Page 66 - 《中国药房》2024年15期

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增强，与文献报道一致 。给予Thp干预后，上述情况发
生了逆转。这提示Thp能抑制PDGF-BB诱导的VSMCs
的增殖、迁移。
氧化应激是指机体或细胞内氧自由基的产生与清
除失衡，导致ROS在体内或细胞内蓄积而引起的氧化损
伤过程。SOD、CAT等各种抗氧化酶从不同角度协助清
A. PDGF-BB+NC-siNrf2组 B. PDGF-BB+Thp+NC-siNrf2组 除体内的 ROS，在抗氧化过程中起着非常重要的作用。
ROS积累引起的氧化应激增强可进一步促进VSMCs的
增殖、迁移 。本研究发现，PDGF-BB可升高VSMCs中
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ROS 水平，降低 SOD、CAT 活性；然而，用 Thp 预处理
VSMCs 后，可显著减轻 PDGF-BB 引起的氧化应激损
伤，主要表现在 VSMCs 中 ROS 水平降低，SOD、CAT 活
性增强。这提示 Thp 抑制 VSMCs 增殖、迁移的作用可
C. PDGF-BB+siNrf2组 D. PDGF-BB+Thp+siNrf2组 能与抗氧化应激有关。
图5 沉默Nrf2后各组细胞的迁移能力检测结果 VSMCs 的氧化应激受到多种途径的调节，其中
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表4 沉默 Nrf2 后各组细胞的 OD 值、EdU 染色和迁移 Nrf2 驱动的抗氧化防御途径尤为重要 。Nrf2 参与氧
情况测定结果（x±s，n＝5） 化应激诱导VSMCs的增殖、迁移，一旦受到氧化应激的
组别 OD值 EdU染色阳性细胞数量/个 穿膜细胞数/个 刺激，Nrf2就会进入细胞核并激活HO-1，从而缓解氧化
PDGF-BB+NC-siNrf2组 1.06±0.07 106.4±11.4 180.3±15.4 应激 。研究表明，中药有效成分酸浆苦素可促进Nrf2
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PDGF-BB+Thp+NC-siNrf2组 0.74±0.08 65.3±9.2 102.5±13.4
PDGF-BB+siNrf2组 1.35±0.09 ab 141.2±14.3 ab 254.2±19.9 ab 活化，且被活化的Nrf2通过介导抗氧化防御途径来降低
PDGF-BB+Thp+siNrf2组 1.32±0.08 ab 136.4±12.7 ab 244.3±21.7 ab VSMCs 的氧化应激水平，从而抑制 VSMCs 的增殖、迁
a：与PDGF-BB+NC-siNrf2组比较，P＜0.01；b：与PDGF-BB+Thp+ 移 。本研究发现，PDGF-BB 处理后下调了 VSMCs 中
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NC-siNrf2组比较，P＜0.01。
Nrf2 蛋白的表达，而给予 Thp 干预后，Nrf2 蛋白的表达
表5 沉默 Nrf2 后各组细胞中 ROS 水平和 SOD、CAT 上调。这提示 Thp 抑制 VSMCs 增殖、迁移的作用与活
活性检测结果（x±s，n＝5）
化Nrf2有关。
组别 ROS SOD/（U/mg） CAT/（U/mg）
PDGF-BB+NC-siNrf2组 3.25±0.24 2 978.5±221.1 50.1±4.3 Nrf2 活化后，进入细胞核与抗氧化反应元件结合，
PDGF-BB+Thp+NC-siNrf2组 1.74±0.13 4 232.4±318.8 77.3±5.2 引起抗氧化基因的转录。其中，HO-1 基因的产物具有
PDGF-BB+siNrf2组 4.28±0.39 ab 2 147.5±227.7 ab 34.2±3.8 ab 较强的抗氧化作用 。研究表明，HO-1在VSMCs增殖、
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PDGF-BB+Thp+siNrf2组 4.42±0.28 ab 2 295.9±217.4 ab 36.5±4.4 ab
迁移中发挥重要作用，酸浆苦素通过促进HO-1表达，进
a：与PDGF-BB+NC-siNrf2组比较，P＜0.01；b：与PDGF-BB+Thp+
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NC-siNrf2组比较，P＜0.01。 而抑制 PDGF-BB 诱导的 VSMCs 的增殖、迁移 。本研
究发现，Thp 显著上调了 HO-1 的蛋白表达，提示 Thp 抑
Nrf2 68 kDa
制PDGF-BB诱导VSMCs增殖、迁移的作用可能与上调
HO-1 28 kDa
HO-1 蛋白表达相关。为了进一步证实 Thp 是否通过激
β-actin 42 kDa
活 Nrf2/HO-1 信号通路而发挥作用，本研究设计了 Nrf2
Ⅰ Ⅱ Ⅲ
沉默实验。结果显示，沉默 Nrf2 逆转了 Thp 对 PDGF-
Ⅳ
Ⅰ：PDGF-BB+NC-siNrf2 组；Ⅱ：PDGF-BB+Thp+NC-siNrf2 组； BB诱导VSMCs氧化应激损伤的改善作用，进一步证实
Ⅲ：PDGF-BB+siNrf2组；Ⅳ：PDGF-BB+Thp+siNrf2组。
图6 沉默siNrf2后各组细胞中Nrf2、HO-1蛋白表达的 了Thp是通过激活Nrf2/HO-1信号通路发挥作用的。
电泳图 综上所述，Thp 可以通过激活 Nrf2/HO-1 信号通路
介导的抗氧化防御途径来降低 VSMCs 的氧化应激水
表6 沉默siNrf2后各组细胞中Nrf2、HO-1蛋白的相对
表达量测定结果（x±s，n＝5） 平，从而抑制VSMCs的增殖、迁移。本研究表明，Thp可
能是一种比较有前景的血管再狭窄治疗药物。然而，
组别 Nrf2/β-actin HO-1/β-actin
PDGF-BB+NC-siNrf2组 0.57±0.04 0.49±0.05 Thp 是 否 可 作 用 于 其 他 通 路 直 接 或 间 接 参 与 调 控
PDGF-BB+Thp+NC-siNrf2组 0.92±0.05 0.72±0.06 VSMCs的增殖、迁移，还有待进一步证实。
PDGF-BB+siNrf2组 0.24±0.03 ab 0.34±0.04 ab
PDGF-BB+Thp+siNrf2组 0.29±0.03 ab 0.37±0.05 ab 参考文献
a：与PDGF-BB+NC-siNrf2组比较，P＜0.01；b：与PDGF-BB+Thp+ [ 1 ] REMPAKOS A，KOSTANTINIS S，SIMSEK B，et al. Up‐
NC-siNrf2组比较，P＜0.01。 date on chronic total occlusion percutaneous coronary in‐

· 1860 · China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 15 中国药房 2024年第35卷第15期