Page 37 - 《中国药房》2024年10期
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the  pathological  injury  of  intervertebral  disc  tissue  was  relieved  in  YQHX  group；  the  number  of  autophagosomes  in  nucleus
          pulposus  cells  increased；  serum  level  of TNF-α  and  mRNA  expression  of  p62  in  intervertebral  disc  tissue  decreased  significantly；
          the ratios of BNIP3 and Beclin-1 positive cells， the phosphorylation of NF-κB p65， the expressions of TRAF-2， TRAF-3， BNIP3
          and  LC3B  protein  as  well  as  the  mRNA  expressions  of  NF- κB  p65，  LC3B，  BNIP3  and  Beclin-1  decreased  significantly  in
          intervertebral  disc  tissues （P＜0.05）.  The  changes  of  above  indexes  in YQHX  group  were  reversed  partly  in YQHX+QNZ  group.
          CONCLUSIONS  YQHX promotes the elevation of autophagy level of intervertebral discs， slows down the inflammatory response
          and the progression of lumbar disc herniation by activating the NF-κB signaling pathway.
          KEYWORDS    lumbar disc herniation； inflammatory response； NF-κB signaling pathway； autophagy



              腰椎间盘突出症（lumbar disc herniation，LDH）是由          院陶伟伟教授鉴定均为真品。NF-κB 抑制剂 QNZ
          椎间盘变性、纤维环破裂、髓核组织突出压迫等引起的                          （EVP4593，批号S4902）购于上海蓝木化工有限公司；异
          一种综合征，常表现为腰部疼痛、肢体麻木以及感觉迟                           氟烷（批号 20220601）购于深圳市瑞沃德生命科技股份
            [1]
          钝 。因其病因复杂，病程延绵反复，给临床治疗带来诸                          有 限 公 司 ；苏 木 精 - 伊 红（HE）染 色 试 剂 盒（批 号
          多困难。中医药治疗 LDH 通过审证求因，强调辨证施                         CR2203163）购于武汉赛维尔生物科技有限公司；大鼠
          治，可有效改善腰腿疼痛症状，提高患者生活质量。江                           肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）酶联免
          苏省名中医姜宏教授根据多年临床经验，认为LDH发病                          疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号 AF-01587R1）购于湖
          由肾精不足、精气生化受阻、脊柱和韧带失于濡养、纤维                          南艾方生物科技有限公司；BCA 蛋白定量试剂盒（批号
          环脆弱易破裂、韧带弹性降低、气血运行不畅所致，基于                          WB6501）购于苏州新赛美生物科技有限公司；兔源微管
          石氏伤科“以气为主，以血为先”理念及吴门医派络病理                          相 关 蛋 白 轻 链 3B（microtubule-associated  protein  light
          论拟定益气活血方（Yiqi huoxue decoction，YQHX）治疗             chain 3B，LC3B）单克隆抗体（批号 GR3338049-29）购于
          LDH，且经研究证实 YQHX 在缓解腰部疼痛、改善中医                       英国Abcam公司；兔源B细胞淋巴瘤2/腺病毒E1B相互
                                                             作用蛋白 3（Bcl-2/adenovirus E1B interacting protein 3，
          症候及腰椎功能障碍等方面疗效确切 。
                                          [2]
                                                             BNIP3）、苄氯素（Beclin-1）、肿瘤坏死因子受体相关因子2
              在LDH的发生发展中，髓核游离暴露在引力失衡和
                                                            （tumor necrosis factor receptor-associated factor-2，TRAF-2）、
          代谢障碍的异常环境下，可导致髓核细胞减少及细胞外
                                                             TRAF-3、NF-κB p65、磷酸化 NF-κB p65（phosphorylated
                                       [3]
          基质降解，这与炎症反应密切相关 。自噬是一种保守
                                                             NF-κB p65，p-NF-κB p65）单克隆抗体（批号分别为
          而紧密协调的细胞自我降解过程，髓核细胞自噬已被证
                                                             3769S、3495S、C192、D1N5B、8242S、3033T）均购于美国
          实能维持髓核细胞外基质稳态，缓解其氧化应激状态和
                                                             CST 公司；兔源 β-肌动蛋白（β-actin）单克隆抗体（批号
                      [4]
          拮抗炎症反应 。本课题组前期研究发现，LDH 患者椎
                                                             20536-1）购于武汉三鹰生物技术有限公司；辣根过氧化
          间盘髓核细胞内自噬囊泡增加，表明髓核细胞在不利环
                                                             物酶标记的山羊抗兔IgG二抗（批号923A057）购于爱必
          境下受到自噬的保护，促进自噬可能是改善LDH的一种
                                                             信（上海）生物科技有限公司；超敏 ECL 发光剂（批号
                  [5]
          有效路径 。核因子 κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信号
                                                             S7205020）购于翌圣生物科技（上海）股份有限公司；
          通路参与炎症的发生发展，同时又可以促进细胞自噬的
                                                             RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒（批号分别为7E670L2、
              [6]
          发生 。为此，本研究拟通过建立 LDH 大鼠模型，基于
                                                             7F611J2）均购于南京诺唯赞生物科技股份有限公司；
          NF-κB 信号通路探讨 YQHX 调控髓核细胞自噬对大鼠
                                                             PCR 引物由生工生物工程（上海）股份有限公司设计并
          LDH的影响及机制，以期为临床防治LDH提供参考。                          合成。
          1 材料                                               1.3 实验动物
          1.1 主要仪器                                               SPF级雄性SD大鼠50只，体重（200±10）g，购自北
              本研究所用主要仪器包括 PharmaScan 7.0T 型小动                京维通利华实验动物技术有限公司，动物生产许可证号
          物磁共振成像系统（德国 Bruker 公司）；Allsheng 型全自                为 SCXK（京）2021-0011。本实验经过南京中医药大学
          动多功能酶标仪（杭州奥胜仪器有限公司）；Mastercycle                    实验动物伦理委员会审批，申请号为202210A009。
          nexus 型聚合酶链式反应（PCR）仪（德国 Eppendorf 公                2 方法
          司）；MAX-TL型高速冷冻离心机（美国Beckman公司）；                    2.1 YQHX的制备
          IX83 型荧光倒置显微镜（日本 Olympus 公司）；HT7700                    按处方配伍比例称取生黄芪 20 g、当归 10 g、防己
          型透射电子显微镜（日本Hitachi公司）。                             10 g、白芥子6 g、川芎15 g、地龙15 g、木瓜10 g，加入10
          1.2 主要药品与试剂                                        倍量水煎煮1 h，煎煮的药渣再次加入8倍量水煎煮1 h；
              生黄芪、当归、防己、白芥子、川芎、地龙、木瓜饮片                       合并2次煎煮液，滤过，取上清液浓缩至9.1 g/kg（以生药
          均购于江苏省中医院，经南京中医药大学中西医结合学                           量计），于4 ℃冰箱中保存。


          中国药房  2024年第35卷第10期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 10    · 1187 ·
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