Page 63 - 《中国药房》2026年5期
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低温研磨匀浆，再以 3 000 r/min 离心 15 min，收集上清 2.8 统计学方法
液；取上清液适量，根据ELISA试剂盒说明书方法操作， 以SPSS 25.0软件分析数据。符合正态分布的数据
检测兔耳增生性瘢痕组织中炎症因子（IL-6、IL-10）水平。 以x±s表示，多组间及两两比较分别采用单因素方差分
2.6 兔耳增生性瘢痕组织病理学形态观察 析、SNK-q法。检验水准α＝0.05。
取“2.5”项下于 4% 甲醛溶液中固定的兔耳增生性 3 结果
瘢痕组织，经脱水、石蜡包埋后进行切片（厚度10 μm）。 3.1 积雪草苷对兔耳增生性瘢痕外观的影响
取部分切片经脱蜡、水化后，依次加入苏木精、伊红染液 对照组兔耳创面正常；模型组兔耳出现增生性瘢
进行 HE 染色，封片后，采用显微镜观察，并利用 Image 痕，增生组织呈硬块状，存在出血及炎症症状；阳性对照
Pro Plus软件计算成纤维细胞密度，成纤维细胞密度（个/ 组、积雪草苷各剂量组兔耳增生性瘢痕软化，无明显突
2
mm）＝视野内成纤维细胞总数/视野的实际面积。另取 起现象，且积雪草苷高剂量组与阳性对照组的瘢痕症状
部分切片，经脱蜡、水化后，依次加入苏木精、丽春红染 较为接近。结果见图1。
液进行Masson染色，再分别加入磷钼酸、冰醋酸进行处
理，封片后，采用显微镜观察，并利用 Image Pro Plus 软
件计算胶原纤维面（呈蓝色）密度，胶原纤维面密度＝视
野内胶原面积/视野的实际面积×100%。
2.7 兔耳增生性瘢痕组织中 COLⅠ、COLⅢ、Wnt4、 A.对照组 B.模型组 C.阳性对照组
β-catenin蛋白表达水平测定
2.7.1 免疫组化法检测
取“2.5”项下兔耳增生性瘢痕组织切片，经脱蜡、脱
水、复水后，加入适量 H2O2溶液，清洗后，再加入 COLⅠ
D.积雪草苷低剂量组 E.积雪草苷高剂量组
（稀释度为1∶150）、COLⅢ（稀释度为1∶200）一抗孵育过
图1 各组兔耳增生性瘢痕的外观图
夜，次日加入相应二抗（稀释度为 1∶300）孵育 1 h；以苏
3.2 积雪草苷降低兔耳增生性瘢痕指数
木精复染，用显微镜观察 COLⅠ、COLⅢ蛋白阳性表达
与对照组（1.00±0.12）比较，模型组兔耳增生性瘢
情况（呈棕黄色），并利用 Image Pro Plus 软件分析 COL
痕指数（2.27±0.24）显著升高（P＜0.05）；与模型组比
Ⅰ、COLⅢ蛋白表达水平（以阳性表达区域平均光密度
较，阳性对照组和积雪草苷低、高剂量组兔耳增生性瘢
值表示）。
痕 指 数 [ 分 别 为（1.22±0.15）、（1.78±0.19）、（1.28±
2.7.2 免疫荧光法检测
0.15）]均显著降低（P＜0.05），且阳性对照组和积雪草苷
取“2.5”项下兔耳增生性瘢痕组织切片，经抗原修复
高剂量组兔耳增生性瘢痕指数均显著低于积雪草苷低
后，加入 Wnt4（稀释度为 1∶300）、β-catenin（稀释度为
剂量组（P＜0.05）。
1∶300）一抗孵育30 min；清洗后，加入相应二抗（稀释度
3.3 积雪草苷改善兔耳增生性瘢痕组织中炎症因子
为1∶500）孵育30 min，经DAPI染核后封片；采用荧光显
水平
微镜观察 Wnt4、β-catenin 的阳性表达情况（呈红色），并
与对照组比较，模型组兔耳增生性瘢痕组织中IL-6
利用 Image J 软件分析 Wnt4、β-catenin 蛋白的表达水平
水平显著升高，IL-10水平显著降低（P＜0.05）；与模型组
（以阳性表达区域的荧光强度值表示）。
比较，阳性对照组和积雪草苷各剂量组兔耳增生性瘢痕
2.7.3 Western blot法检测
组织中 IL-6 水平均显著降低，IL-10 水平均显著升高
每组取 8 份（每只兔取 1 份）兔耳增生性瘢痕组织， （P＜0.05），且阳性对照组和积雪草苷高剂量组上述指
以预冷RIPA裂解液提取蛋白，BCA法定量，并于蛋白变 标改善较积雪草苷低剂量组更明显（P＜0.05）。结果
性后，行 SDS-PAGE、转膜、封闭处理。封闭结束后， 见图2。
加入 Wnt4、β-catenin、GAPDH（稀释度分别为 1∶1 000、 3.4 积雪草苷减轻兔耳增生性瘢痕组织病理损伤
1∶1 000、1∶2 000）一抗孵育过夜，次日加入相应二抗（稀 对照组兔耳真皮组织中胶原纤维排列整齐，成纤维
释度为 1∶5 000）孵育 1 h。经曝光处理后，以 Image J 软 细胞密度为（287.39±26.17）个/mm 、胶原纤维面密度为
2
件分析各组蛋白表达水平（以目的蛋白和内参 GAPDH （21.18±3.42）%。与对照组比较，模型组兔耳增生性瘢
的灰度值比值表示）。 痕组织的角质层变厚，真皮组织中胶原纤维异常沉积且
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