Page 63 - 《中国药房》2024年9期

100 μL，置于 2 mL 容量瓶中，加甲醇稀释并定容，加适 3 讨论
量无水硫酸钠脱水，即得。 3.1 处方量的选择及标准汤剂挥发油的提取
2.5.2 检测条件 清上蠲痛汤原处方单味药量较少，挥发油难以提
色 谱 柱 为 HP-5MS 毛 细 管 色 谱 柱（30 m×0.25 取，因此本研究将最佳煎煮工艺放大6倍，进行标准汤剂
mm×0.25 μm）；进样量为 1 μL；分流比为 10∶1；进样口 制备与挥发油收集。由于挥发油研究是针对清上蠲痛
温度为 240 ℃；升温程序为起始温度 70 ℃、保持 1 min， 汤标准汤剂展开的，因此在制备全方供试品溶液时先制
以 5 ℃/min 升温至 150 ℃、保持 1 min，再以 5 ℃/min 升 备标准汤剂，继而趁热提取水煎液中的挥发油。
温至160 ℃、保持2 min，接着以2 ℃/min升温至180 ℃、 3.2 定性分析方法的选择
保持1 min，最后以12 ℃/min升温至230 ℃、保持4 min； 本研究采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统
（2012 版）》确 定 UPLC 特 征 图 谱 的 共 有 峰 ，再 通 过
载气为氦气；进样口温度为 240 ℃；离子源为电子轰击
UPLC-Q-TOF/MS法进行共有峰指认。由于在正离子模
离子源（EI）；电子能量为 70 eV；接口温度为 230 ℃；扫
式条件下清上蠲痛汤标准汤剂中挥发油类成分的出峰
描范围为50～550 amu。
数量较多、峰形好、基线较稳定、分离度好，因此最终选
2.5.3 清上蠲痛汤标准汤剂挥发油类成分的分析
择在正离子模式下检测。笔者前期通过与对照品比对，
取“2.5.1”项 下 供 试 品 溶 液 ，采 用 GC-MS 法 ，按
指认出 UPLC 特征图谱 12 个共有峰中的 8 号峰为甲基
“2.5.2”项 下 条 件 进 行 分 析 ，通 过 Agilent MassHunter
丁香酚、9号峰为洋川芎内酯A、11号峰为藁本内酯。为
Qualitative Analysis 10.0 化学工作站 NIST17.L 谱库检
了更加全面地表征清上蠲痛汤标准汤剂挥发油类成分，
索，从清上蠲痛汤标准汤剂挥发油中共鉴定出 23 个成
本研究采用 UPLC 法建立清上蠲痛汤标准汤剂挥发油
分，占总含量的82.66%。通过Agilent MassHunter Quali‐
特征图谱，辅以 GC-MS 法对清上蠲痛汤标准汤剂挥发
tative Analysis 10.0化学工作站数据处理系统，按峰面积
油类成分进行定性分析。
归一化法计算这23个成分的相对百分含量。结果显示， 3.3 色谱及样品制备条件优化
主要化学成分有 3，4，5-三甲氧基甲苯、百秋李醇、Z-藁 3.3.1 UPLC色谱条件优化
本内酯，分别占挥发油总量的 9.19%、19.10%、21.10%。 本研究前期通过比较不同波长（235、245、255 nm）
结果见表3。 发现，检测波长为235 nm时各化合物的响应值最大，色
表3 清上蠲痛汤标准汤剂挥发油类成分的 GC-MS 鉴 谱峰分离较好。此外，本研究还比较了甲醇-0.05%磷酸
定结果 溶液、乙腈-0.05% 磷酸溶液、乙腈-0.1% 磷酸溶液、乙
保留时间 相对百分
编号 峰面积 化合物 分子式 腈-0.1% 甲酸溶液、乙腈-0.1% 冰醋酸溶液、乙腈-水 6 种
/min 含量/%
1 8.380 6 131 715.74 0.67 4-萜烯醇 C 10H 18O 不同流动相体系对色谱峰分离效果的影响，最终根据出峰
2 11.269 8 755 318.56 0.95 3，5-二甲氧基甲苯 C 9H 12O 2 数量及响应值情况等，选择乙腈-水为本研究的流动相。
