Page 47 - 《中国药房》2024年24期
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或不愈合的现象 。目前临床上用于治疗骨折的药物多
以化学药物为主,但其会对人体产生不同程度的副作
用,例如抑制血管再生、骨化等,诱发血肿感染,长期服
用会造成骨折愈合延迟,甚至会导致骨不连。因此,亟
待研发毒副作用小、适合长期服用的药物治疗骨折。
接骨木Sambucus williamsii Hance为忍冬科植物,其
根、茎、花、叶均可入药,性味甘、苦、平,无毒,具有接骨 A.盐丹 B.野生接骨木
续筋、活血止痛、祛风利湿的功效,主要用于治疗跌打损 图1 盐丹和野生接骨木的根皮照片
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伤、骨折肿痛、外伤出血、风湿痹痛、大骨节病等 ,且促
许可证号为 SCXK(京)2021-0011。本实验在山东中医
进骨折愈合的疗效显著,具有疗程短、功能恢复快、疗效 药大学实验动物中心屏障环境设施内进行,动物实验使
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高、无毒副作用的特点 。黄河流域盐碱地种植的盐丹
用许可证号为SYXK(鲁)2017-0022,并经山东中医药大
是国家林业和草原局认证的接骨木新品种,不仅可以造
学 动 物 伦 理 审 查 委 员 会 审 核 批 准 ,批 准 号 为
林,还可以药用。与普通接骨木相比,该品种耐盐碱环
SDUTCM20211223001。
境,有利于次生代谢产物的积累,可能具有更强的药理
活性。本课题组前期已对该品种进行了活性成分的含 2 方法
量测定,结果显示,盐丹根皮中促进骨折愈合的主要活 2.1 接骨木根皮提取物制备
性成分莫诺苷含量较高,约 7.0 mg/g 。在此基础上,本 参照相关文献 [6―7] 的方法制备接骨木根皮提取物。
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研究通过建立大鼠股骨骨折模型,考察盐丹对骨折愈合 将干燥的接骨木根皮粉碎,分别用3倍量70%乙醇、95%
的影响,旨在为开发治疗骨折的新中药品种奠定理论 乙醇、70% 乙醇加热回流提取 3 次,第 1 次提取 3 h,后 2
基础。 次分别提取 2 h,合并乙醇提取液,抽滤,减压浓缩回收
1 材料 溶剂,得接骨木浸膏。盐丹浸膏1 g相当于原药材4.50 g,
1.1 主要仪器 野生接骨木浸膏1 g相当于原药材3.20 g。
本研究所用主要仪器包括 Eppendorf 5804R 型台式 2.2 大鼠股骨骨折模型构建
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高速冷冻离心机(山东奥恒生物科技有限公司)、Micro- 参照相关文献 的方法制备大鼠股骨骨折模型。
CT SkyScan 1276 型小动物成像平台(德国 Bruker 公 SD大鼠适应性喂养1周后进行造模。大鼠造模前8 h禁
司)、SpectraMax M5 型酶标仪(美国 Molecular Devices 食不禁水,麻醉后取左侧俯卧位,剔除右侧髋部及大腿
公司)、DW-86L388J 型恒温培养箱(青岛海尔特种电器 外侧毛,备右后肢皮肤,消毒后在右股骨外侧切口(长
有限公司)、Eclipse Ci-L 型正置光学显微镜和 DS-U3 型 1.5~2.5 cm),分离股外侧肌,充分暴露股骨,于股骨中
成像系统(日本Nikon公司)。 段剪断股骨(剪断时应注意骨折断端的完整性),断端间
1.2 主要药品与试剂
距尽量小于1 mm;将直径为1 mm的克氏针从骨折断端
中华跌打丸(批号210215419,规格6 g/丸)购自广西
逆行插入股骨干的近端,并在股骨大转子处穿出,复位
梧州制药(集团)股份有限公司;注射用青霉素钠(批号
两个骨折断端,并在复位后将克氏针顺行穿回;活动大
43210916,规格 80 万单位)购自山东鲁抗医药股份有限
鼠术侧膝关节,确认克氏针未插入膝关节内且固定牢
公司;C004-2-1 型钙、C006-1-1 型磷、A059-2-2 型碱性磷
靠,剪除多余的克氏针;用适量生理盐水冲洗切口,缝合
酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、H152 型骨钙素(osteo‐
肌肉和皮肤。假手术组大鼠仅暴露股骨干,不剪断股
calcin,OCN)测试盒(批号分别为 20220629、20220906、
骨。大鼠术后每天肌内注射青霉素 4×10 单位/kg,连
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20220817、20220923)均购自南京建成生物工程研究
续 7 d。大鼠股骨骨折模型造模成功率约为 80%,及时
所;多聚甲醛溶液、乙二胺四乙酸脱钙液、苏木精染液、
排除并补充造模不成功或造模中死亡的大鼠。
伊 红 染 液( 批 号 分 别 为 CR2209049、CR2207156、
2.3 分组与给药
CR2209082、CR2211079)均购自武汉塞维尔生物科技有
限公司。 将造模成功的大鼠随机分为模型组,中华跌打丸组
接骨木新品种盐丹的根采集自山东省济南市平阴 (阳性对照;0.54 g/kg,临床等效剂量),盐丹高、中、低剂
县,野生接骨木的根采集自山东省青州市仰天山,经山 量组(10.8、5.4、2.7 g/kg,临床等效剂量的4、2、1倍,以生
东中医药大学药学院周凤琴教授鉴定,均为忍冬科接骨 药量计),野生接骨木组(5.4 g/kg,临床等效剂量的2倍,
木S. williamsii Hance的根皮(图1)。 以生药量计);另取假手术大鼠设为假手术组,每组 12
1.3 动物 只,雌雄各半。于术后第2天起,各给药组大鼠灌胃相应
SPF 级 SD 大鼠,雌雄各半,体质量(200±20)g,购 药物,假手术组和模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水,每日1
自北京维通利华实验动物技术有限公司,实验动物生产 次,连续8周。
中国药房 2024年第35卷第24期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 24 · 3005 ·