Page 82 - 《中国药房》2024年10期
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血，备用；随后，处死各组大鼠，于无菌条件下取其脾脏、                          3 结果
          颌下腺，称重，按下式计算各脏器指数：脏器指数＝脏器                           3.1 SAHA对大鼠饮水量和唾液流量的影响
          质量/体重。                                                  与对照组比较，模型组大鼠的饮水量显著升高，唾
          2.4 大鼠颌下腺组织病理变化观察                                   液流量显著降低（P＜0.05）；与模型组比较，SAHA 各剂
              采用 HE 法观察。取各组大鼠颌下腺组织适量，经                        量组大鼠的饮水量均显著降低，唾液流量均显著升高，
          4%多聚甲醛固定24 h后，行常规石蜡包埋、切片（厚度3                        且有剂量依赖性（P＜0.05）；与 SAHA 高剂量组比较，
          μm）；切片经脱蜡、脱水后，进行HE染色，使用光学显微                         SAHA 高剂量+重组 IL-6 组大鼠饮水量显著升高，唾液
          镜观察其病理改变并根据腺体活检标准进行病理评分：                            流量显著降低（P＜0.05）。结果见表1。
          无淋巴细胞浸润，记0分；轻度淋巴细胞浸润，记1分；中                          表1 各组大鼠的饮水量和唾液流量比较（x±s，n＝10）
          度淋巴细胞浸润但未见明显淋巴细胞病灶，记2分；1个                           组别                  饮水量/（g/d）        唾液流量/mg
                                                     [10]
          淋巴细胞病灶，记3分；＞1个淋巴细胞病灶，记4分 。                          对照组                 3.82±0.43        24.85±2.93
          2.5 大鼠血清中IFN-γ、IL-17、IL-10水平检测                      模型组                 5.74±0.52 a       8.63±0.92 a
                                                              SAHA低剂量组            4.91±0.50 b      14.73±1.63 b
              采用 ELISA 法检测。取“2.3”项下各组大鼠腹主动                    SAHA中剂量组            4.42±0.48 bc     18.05±1.92 bc
          脉血适量，以 3 000 r/min 离心 20 min，取上层血清，按                SAHA高剂量组            4.05±0.44 bcd    21.93±2.75 bcd
          照相应试剂盒说明书方法操作，以酶标仪检测其血清                             SAHA高剂量+重组IL-6组     5.58±0.64 e      11.05±1.46 e
          IFN-γ、IL-17、IL-10水平。                                   a：与对照组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与SAHA
          2.6 大鼠外周血T淋巴细胞亚群分化情况检测                              低剂量组比较，P＜0.05；d：与SAHA中剂量组比较，P＜0.05；e：与
                                                              SAHA高剂量组比较，P＜0.05。
              采用流式细胞术检测。取“2.3”项下各组大鼠腹主
                                                              3.2 SAHA对大鼠脾脏指数、颌下腺指数的影响
          动脉血适量，经乙二胺四乙酸抗凝后制备外周血单核细
                                                                  与对照组比较，模型组大鼠的脾脏指数显著升高，
          胞悬液，经固定、透化后静置过夜；使用 PE 标记的 CD4
          抗体或 FITC 标记的 CD4 抗体对细胞表面蛋白染色 20                     颌下腺指数显著降低（P＜0.05）；与模型组比较，SAHA
                                                              各剂量组大鼠的脾脏指数均显著降低，颌下腺指数均显
          min（4 ℃），使用 APC 标记的 IFN-γ 抗体、FITC 标记的
                                                              著升高，且有剂量依赖性（P＜0.05）；与 SAHA 高剂量组
          IL-17A抗体或PE标记的FoxP3抗体对细胞内细胞因子
                                                              比较，SAHA 高剂量+重组 IL-6 组大鼠的脾脏指数显著
          染色 1 h（室温），使用流式细胞仪记录细胞染色情况并
          进行数据分析[细胞内 IFN-γ、IL-17A、FoxP3 染色阳性                  升高，颌下腺指数显著降低（P＜0.05）。结果见表2。
