11.43 381.33±20.64 17.87±1.64 74.25±5.83 21.51±1.77 14.03±1.20
100%）。 Model组 134.50±9.36 a 227.26±17.05 a 7.31±1.12 171.60±11.37 a 9.32±0.87 56.37±3.11 a
a
a
b
b
b
2.7 胃黏膜组织中PCNA、NF-κB p65蛋白表达检测 Positive组 179.28±12.11 348.31±25.61 14.70±1.30 b 93.20±6.25 b 16.38±1.34 27.18±2.33 b
b
b
b
PNS-L组 157.64±8.98 b 285.52±21.65 11.77±1.56 146.18±11.05 13.24±1.10 43.26±2.18 b
b
采用免疫组化法检测。取“2.4”项下各组大鼠的胃
bc
bc
bc
PNS-H组 185.59±12.80 369.21±23.10 16.65±1.21 bc 85.54±6.23 bc 18.87±1.25 20.51±0.49 bc
黏膜组织切片，经脱蜡至水后，浸入 3%H2O2中，于室温 PNS-H+ISCK03组 151.50±11.37 265.47±18.55 10.08±1.25 153.54±10.42 11.70±1.69 49.33±3.52 d
d
d
d
d
d
下孵育10 min；用PBST溶液清洗后，放入柠檬酸盐抗原 a：与Control组比较，P＜0.05；b：与Model组比较，P＜0.05；c：与
修复液中，加热煮沸15 min；滴加5%牛血清白蛋白封闭 PNS-L组比较，P＜0.05；d：与PNS-H组比较，P＜0.05。
中国药房 2026年第37卷第8期 China Pharmacy 2026 Vol. 37 No. 8 · 1023 ·
