Page 76 - 《中国药房》2025年17期
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（2）独立性假设——工具变量与任何潜在的混杂变量独                            准化处理。以比值比（odds ratio，OR）及其 95% 置信区
          立；（3）排除限制假设——工具变量对结果的影响应当                           间（confidence interval，CI）来判断暴露与冠心病风险的
                                     [12]
          是间接的，且仅通过暴露来实现 。                                    关联性，OR＞1 表示暴露与冠心病风险呈正向关联，提
          1.4 冠心病相关核心基因筛选                                     示其可能增加患病风险；OR＜1表示暴露与冠心病风险

              本研究采用两步、双样本MR 法筛选冠心病相关核                         呈反向关联，提示其可能对冠心病具有保护作用。
          心基因，以确保核心基因的准确性。具体步骤为：（1）使用                         2 结果
          UK Biobank 数据库的 pQTL 数据与冠心病 GWAS 数据                 2.1 基于 pQTL 数据的与冠心病相关的核心基因 MR
          进行MR分析，以逆方差加权（inverse variance weighting，           分析结果
          IVW）法的计算结果为主要结果（P＜0.05为差异具有统                            本研究对 UK Biobank 数据库中的 pQTL 数据进行
          计学意义），筛选与冠心病相关的阳性基因。（2）根据筛                          过滤，共获得1 812个基因，对其逐一进行双样本MR分
          选出的阳性基因，从 deCODE 数据库中提取冰岛 pQTL                      析，以IVW法的计算结果为主要结果，P＜0.05为差异具
          数据，进行二次验证，具体参数同上，并提取阳性结果，                           有统计学意义。结果显示，有 341 个阳性基因与冠心病
          最后得到与冠心病相关的核心基因集。                                   存在显著因果关联。进一步提取341个阳性基因的冰岛
          1.5 通脉养心丸治疗冠心病的转录组测序及差异基因                           pQTL数据进行双样本MR分析，结果显示，有62个阳性
          筛选                                                  基因与冠心病存在显著因果关联。后续研究进一步分
              根据美国 GEO 数据库中天津中医药大学提供的通                        析了 62 个阳性基因在通脉养心丸治疗冠心病的转录组
          脉养心丸治疗冠心病的转录组测序数据进行差异基因                             测序中的表达水平，基因表达具有差异的 pQTL 数据的

          筛选。在该转录组测序数据集中，通脉养心丸的用法用                            MR分析阳性结果见图1、图2。
          量是口服，每次4 g，早晚各1次，持续8周。本研究设置
          的具体筛选参数为：log2FC≥0.5，P＜0.05。其中，FC 表
          示基因表达水平的倍数变化。利用韦恩图将获得的差
          异基因集与“1.4”项下所得的与冠心病相关的核心基因
          集取交集获得差异基因，逐一验证差异基因的表达水平。
                                                              图1 具有基因表达差异的 UK Biobank pQTL 数据的
          1.6 免疫细胞与血浆代谢物的中介效应分析
                                                                   MR分析阳性结果
              本研究采用两步、双样本MR 法进行免疫细胞与血
          浆代谢物的中介效应分析。以免疫细胞为例，具体步骤
          为：（1）以免疫细胞作为暴露数据、冠心病作为结局数
          据，筛选与冠心病具有显著关联的免疫细胞；（2）以差异
          基因作为暴露数据、免疫细胞作为结局数据，筛选差异
          基因可能调控的下游免疫细胞。将差异基因到免疫细                             图2 具有基因表达差异的冰岛pQTL数据的MR分析
          胞的效应记为 beta_m，免疫细胞到冠心病的效应记为                              阳性结果
          beta_n，差异基因到冠心病的效应记为beta_k；中介效应                         为了确保结果的稳健性，本研究对全部MR 分析结
          beta_mn＝beta_m×beta_n；中介比例 beta_p＝beta_mn/          果进行了异质性检验与水平多效性分析，但是考虑到
          beta_k×100%。将 beta_p＜0 的结果剔除，beta_p＞0 为             GWAS中SNP间的固有异质性，本研究仅纳入水平多效
          具有中介效应，beta_p＞10% 为具有显著中介效应，P＜                      应性分析结果作为排除标准，以确保符合MR的核心工
                                  [13]
          0.05为差异具有统计学意义 。血浆代谢物的中介效应                          具变量假设。结果显示，2次pQTL数据的MR分析共鉴
          分析过程同上。以此综合预测通脉养心丸治疗冠心病                             定出7个与通脉养心丸治疗冠心病相关的核心基因，其
          潜在的免疫及代谢机制。                                         中 AMIGO2、FAM3D、OXT、STX7 与冠心病风险升高相
          1.7 统计分析                                            关，而ENPP5、PGD、RELT与冠心病风险降低相关。
              本研究应用R4.4.2软件与RStudio-2024.09.1软件完              2.2 核心基因表达水平的转录组测序结果
          成全部统计分析及可视化处理，使用 TwoSampleMR                            本研究根据美国GEO数据库中GSE142008数据集
          0.6.8包完成双样本MR分析。检验水准α＝0.05。使用                       设置参数log2FC≥0.5、P＜0.05，在通脉养心丸治疗冠心
          R 语言中的“limma 3.62.1”包完成转录组测序数据的标                    病的转录组测序数据中共筛选出 2 595 个差异基因，再


          · 2150 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 17                            中国药房  2025年第36卷第17期
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