Page 41 - 《中国药房》2024年3期
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improved；  the  iron  content  of  pancreatic  tissue  and  protein  expression  of  COX2  were  decreased  significantly （P＜0.05），  while
          protein expression of GPX4 was increased significantly （P＜0.05）. CONCLUSIONS 1，8-cineole could ameliorate pancreatic β cell
          injury  induced  by  diabetes，  the  mechanism  of  which  may  be  related  to  reducing  intracellular  iron  deposition  and  regulating
          ferroptosis-related proteins.
          KEYWORDS    1，8-cineole； type 2 diabetes； pancreatic β cell； ferroptosis



              糖尿病是严重威胁人类健康的疾病之一，在全球范                         1.2 主要药品与试剂
          围内发病率逐年上升，糖尿病及其并发症已成为21世纪                              1，8-桉叶油素（批号K1822141，纯度≥99%）购自上
          全球医疗卫生的沉重负担，是目前亟待解决的重大科学                           海阿拉丁生化科技股份有限公司；1640 基础培养基（批
          及社会民生问题       [1―2] 。2 型糖尿病作为糖尿病两种表型               号 8121324）购自美国 Gibco 公司；D-无水葡萄糖、D-甘
          之一，其发病涉及多种诱因，包括高血糖、胰岛素抵抗                           露醇（批号分别为 405A0918、1126F038）均购自北京索
          等，但其潜在的发病机制尚未充分阐明。很多2型糖尿                           莱宝科技有限公司；铁死亡诱导剂 Erastin、铁死亡抑制
          病患者仍不可避免地患有微血管并发症（包括视网膜病                           剂Ferrostatin-1（批号分别为HY-15763、HY-100579）均购
          变、肾病和神经病变）和大血管并发症（如心血管并发                           自美国 MCE 公司；组织铁测定试剂盒（批号 20230202）
             [3]
          症） ，这对 2 型糖尿病患者的生存构成了严重威胁，给                        购自南京建成生物工程研究所有限公司；FerroOrange探
          世界卫生系统带来巨大的挑战。                                     针（批号F374）购自东仁化学科技（上海）有限公司；鼠源
              近年来研究表明，胰岛β细胞铁死亡是导致正常人                         β-actin 单克隆抗体、鼠源环氧合酶 2（cyclooxygenase-2，
          糖代谢出现异常并进展为2型糖尿病的始动因素之一，                           COX2）单克隆抗体、鼠源 GPX4 单克隆抗体（批号分别
          也是2型糖尿病进展的关键环节，但其确切的发病机制                           为 66009-1-Ig、66351-1-Ig 、67763-1-Ig）均购自武汉三鹰
                      [4]
          尚未完全阐明 。铁死亡是一种铁依赖性的脂质过氧化                           生物技术有限公司；辣根过氧化物酶（HRP）标记的鼠免
                                                             疫球蛋白G二抗（批号BS12478）购自美国Bioworld公司。
          物蓄积驱动的细胞程序性死亡，其特征在于细胞内铁的
                                                             1.3 细胞
                                    [5]
          沉积以及脂质过氧化物的积累 。已有研究表明，抑制
                                                                 本研究所用细胞为小鼠胰岛 β 细胞，购自美国
          谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase-4，GPX4）
                                                             ATCC细胞库。
          活性是诱导细胞铁死亡的关键环节，恢复 GPX4 活性可
                                                             1.4 动物
                                  [6]
          明显抑制铁死亡的发生发展 。2 型糖尿病患者的高血
                                                                 本研究所用动物为SPF级雄性C57BL/6小鼠，体重
                                             [7]
          糖环境可诱导胰岛 β 细胞铁死亡的发生 。因此，探索
                                                             约18～22 g，6～8周龄，购自贵州医科大学动物中心，动
          GPX4在胰岛β细胞铁死亡过程中的具体调控作用及机
                                                             物生产许可证号为 SCXK（贵）2023-0002。小鼠于光照
          制，对进一步阐明2型糖尿病的发病机制、寻求有效干预
                                                             周期为 12 h 的环境中饲养，日常自由进食和饮水，适应
          措施具有重要的社会意义。
                                                             性喂养1周后开始实验。本实验经贵州医科大学实验动
              民族药艳山姜为姜科山姜属艳山姜 Alpinia zerum‐
                                                             物伦理委员会批准，批准文号为2100421。
          bet （Pers.） Burtt. et Smith的果实，具有温中燥湿、行气止
                                                             2 方法
          痛的功效。挥发油作为艳山姜的主要活性成分，具有抗
                                                             2.1 细胞实验
              [8]
          氧化 、改善糖尿病 等作用。其中，1，8-桉叶油素是艳
                          [9]
                                                             2.1.1 胰岛β细胞中Fe 水平的检测
                                                                                 2+
          山姜挥发油的主要效应成分。本课题组前期的研究显
                                                                 将胰岛 β 细胞接种于 24 孔板，当细胞密度达 70%
          示，1，8-桉叶油素对高糖诱导的胰岛 β 细胞凋亡具有显
                                                             时，分为正常对照组（只加细胞不加药）、甘露醇组（用该
                      [10]
          著的改善作用 ，但其对胰岛 β 细胞铁死亡的作用及机
                                                             组作为模型组的渗透压对照，25 mmol/L）、模型组（D-无
          制尚不明确。基于此，本研究探讨了 1，8-桉叶油素对 2                       水葡萄糖，25 mmol/L）和 1，8-桉叶油素低、高剂量组
          型糖尿病诱导的胰岛β细胞铁死亡的干预作用及机制，                          （0.25、0.5 μmol/L）以及维生素 E 组（阳性对照组，1×
          旨在为治疗2型糖尿病的创新药物开发提供参考。                             10  mmol/L），各给药组剂量参考本课题组的前期研
                                                               －7
          1 材料                                               究 。各组均先加入相应药物预处理 1 h 后，再以 25
                                                               [10]
          1.1 主要仪器                                           mmol/L D-无水葡萄糖干预 72 h。干预结束后，弃去上
              本研究所用主要仪器包括Varioskan LUX型多功能                   清液，用无血清培养基清洗细胞3次，然后加入终浓度为
          酶标仪（美国 Themo Fisher Scientific 公司），HF240 型二        1 µmol/L 的荧光探针 FerroOrange 工作液适量，再置于
          氧化碳培养箱（上海力申科学仪器有限公司），Chemi‐                        37 ℃培养箱中孵育 30 min 后，采用荧光显微镜观察细
                   +
             TM
          Doc  XRS 型曝光仪（美国 Bio-Rad 公司），Leica DMi8            胞，并采集图片，采用 Image J 分析荧光强度，红色荧光
                                                                       2+
          型荧光倒置显微镜（德国Leica公司）。                               越强表示Fe 水平越高。实验重复3次。
          中国药房  2024年第35卷第3期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 3    · 291 ·
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