Page 66 - 《中国药房》2023年23期
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2 方法与结果 1∶10的料液比加水浸泡30 min，提取3次，每次1.5 h，合
2.1 色谱条件 并提取液，滤过、减压浓缩；将所得挥发油与相应对照药
色谱柱为 Thermo Hypersil Gold C18 （250 mm×4.6 材的浓缩液混合，并定容至100 mL容量瓶中，即得对照
mm，5 µm）；流动相为甲醇（A）-0.05% 磷酸溶液（B），梯 药材浓缩液。分别精密移取上述 3 种对照药材浓缩液
度 洗 脱（0～10 min，5%A；10～15 min，5%A→12%A； 1.0 mL 至 2 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，过
15～30 min，12%A→29%A；30～41 min，29%A；41～80 0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得白术、莪术、佛手的对
min，29%A→88%A；80～90 min，88%A；90～92 min， 照药材溶液。
88%A→5%A；92～102 min，5%A）；苦参碱的检测波长 2.2.5 阴性供试品溶液的制备
为 211 nm，其他成分的检测波长为 283 nm；流速为 1.0 按处方比例和“2.2.1”“2.2.2”项下方法，分别制备缺
mL/min；柱温为30 ℃；进样量为5 μL。 白花蛇舌草及白术（不含绿原酸和香草酸），缺白花蛇舌
2.2 溶液的制备 草、佛手及莪术（不含对香豆酸和阿魏酸），缺佛手（不含
2.2.1 健脾化瘀方样品浓缩液的制备 橙皮苷），缺白花蛇舌草、佛手及苦参（不含槲皮素和佛
健脾化瘀方由白术 12 g、莪术 12 g、佛手 12 g、茯苓 手柑内酯），缺苦参（不含苦参碱）的阴性供试品溶液。
20 g、苦参20 g、白花蛇舌草20 g组成。按组方配比分别 2.3 指纹图谱研究
称取白术、莪术、佛手饮片各6 g，茯苓、苦参、白花蛇舌草 2.3.1 精密度试验
饮片各10 g。先用挥发油提取器提取白术、莪术、佛手的 取健脾化瘀方样品浓缩液（编号S1），按“2.2.2”项下
挥发油，备用；其药渣与上述称好的茯苓、苦参、白花蛇舌 方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样测
草混合，以1∶10的料液比加水浸泡30 min，提取3次，每 定6次，以12号对香豆酸色谱峰为参照峰（S），计算得到
次 1.5 h，合并提取液，滤过、减压浓缩，再与挥发油混合 各共有峰相对保留时间的 RSD 为 0.01%～0.70%（n＝
后定容至100 mL容量瓶中，得健脾化瘀方样品浓缩液。 6），相对峰面积的RSD为0.21%～2.26%（n＝6），表明该
2.2.2 健脾化瘀方供试品溶液的制备 方法精密度良好。
精密吸取健脾化瘀方样品浓缩液 1.5 mL，置 2 mL 2.3.2 重复性试验
容量瓶中，以水定容，过 0.45 μm 微孔滤膜，取续滤液， 取健脾化瘀方样品浓缩液（编号S1），按“2.2.2”项下
即得。 方法平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进
2.2.3 对照品溶液的制备 样测定，以 12 号对香豆酸色谱峰为参照峰（S），计算得
分别精密称取绿原酸、香草酸、对香豆酸、阿魏酸、 到各共有峰相对保留时间的RSD为0.01%～0.29%（n＝
橙皮苷、槲皮素、佛手柑内酯、苦参碱对照品 0.820 0、 6），相对峰面积的RSD为0.33%～2.11%（n＝6），表明该
1.980 0、9.990 0、10.040 0、1.166 0、10.040 0、9.980 0、 方法重复性良好。
10.130 0 mg，加甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶中，得上 2.3.3 稳定性试验
述 8 种成分质量浓度依次为 0.082 0、0.198 0、0.999 0、 取健脾化瘀方样品浓缩液（编号S1），按“2.2.2”项下
1.004 0、0.116 6、1.004 0、0.998 0、1.013 0 mg/mL的单一对 方法制备供试品溶液，分别于制备后 0、3、6、9、12、24 h
照品溶液；分别精密移取绿原酸、香草酸、对香豆酸、阿 按“2.1”项下色谱条件进样测定，以12号对香豆酸色谱峰
魏酸、橙皮苷、槲皮素、佛手柑内酯单一对照品溶液适 为参照峰（S），计算得到各共有峰相对保留时间的 RSD
量，用甲醇稀释并定容至同一 5 mL 容量瓶中，得上述 7 为0.01%～0.30%（n＝6），相对峰面积的RSD为0.20%～
种成分质量浓度分别为0.020 5、0.039 6、0.059 9、0.020 1、 2.41%（n＝6），表明供试品溶液在24 h内稳定性较好。
0.023 3、0.020 1、0.020 0 mg/mL的混合对照品溶液。 2.3.4 指纹图谱的建立及相似度评价
2.2.4 对照药材溶液的制备 取 10 批健脾化瘀方供试品溶液，按“2.1”项下色谱
按处方比例，分别称取白花蛇舌草、茯苓、苦参对照 条件进样测定，记录色谱图，将数据导入《中药色谱指纹
药材适量，分别以1∶10的料液比加水浸泡30 min，提取3 图谱相似度评价系统（2012版）》，以编号S1样品的色谱
次，每次 1.5 h，合并提取液，滤过、减压浓缩，并定容至 图为参照图谱，采用平均数法，时间窗设为0.2 min，进行
100 mL容量瓶中，即得对照药材浓缩液。分别精密移取 多点校正、全谱峰匹配，建立样品（编号S1～S10）叠加指
上述3种对照药材浓缩液1.0 mL至2 mL容量瓶中，加甲 纹图谱及对照指纹图谱（R），共确定了 27 个共有峰，详
醇溶解并定容，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即 见图1；通过与混合对照品溶液色谱图（图2）比对，指认
得白花蛇舌草、茯苓、苦参的对照药材溶液。 出7个成分，分别为8号绿原酸、9号香草酸、12号对香豆
按处方比例，分别称取白术、莪术、佛手对照药材适 酸、15号阿魏酸、19号橙皮苷、22号槲皮素、24号佛手柑
量，先用挥发油提取器提取挥发油，备用；药渣再分别以 内酯。以《中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件
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