Page 72 - 《中国药房》2024年13期
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Bacteroidetes，  from  low  to  high，  was  in  the  order  of  TCM  group，  control  group，  positive  control  group  and  model  group；  the
          species  composition  of  gut  microbiota  in  TCM  group  was  closer  to  control  group，  with  dominant  bacterial  genera  including
          Prevotella and Blautia. CONCLUSIONS Tongxie yaofang can regulate the expressions of BMP2 and CSF1， the key proteins of gut
          microbiota-ENS-MM  crosstalk，  by  changing  the  gut  microbiota，  thus  alleviating  the  abnormal  hyperfunction  of  colon  motility  in
          IBS-D rats.
          KEYWORDS     Tongxie  yaofang；  irritable  bowel  syndrome  with  diarrhea；  liver  stagnation  and  spleen  deficiency  syndrome；  gut
          microbiota-ENS-MM crosstalk； bone morphogenetic protein 2； colony stimulating factor 1


              肠易激综合征（irritable bowel syndrome，IBS）是临          1.2 主要药品与试剂
          床常见的功能性胃肠道疾病，根据患者排便习惯分为便                                番泻叶、白芍、炒白术、陈皮、防风饮片由天津中医
          秘型、腹泻型、混合型、不定型4种亚型。研究发现，亚洲                          药大学第二附属医院中药饮片房提供，经该院药学部运
                                                        [1]
          人群IBS的患病率为9.6%，高于全球平均水平（8.8%） ；                     乃茹主任药师鉴定均为真品；双歧杆菌乳杆菌三联活菌
          其中，腹泻型肠易激综合征（irritable bowel syndrome with          片（国药准字S19980004，批号202204271，规格0.5 g/片）
                                      [2]
          diarrhea，IBS-D）在我国较为常见 。IBS-D 的发病原因                 购自内蒙古双奇药业股份有限公司；大鼠LPS结合蛋白
          及病理生理机制涉及神经、内分泌、免疫等多个系统，但                           酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号F3522-B）购自
                      [3]
          尚未完全阐明 。研究指出，胃肠道动力异常特别是结                            上 海 科 兴 生 物 科 技 有 限 公 司 ；伊 红 染 液（批 号
          肠平滑肌收缩模式改变对 IBS-D 的发生尤为关键：M2                        20230216）、苏木精染液（批号20230228）、鼠β微管蛋白
          表型肠肌层巨噬细胞（muscularis macrophages，MM）分              （β-tubulin）抗体（批号 TA-10）、辣根过氧化物酶（HRP）
          泌的骨形态生成蛋白 2（bone morphogenetic   protein 2，         标记的羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二抗（批号ZB-2301）、
          BMP2）可通过调控肠神经元的功能来改变结肠平滑肌                           HPR标记的羊抗鼠IgG二抗（批号ZB-2305）均购自北京
                                                              中杉金桥生物科技有限公司；牛血清白蛋白（批号
          的收缩模式，MM 的表型及其增殖、活化受到多种因素
                                                              4240GR100）购自德国 BioFroxx 公司；兔 BMP2 抗体（批
          [包括肠道菌群病理产物脂多糖（lipopolysaccharide，
                                                              号 PB9687）购自美国 Boster 公司；兔 CSF1 抗体（批号
          LPS）、肠神经系统（enteric nervous system，ENS）分泌的
                                                              ab233387）购自英国Abcam公司；鼠Toll样受体4（Toll-like
          集落刺激因子1（colony stimulating factor 1，CSF1）等]的
                                                              receptor 4，TLR4）抗体（批号 66350-1-1G）购自武汉三鹰
          影响，同时MM与肠神经元间的串扰与胃肠道运动有关，
                                                              生物技术有限公司；基因组DNA提取试剂盒（批号M5635-
                          [4]
          并受肠道菌群驱动 。由此可见，肠道菌群- ENS-MM 串
                                                              02）购自美国 Omega Bio-Tek 公司；dsDNA 定量试剂盒
          扰可能与IBS-D结肠运动功能异常有关。
                                                             （批号 P7589）购自美国 Thermo Fisher Scientific 公司；
              中医将 IBS-D 归为泄泻病。《肠易激综合征中医诊
                                                              DNA建库试剂盒（批号20015964）购自美国Illumina公司。
          疗专家共识意见（2017）》指出，脾胃虚弱和肝失疏泄是
                                                              1.3 实验动物
          IBS 发病的重要环节，肝郁脾虚是导致 IBS 发生的重要
                                                                  雌性SPF级SD孕鼠，孕期（18±2） d，购自北京华阜
          病机，而传统经方痛泻要方为治疗肝郁脾虚证型 IBS-D
                                                              康生物科技股份有限公司，动物生产许可证号为SCXK
                  [5]
          的首选方 。该方由白芍、炒白术、陈皮、防风组成，具有
                                                             （京）2020-0004。所有动物均饲养于 SPF 级动物实验室
          补脾柔肝、祛湿止泻的功效，临床疗效确切，其治疗作用
                                                             （温度 20～26 ℃，相对湿度 40%～70%，通风 15 次/h，每
          的发挥可能与抑制细胞凋亡、调节肠道菌群、改善肠道
                                                              12 h光照/黑暗交替），自由进食、饮水。所有实验操作均
          通透性、增强肠黏膜屏障功能等有关 ，但该药改善结肠
                                         [6]
                                                              遵循天津市医学实验动物保护中心相关指导原则，实验
          运动功能异常的具体机制尚不明确。基于此，本研究拟                            方案经易生源基因科技（天津）有限公司实验动物伦理
          基于肠道菌群-ENS-MM 串扰，初步探讨痛泻要方对肝                         委员会批准（编号YSY-DWLL-2022122）。
          郁脾虚证型IBS-D大鼠结肠运动功能的调控机制，以期                          2 方法
          为该方治疗IBS-D提供理论基础。                                   2.1 药液的配制
          1 材料                                                    番泻叶浸泡 5 h 后水煎 8 min，浓缩成 1 g/mL（以生
          1.1 主要仪器                                            药量计）的药液，备用 。
                                                                                [7]
              本实验主要仪器包括 DYY-6C 型电泳仪（北京六一                          依据《丹溪心法》，取炒白术、白芍、陈皮、防风饮片，
                                       ®
          生物科技有限公司）、ChampChemi  610 plus型全自动化                 按质量比 6∶4∶3∶2 混合，洗净后浸泡 40 min，水煎 30
          学发光/多色荧光/凝胶成像分析系统（北京赛智创业科                           min×2 次，合并水煎液，浓缩成 0.268 g/mL（以生药量
          技有限公司）、CKX43-LP 型显微镜（日本 Olympus 公                   计）的痛泻要方药液，备用 。
                                                                                    [7]
          司）、FLx800 型荧光分析仪（美国 BioTek 公司）、2100 型                   将双歧杆菌乳杆菌三联活菌片用水配制成 0.027
          生物分析系统[安捷伦科技（上海）有限公司]等。                             g/mL的益生菌混悬液，备用。


          · 1606 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 13                            中国药房  2024年第35卷第13期
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