Page 45 - 《中国药房》2024年6期
P. 45

大豆异黄酮（soybean isoflavones，SI）主要存在于豆            剂盒（批号20220530）均购自南京建成生物工程研究所。
          科植物中，是通过苯丙醇途径合成的一种具有较强生物                           1.3 实验动物
                              [1]
          活性的重要次生代谢物 。由于饮食结构的差异，亚洲                               SPF级C57BL/6幼鼠30只（2周龄，体重8～10 g，雌
          人群 SI 摄入量明显高于欧美人群 。研究表明，SI 对人                      雄各半），购自济南朋悦实验动物繁育有限公司，动物生
                                      [2]
                                             [3]
          体健康有积极作用，具有缓解骨质疏松症 、预防心血管                          产许可证号为 SCXK（鲁）2019 0003。小鼠分笼饲养并
              [4]
                        [5]
                                                      [6]
          疾病 、调节血脂 和抗氧化、抗炎、抗肿瘤、提高免疫 等                        自由进食、饮水，饲养条件为每12 h明暗交替、室温16～
          活性，并可影响子宫内膜细胞和颗粒细胞的增殖与                             25 ℃、相对湿度45%～60%。本研究实验方案经烟台大
              [7]
          凋亡 。                                               学动物伦理委员会审查批准（编号YTU20210203-2）。
              近年来，随着“内分泌干扰物”概念的引入，人们对                        2 方法
                              [8]
          激素有了进一步的认识 。SI作为一种激素类内分泌干                          2.1 分组与给药
          扰物，若长期、大剂量摄入是否会产生副作用，目前尚无                              取幼鼠 30 只，适应性喂养 3 d 后随机分为对照组
          定论。探索性研究发现，SI可能会破坏生殖内分泌系统                         （1%吐温80溶液）和SI小、大剂量组（10、100 mg/kg），每
                                              [9]
          的平衡，甚至影响机体的发育和生殖功能 。幼年期为                           组10只，雌雄各半。各组幼鼠雌雄分开饲养，以耳钉标
          生长发育的重要阶段，是生殖功能发育和成熟的关键时                           号区分。对照组幼鼠灌胃1%吐温80溶液，SI各剂量组
          期，容易受到内外因素的影响。有研究指出，长期饲喂                           幼鼠灌胃相应药液（以 1% 吐温 80 溶液为溶剂，剂量参
          同为内分泌干扰物的果糖可改变机体脂质代谢和激素                            考相关文献     [11―12] 设置），每天15：00灌胃1次，持续2周。
                               [10]
          水平，进而影响生殖功能 ；此外有研究证实，胎儿和新                          2.2 体重测定
          生儿期 SI 暴露与小鼠成年后生殖系统疾病的发生有                              于每天灌胃前及末次灌胃后称定各组幼鼠体重，并
            [8]
          关 。因此，本研究拟观察不同剂量 SI 对幼年小鼠生殖                        按下式计算体重增长百分比：体重增长百分比＝（末次
          发育的影响，旨在为其安全性评估提供实验参考。                             灌胃后幼鼠体重－首次灌胃前幼鼠体重）/首次灌胃前幼
          1 材料                                               鼠体重×100%。
          1.1 主要仪器                                           2.3 血清血清性激素水平测定
              本研究所用主要仪器包括 820 型组织切片机（美国                          末次给药后，幼鼠禁食不禁水3 h，于眼眶静脉丛采
          Reichert-Jung 公司）、Ti-S 型双端口倒置荧光显微镜（日               血，血样于室温下静置 20 min 后，以 3 000 r/min 离心 15
          本 Nikon 公司）、DM1000 LED 型生物光学显微镜（德国                 min，取上层血清适量，严格按照相应试剂盒说明书操
          Leica公司）、SpectraMax iD3型多功能酶标仪[美谷分子                作，使用酶标仪检测血清中雌二醇和睾酮水平。
          仪器（上海）有限公司]、DHG-9140A型烘箱（上海一恒科                     2.4 生殖器官氧化应激指标检测
          学仪器有限公司）等。                                             取血后，各组幼鼠以颈椎脱臼法处死，分别分离雌
          1.2 主要药品与试剂                                        性幼鼠的卵巢组织和雄性幼鼠的睾丸组织。取上述组
              SI 原料药（批号 C12916812，纯度 40%）购自上海麦               织适量，称重后加生理盐水，制成 10% 匀浆液，以 3 000
          克林生化科技有限公司；吐温 80（批号 M25HS179460）                   r/min 离心 10 min，分离上清液，严格按照相应试剂盒说
          和甘油（分析纯）均购自上海源叶生物科技有限公司；                           明书操作，使用酶标仪检测上述组织匀浆中SOD、GSH-
          Davidson’s 固定液（批号 20140210）购自北京索莱宝科                Px活性，MDA含量和T-AOC。
          技 有 限 公 司 ；苏 木 精 - 伊 红（HE）染 色 试 剂 盒（批 号            2.5 生殖器官病理学观察
          011623230614）、一步法 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒                      取各组雌性幼鼠卵巢组织和雄性幼鼠睾丸、附睾组

         （批号 112822230321）均购自上海碧云天生物技术股份                     织适量，置于固定液中，于室温下固定 48 h 后，进行脱
          有限公司；睾酮检测（干粉法）试剂盒（批号 20230605）、                    水、透明、浸蜡、包埋、切片，经HE染色后，使用光学显微
          雌二醇检测（干粉法）试剂盒（批号20230605）、谷胱甘肽                     镜观察并随机选取每张切片的6个视野拍照，记录各组
          过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）检测试剂           幼鼠上述组织的病理变化。
          盒（批号 20220530）、超氧化物歧化酶（superoxide dis‐             2.6 生殖器官细胞凋亡检测
          mutase，SOD）检测试剂盒（批号20220530）、微量丙二醛                     取“2.5”项下各组雌性幼鼠卵巢组织和雄性幼鼠睾
         （malondialdehyde，MDA）检测试剂盒（批号 20220530）、            丸、附睾组织的石蜡切片，脱蜡后滴加不含DNA酶的蛋
          总抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）检测试        白酶 K（20 μg/mL）适量，于 37 ℃下孵育 15 min；以磷酸


          中国药房  2024年第35卷第6期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 6    · 679 ·
   40   41   42   43   44   45   46   47   48   49   50