Page 81 - 《中国药房》2024年10期
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干燥综合征（Sjögren syndrome，SS）是一种病因不               购自上海恒斐生物科技有限公司；藻红蛋白（PE）标记的
          明的慢性自身免疫性疾病，主要累及唾液腺、泪腺等外                           鼠 CD4 抗体（货号 116006）、异硫氰酸荧光素（FITC）标
                                          [1]
          分泌腺体，主要症状包括口干、眼干等 ，可单独出现（即                         记的鼠CD4抗体（货号130308）、别藻蓝蛋白（APC）标记
          原发性 SS）或伴随系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等                         的鼠 IFN-γ 抗体（货号 505810）、FITC 标记的鼠 IL-17A
          其他自身免疫性疾病出现（即继发性 SS）。据报道，SS                        抗体（货号506908）均购自美国BioLegend公司；PE标记
          患者普遍存在免疫紊乱，包括 T 细胞亚群紊乱、炎症细                         的鼠叉头框蛋白 P3（forkhead box P3，FoxP3）抗体（货号
                                                       [2]
          胞高水平表达和促炎性细胞因子、自身抗体过度产生 。                          12-5773-82）购 自 美 国 eBioscience 公 司 ；兔 源 IL-6、
          因此，调节异常免疫反应、改善自身免疫稳态失衡，可能                          STAT3、磷酸化STAT3（phosphorylated STAT3，p-STAT3）、
          是治疗SS的有效策略之一。                                      β-肌动蛋白（β-actin）抗体（货号分别为ab9324、ab109085、
              伏立诺他（vorinostat，SAHA）是一种口服组蛋白脱                 ab76315、ab8227）均购自英国 Abcam 公司；辣根过氧化
          乙酰酶（histone deacetylase，HDAC）抑制剂，作为一种具             物酶标记的山羊抗兔 IgG 二抗（货号 HZ131125-100）购
          有免疫调节活性的潜在抗炎剂，其可通过调节免疫功能                           自上海沪震实业有限公司。
                                    [3]
          来减轻干眼症小鼠的炎症反应 。研究指出，白细胞介                           1.3 实验动物
          素6（interleukin-6，IL-6）是一种多效细胞因子，可参与免                   SPF级雄性SD大鼠，6～8周龄，购自广东南模生物
          疫反应、炎症、造血、骨代谢、胚胎发育等过程，与其受体                         科技有限公司，动物生产许可证号为 SCXK（粤）2022-
          结合后可激活信号转导及转录活化因子 3（signal trans‐                  0062。所有大鼠均在室温（22±2）℃、每12 h光暗循环、
          ducer and activator of transcription 3，STAT3），进一步调  相对湿度（55±5）%的条件下饲养，自由进食和饮水，适
                        [4]
          控多种细胞活动 。失调的IL-6/STAT3信号通路与多种                      应性喂养1周后开始后续实验。本研究方案经运城市中
          自身免疫性疾病的发生发展有关，并可影响机体的免疫                           心医院医学伦理委员会批准（批号DWLL2022014）。
              [5]
          功能 。此外，还有研究指出，IL-6可通过激活STAT3来                      2 方法
          诱导唾液管细胞再生因子Ⅰα编码基因的转录，在SS的                          2.1 动物模型的建立及分组干预
                                [6]
          发生发展中具有重要作用 。基于此，本研究拟通过构                               参照相关文献方法构建SS模型 ：50只大鼠腹腔注
                                                                                            [7]
          建SS大鼠模型，探究SAHA对其免疫功能及IL-6/STAT3                    射 2% 戊巴比妥钠麻醉后处死，于无菌条件下分离其颌
          信号通路的影响，以期为该疾病的临床治疗提供新的药                           下腺，以冷冻的磷酸盐缓冲盐（PBS）匀浆，再于4 ℃下以
          物和思路。                                              2 000 r/min离心20 min，收集上清液（即颌下腺蛋白），使
          1 材料                                               用 BCA 试剂盒测定蛋白含量，分别加入等体积的弗氏
          1.1 主要仪器                                           完全佐剂和弗氏不完全佐剂至 2.5 mg/mL（即每毫升含
              本研究所用主要仪器包括 BX53 型显微镜（日本                       蛋白 2.5 mg），分别记为乳剂 A、乳剂 B。于实验第 0、7
          Olympus 公司）、FACS 型流式细胞仪（美国 BD 公司）、                 天，在造模大鼠尾部和背部皮下注射乳剂A 0.1 mL进行
          M2 型多功能酶标仪（美国 Molecular Device 公司）、                免疫；于实验第14天，在造模大鼠尾部和背部皮下注射
          GENESYS 10S型分光光度计（美国Thermo Fisher Scien‐           乳剂 B 0.1 mL 增强免疫。若大鼠唾液减少且颌下腺可
          tific 公司）、DYCZ-24K 型电泳仪（北京六一生物科技有                  见明显病理损伤，则表明造模成功。另取 10 只健康大
          限公司）、GelDoc Go 型凝胶成像系统（美国 Bio-Rad 公                鼠，于相同部位皮下注射等体积生理盐水，作为对照组。
          司）等。                                                   将造模成功的大鼠分为模型组，SAHA低、中、高剂
          1.2 主要药品与试剂                                        量组和 SAHA 高剂量+重组 IL-6 组，每组 10 只。其中，
              SAHA 原料药（纯度≥98%，货号 F0080）购自北京                  SAHA 低、中、高剂量组大鼠腹腔注射 25、50、100 mg/kg
          索莱宝科技有限公司；毛果芸香碱对照品（纯度≥98%，                         的SAHA（以生理盐水为溶剂） ，SAHA高剂量+重组IL-6
                                                                                      [8]
          货号 92-13-7）购自美国 MedKoo Biosciences 公司；弗氏           组大鼠腹腔注射 100 mg/kg 的 SAHA 和 0.05 mg/kg 的重
                                                                                            [9]
          不完全佐剂（货号 D615-0100）、弗氏完全佐剂（货号                      组 IL-6 蛋白（均以生理盐水为溶剂） ，对照组和模型组
          D614-0100）均购自武汉艾美捷科技有限公司；大鼠重组                      大鼠腹腔注射等体积生理盐水，每天1次，连续2周。
          IL-6蛋白（IL-6/STAT3信号通路激活剂，货号RP-2186R）               2.2 大鼠饮水量和唾液流量测定
          购自美国 Advanced BioMatrix 公司；二喹啉甲酸（BCA）                  末次给药后 24 h，记录各组大鼠 1 d 的饮水量。随
          试剂盒（货号 KL-X126）购自上海康朗生物科技有限公                       后，各组大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠麻醉，再腹腔注射
          司；苏木精-伊红（HE）染色试剂盒（货号E-IR-R117）购自                   毛果芸香碱 5 mg/kg 诱导唾液分泌；5 min 后，将已称重
          武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司；干扰素 γ（inter‐                      的干燥棉球放入大鼠口中收集唾液；10 min 后，取出棉
          feron-γ，IFN-γ）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（货                 球，称重，棉球质量差即为大鼠10 min的唾液流量。
          号JKSW71076）购自上海晶抗科技生物有限公司；IL-17                    2.3 大鼠器官指数测定
          ELISA 试剂盒（货号 EK-R36872）购自上海酶研生物科                       饮水量和唾液流量检测完成后，称定各组大鼠体
          技有限公司；IL-10 ELISA试剂盒（货号CSB-E04595r-1）              重，然后腹腔注射 2% 戊巴比妥钠麻醉，于腹主动脉取


          中国药房  2024年第35卷第10期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 10    · 1227 ·
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