                                                              表2 各组大鼠的脾脏指数、颌下腺指数、病理评分比较
          CD4 细胞分别对应辅助性 T 细胞 1（helper T cell 1，
          Th1）、Th17、调节性T细胞（regulatory T cell，Treg），分别             （x±s，n＝10）
                                                              组别             脾脏指数/（mg/g）  颌下腺指数/（mg/g）  病理评分
          呈红色、绿色、黄色]。
                                                              对照组             3.05±0.37    4.73±0.67    0
          2.7 大鼠颌下腺组织中IL-6/STAT3信号通路相关蛋白                      模型组             4.27±0.49 a  3.02±0.53 a  3.53±0.42 a
          表达检测                                                SAHA低剂量组        3.85±0.38 b  3.61±0.46 b  2.82±0.35 b
              采用 Western blot 法检测。取各组大鼠颌下腺组织                  SAHA中剂量组        3.52±0.31 bc  4.16±0.51 bc  2.46±0.39 bc
                                                              SAHA高剂量组        3.20±0.24 bcd  4.58±0.56 bcd  1.83±0.22 bcd
          适量，以RIPA裂解液在冰上提取总蛋白，以12 000 r/min
                                                              SAHA高剂量+重组IL-6组  4.13±0.45 e  3.47±0.41 e  3.37±0.39 e
          离心 5 min，取上清液，使用 BCA 试剂盒测定蛋白含量
                                                                 a：与对照组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与SAHA
          后，在沸水浴中静置 10 min 使变性。取变性蛋白（50                       低剂量组比较，P＜0.05；d：与SAHA中剂量组比较，P＜0.05；e：与
          μg）进行 10% 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分                        SAHA高剂量组比较，P＜0.05。
          离，随后转移至聚偏二氟乙烯膜上，以 5% 脱脂乳封闭 2                        3.3 SAHA对大鼠颌下腺组织病理变化的影响
          h；洗膜后，加入IL-6、STAT3、p-STAT3、β-actin一抗（稀释                 对照组大鼠颌下腺组织腺泡细胞大小均匀，排列紧
          比例分别为1∶1 000、1∶2 000、1∶1 000、1∶1 000），于4 ℃          密；模型组大鼠颌下腺组织可见明显的淋巴细胞局灶性
          孵育过夜；洗膜后，加入相应 IgG 二抗（稀释比例为                          浸润，腺泡细胞明显减少，导管扩张，部分组织变性坏
          1∶2 000），于室温孵育2 h；经化学发光法显色后，置于凝                     死；SAHA各剂量组大鼠颌下腺组织淋巴细胞局灶性浸
          胶成像系统下成像。使用Image J软件对目的蛋白的表                         润减少，部分导管扩张，腺泡细胞少量减少，且随SAHA
          达水平进行定量分析，以IL-6蛋白与内参β-actin的条带                      剂量增加，改善效果越明显；SAHA高剂量+重组IL-6组
          灰度值比值表示 IL-6 蛋白的表达水平，以 p-STAT3 与                    大鼠颌下腺组织的淋巴细胞浸润较 SAHA 高剂量组增
          STAT3 蛋白的条带灰度值比值表示 STAT3 蛋白的磷酸                      加，病理损伤加重。结果见图1。
          化水平。                                                    与对照组比较，模型组大鼠的病理评分显著升高
          2.8 统计学方法                                          （P＜0.05）；与模型组比较，SAHA 各剂量组大鼠的病理
              采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。计量资                      评分均显著下降，且有剂量依赖性（P＜0.05）；与 SAHA
          料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一                         高剂量组比较，SAHA 高剂量+重组 IL-6 组大鼠的病理
          步两两比较采用SNK-q检验。检验水准α＝0.05。                          评分显著升高（P＜0.05）。结果见表2。


          · 1228 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 10                            中国药房  2024年第35卷第10期
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