3 13.565 30 983 514.89 3.37 黄樟素 C 10H 10O 2 3.3.2 GC色谱条件优化及稀释溶剂选择
4 14.203 24 576 815.39 2.67 甲基丁香酚 C 11H 14O 2
5 17.126 84 503 803.06 9.19 3，4，5-三甲氧基甲苯 C 10H 14O 3 由于清上蠲痛汤中挥发油类成分比较复杂，因此本
6 17.309 19 316 624.60 2.10 肉豆蔻醚 C 11H 12O 3 研究选择程序升温，以提高各挥发油类成分的分离度和
7 18.727 3 526 453.81 0.38 榄香醇 C 15H 26O 分辨率。本研究前期比较了不同稀释溶剂（乙酸乙酯、
8 21.247 18 221 328.48 1.98 桉油烯醇 C 15H 24O
9 22.233 6 613 291.93 0.72 β-杜松烯 C 15H 24 正己烷、甲醇）的分离效果，最终选择了响应值最大、分
10 24.036 12 783 884.04 1.39 （1R，3aR，4R，7R）-1，2，3，3a，4，5，6，7-八氢-1，4-二甲 C 15H 24 离度最好的甲醇作为稀释溶剂。此外，本研究还考察了
基-7-（1-甲基乙烯基）-薁 HP-5 MS、DB WAX、DB1701 这 3 种毛细管色谱柱的分
11 24.338 59 670 682.20 6.49 β-桉叶醇 C 15H 26O
12 24.789 175 537 064.10 19.10 百秋李醇 C 15H 26O 离效果，最终选择HP-5 MS毛细管色谱柱。
13 25.131 8 565 773.96 0.93 Z-亚丁基苯酞 C 12H 12O 2 3.4 活性成分分析
14 25.517 43 150 847.12 4.69 红没药醇 C 15H 26O 本研究建立了 UPLC 特征图谱，并采用 UPLC-Q-
15 25.820 3 416 121.42 0.37 洋川芎内酯A C 12H 16O 2
16 27.354 22 837 655.39 2.48 洋川芎内酯 C 12H 16O 2 TOF/MS 法对 15 批清上蠲痛汤标准汤剂挥发油的 12 个
17 28.039 193 903 529.30 21.10 Z-藁本内酯 C 12H 14O 2 共有峰进行了鉴定。由图1可知，其主要化学成分有甲
18 28.286 7 688 408.24 0.84 异水菖蒲二醇 C 15H 26O 2
19 30.261 3 733 812.19 0.41 E-藁本内酯 C 12H 14O 2 基丁香酚（8号峰）、E-藁本内酯（11号峰）、E-正丁烯基苯
20 35.431 2 579 348.34 0.28 phenylphosphonic acid，2，4，4-trimethylpentyl ethyl ester C 16H 27O 3P 酞（12 号峰）。其中甲基丁香酚具有抗炎、镇痛、抑菌的
21 36.412 3 274 373.60 0.36 2-（2-hydroxy-cyclohexylamino）-pyridine，N-oxide C 11H 16N 2O 2 作用 ；E-藁本内酯具有抗炎、保护脑血管的作用 ；E-
[11]
[12]
22 37.576 4 507 583.78 0.49 7-isopropyl-1，1，4a-trimethyl-1，2，3，4，4a，9，10， C 20H 30 [13]
10a-octahydrophenanthrene 正丁烯基苯酞作为苯酞类成分，具有神经保护作用 。
23 38.899 15 486 165.39 1.68 蛇床子素 C 15H 16O 3 在清上蠲痛汤标准汤剂挥发油类成分的 GC-MS 检测

中国药房 2024年第35卷第9期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 9 · 1085 ·