Page 75 - 《中国药房》2025年1期
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can  alleviate  mitochondrial  membrane  damage  and  abnormal  accumulation  of  ROS  caused  by  H2O2，  which  may  be  related  to  the
          inhibition of ferroptosis by activating the Nrf2/HO-1 signaling pathway.
          KEYWORDS    persimmon leaf extract； ulcerative colitis； ferroptosis； Nrf2/HO-1 signaling pathway


              溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是炎症性肠病                铁死亡抑制剂 ferrostatin-1（Fer-1）的对照品（批号
                                                       [1]
          的主要类型之一，其发病率在全球范围内不断上升 。                           HY100579，纯度 99.96%）购自美国 MedChemExpress 公
          长期以来，氧化应激被学界认为是 UC 的重要致病因                          司；胎牛血清（fetal bovine serum，FBS；批号2181654CP）
            [2]
          素 。在UC的发病过程中，肠道炎症反应的发生可促进                          购自美国Gibco公司；MTT试剂、DMEM高糖培养基、胰
          细胞过度产生活性氧（reactive oxygen species，ROS），当           蛋白酶、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）试
          ROS的生成超过机体的抗氧化缓冲能力时，会导致脂质                          剂盒、MDA 试剂盒、线粒体膜电位 JC-1 试剂盒（批号分
          过氧化的发生，并进一步诱发铁死亡 。可见，铁死亡主                          别为20210508、20210903、20210804、20210323、20210303、
                                         [2]
          要由脂质过氧化累积所致，减轻机体氧化应激反应可有                           20210412）均购自北京索莱宝科技有限公司；PCR 试剂
          效抑制铁死亡。研究指出，无论是UC还是用于UC治疗                          盒购自凯杰生物工程（深圳）有限公司；Trizol试剂（批号
          的药物都会增加患者并发症（如结肠癌、皮肤癌、宫颈                           20210316）购自北京康为世纪生物科技有限公司；Revert-
                                                                TM
          癌、骨骼疾病、焦虑抑郁等）的发生风险，若不及时治疗，                         Aid  First Strand cDNA 合成试剂盒（批号 00780630）购
                                                             自美国 Thermo Fisher Scientific 公司；ROS 试剂盒（荧光
          这些并发症将导致不良的用药依从性、更高的医疗费
                                                             探针法，批号D3861）购自美国Invitrogen公司；兔源胱氨
          用 、更 快 的 疾 病 进 展 ，从 而 严 重 影 响 患 者 的 生 活
                                                             酸/谷 氨 酸 反 向 转 运 体（cystine/glutamate  anti-porter，
          质量  [3―4] 。
                                                             xCT）、谷胱甘肽过氧化物酶 4（glutathione peroxidase 4，
              柿叶（persimmon leaf，PL）提取物多年来被广泛用
                                                             GPX4）抗体（批号分别为ab307601、ab125066）均购自英
          作炎症性疾病的治疗剂。研究显示，PL 提取物具有抗
                                                             国 Abcam 公司 ；兔源核转录因子红系 2 相关因子 2
          炎、抗氧化的作用 ，其主要活性成分槲皮素可通过降低
                         [5]
                                                            （nuclear factor-erythroid 2-related factor 2，Nrf2）、铁蛋白
          丙二醛（malondialdehyde，MDA）和 ROS 水平、抑制铁死
                                                             重 链（ferritin  heavy  chain，FTH）抗 体（批 号 分 别 为
                                                  [6]
          亡来减轻缺血再灌注或叶酸诱导的急性肾损伤 。本课
                                                             #AF0639、#DF6278）均购自美国Affinity公司；兔源还原
                                                     [7]
          题组前期研究发现，PL提取物对UC具有保护作用 ，但
                                                             型 烟 酰 胺 腺 嘌 呤 二 核 苷 酸 磷 酸/醌 氧 化 还 原 酶 1
          这种作用是否与氧化应激和铁死亡相关并不清楚。实
                                                            （NADPH/quinone oxidoreductase-1，NQO-1）、血红素氧
                                                    [8]
          验表明，过氧化氢（H2O2 ）可诱导细胞发生铁死亡 。基
                                                             合 酶 1（heme  oxygenase-1，HO-1）抗 体（批 号 分 别 为
          于此，本研究拟以 H2O2致铁死亡的 IEC-6 细胞（具隐窝
                                                             GB11282、GB11549）均购自武汉赛维尔生物科技有限公
          样上皮细胞特征，是UC相关体外研究的常用细胞）作为
                                                             司；兔源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）抗体（批号
          体外模型，初步探讨PL提取物对该细胞模型的影响，以
                                                             10494-1）购自武汉三鹰生物科技有限公司；辣根过氧化
          期为UC治疗新药的研发提供参考。
                                                             物酶（HRP）标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G 二抗（批号
          1 材料                                               162607）购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司。
          1.1 主要仪器                                           1.3 细胞
              本研究所用主要仪器包括Incubator CO2-PU-90A型                   大鼠IEC-6细胞由北京协和医学院基础学院细胞库
          CO2培养箱（上海搏旅仪器有限公司）、Ti20 型倒置荧光                      提供。
          显微镜（日本 Nikon 公司）、EXL800 型酶标仪（美国                    2 方法
          BioTek 公 司）、Navios 型 流 式 细 胞 仪（美 国 Beckman         2.1 药液的制备
          Coulter 公司）、K5500Plus 型实时聚合酶链反应（real-                  PL 提取物药液的制备参考本课题组前期已发表的

          time PCR，RT-PCR）仪（北京凯奥科技发展有限公司）等。                  文献[8]。
          1.2 主要药品与试剂                                        2.2 细胞培养与处理
              PL（产地安徽亳州，批号20210314）购自安徽亳州药                       将 IEC-6 细胞接种于含 5%FBS 的 DMEM 高糖培养
          材市场，由河南省中西医结合医院中药研究所刘长河副                           基（以下简称“完全培养基”）中，在 37 ℃、5%CO2、饱和
          研究员鉴定为柿树科植物柿 Diospyros kaki Thunb. 的干              湿度条件（培养条件后同）下培养，每2～3 d换液1次，待
          燥叶。                                                细胞生长至对数期进行后续实验。


          中国药房  2025年第36卷第1期                                                  China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 1    · 65 ·
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