Page 74 - 《中国药房》2024年15期
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2 方法                                                2.6 胃癌肿瘤组织病理形态学观察
          2.1 细胞培养                                                采用HE染色法观察。每组随机选取6只小鼠的肿

              将 MFC 细胞复苏后接种于含 10% 胎牛血清的                       瘤组织，使用多聚甲醛进行固定，并制备组织切片，经
          RPMI 1640 培养基中，在常规条件的细胞培养箱中培                        HE常规染色后，观察小鼠肿瘤组织的病理形态学特征。
          养，适时进行换液和传代。取传代 3 次以上的对数期                           2.7 胃癌肿瘤组织中JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3
          MFC细胞进行造模。                                          和IL-6蛋白表达检测
          2.2 胃癌荷瘤小鼠模型的建立                                         采用 Western blot 法检测。每组选取 6 只小鼠的肿

                                                 6
              调整对数期 MFC 细胞的密度为 1.5×10 个/mL，在                  瘤组织适量，加入RIPA裂解液提取组织中总蛋白；经变
          无菌环境下，随机选取60只小鼠，消毒后，经右侧腋下皮                          性、电泳、转膜、封闭后，加入 JAK2、STAT3、p-JAK2、p-
          下注射MFC细胞悬液0.2 mL/只。1周后，当观察到小鼠                       STAT3、IL-6、GAPDH一抗稀释液（稀释度均为1∶1 000），
          右侧腋下出现约0.5 cm的瘤状凸起时，说明胃癌荷瘤小                         4 ℃下孵育过夜；洗膜后，加入二抗（稀释度1∶4 000），室
                        [11]
          鼠模型构建成功 。                                           温继续孵育 2 h；经 ECL 显色、曝光后，采用凝胶成像分
          2.3 动物分组与给药                                         析系统进行成像，采用 Image J 软件测定条带灰度值。
              将造模成功的 48 只小鼠随机分为模型组（Model                      以目的蛋白条带灰度值与内参（GAPDH）蛋白条带灰度
                                                              值的比值表示目的蛋白的表达水平，以p-JAK2/JAK2、p-
          组）、低剂量 LIQ 组（LIQ-L 组）、高剂量 LIQ 组（LIQ-H
          组）、高剂量 LIQ+JAK2 激活剂香豆霉素 A1 组（LIQ-                   STAT3/STAT3 比 值 表 示 JAK2、STAT3 蛋 白 的 磷 酸 化
          H+香豆霉素 A1 组），每组 12 只。另取 12 只小鼠，在                    水平。
                                                              2.8 统计学方法
          造模部位注射等体积生理盐水，设为正常组（Normal
                                                                  采用 GraphPad Prism7.0 软件进行统计分析。计量
                                             3
          组）。当造模小鼠肿瘤生长至 100 mm 时开始给药，
                                                              资料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，进
          LIQ-L 组、LIQ-H 组大鼠分别按 20、40 mg/kg 灌胃 LIQ
                                                              一 步 的 组 间 两 两 比 较 采 用 LSD-t 检 验 。 检 验 水 准
              [12]
          溶液 ，并腹腔注射等体积生理盐水；LIQ-H+香豆霉
                                                              α＝0.05。
          素 A1 组大鼠在灌胃 40 mg/kg LIQ 溶液的基础上腹腔
                                                              3 结果
                                     [13]
          注射 1 mg/kg 香豆霉素 A1 溶液 ；Normal 组、Model 组
                                                              3.1 LIQ对胃癌小鼠的肿瘤体积、质量和抑制率的影响
          大鼠灌胃并腹腔注射等体积生理盐水；每日给药 1
                                                                  与Model组相比，LIQ-L组、LIQ-H组小鼠胃癌肿瘤
          次，连续 14 d。
                                                              体积、肿瘤质量均显著减小/降低，且具有剂量依赖性
          2.4 胃癌肿瘤的体积、质量、抑制率以及脏器指数测定
                                                             （P＜0.05）。与LIQ-H组相比，LIQ-H+香豆霉素A1组小
              末次给药后，小鼠进行眼眶取血，血样置于冷凝管
                                                              鼠胃癌肿瘤体积、肿瘤质量均显著增大/升高（P＜0.05），
          中并进行抗凝处理，于－80 ℃冰箱中冻存。之后脱颈
                                                              肿瘤抑制率降低。结果见表1。
          处死所有小鼠，解剖剥离其胃癌肿瘤以及胸腺、脾脏
                                                              表1 各组小鼠肿瘤体积、肿瘤质量和肿瘤抑制率比较
          等，采用电子天平称重并记录，并计算肿瘤抑制率[肿
                                                                  （x±s，n＝12）
          瘤抑制率＝（模型组肿瘤质量－给药组肿瘤质量）/模
                                                              组别              肿瘤体积/mm 3     肿瘤质量/mg   肿瘤抑制率/%
          型组肿瘤质量×100%]、胸腺（脾脏）指数[胸腺（脾脏）                        Model组         1 286.54±84.25  1.43±0.18   －
          指数＝胸腺（脾脏）质量/体重]。另外，使用游标卡尺测                          LIQ-L组          935.42±53.80 a  0.96±0.08 a  32.87
                                                              LIQ-H组          572.69±38.44 ab  0.52±0.09 ab  63.64
          量肿瘤的长径（a）和短径（b），然后计算肿瘤体积（肿瘤                         LIQ-H+香豆霉素A1组   818.73±50.36 c  0.86±0.09 c  39.86
                    2
          体积＝a×b ×0.5）。                                          a：与Model组相比，P＜0.05；b：与LIQ-L组相比，P＜0.05；c：与
          2.5 外周血中CD4 、CD8 T淋巴细胞百分率检测                         LIQ-H组相比，P＜0.05。
                           +
                                +
              采用流式细胞术检测。取小鼠经抗凝处理的外周                           3.2 LIQ对胃癌小鼠脏器指数的影响
                               +
                          +
          血加入兔抗鼠CD4 、CD8 抗体，4 ℃下避光孵育；加入红                          与 Normal 组相比，Model 组小鼠胸腺指数、脾脏指
          细胞裂解液，离心取细胞沉淀，加入磷酸盐缓冲液重悬                            数均显著升高（P＜0.05）。与 Model 组相比，LIQ-L 组、
          并洗涤；再次离心，取细胞沉淀置于流式管中，上流式细                           LIQ-H 组小鼠胸腺指数、脾脏指数均显著降低，且具有
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                                   +
          胞仪检测外周血中CD4 、CD8 T淋巴细胞百分率。                          剂量依赖性（P＜0.05）。与 LIQ-H 组相比，LIQ-H+香豆
          · 1864 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 15                            中国药房  2024年第35卷第15期
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