Page 68 - 《中国药房》2023年23期

表2 健脾化瘀方中8种成分的线性关系考察结果 显示，绿原酸、香草酸、对香豆酸、阿魏酸、橙皮苷、槲皮
成分 回归方程 r 线性范围/μg 素、佛手柑内酯、苦参碱的平均加样回收率分别为
绿原酸 y＝28.445x－0.572 7 0.999 6 0.020～0.615 99.48%、101.32%、101.18%、100.79%、101.12%、99.19%、
香草酸 y＝19.030x－0.181 7 0.999 6 0.040～1.188
对香豆酸 y＝97.909x－0.789 3 0.999 7 0.060～1.798 99.81%、102.46%，RSD 分 别 为 1.34%、0.93%、1.90%、
阿魏酸 y＝56.184x－0.419 2 0.999 6 0.020～0.603 1.84%、0.54%、1.53%、1.33%、1.01%（n＝6），表明该方法
橙皮苷 y＝31.112x+0.051 9 0.999 8 0.023～0.700 准确度良好。
槲皮素 y＝34.224x－0.128 2 0.999 9 0.020～0.602 2.4.6 样品含量测定
佛手柑内酯 y＝20.584x+0.003 5 0.999 8 0.020～0.599
苦参碱 y＝1.440x+34.216 0 0.999 5 5.065～40.52 按“2.2.1”项下方法制备 10 批健脾化瘀方样品浓缩
2.4.2 精密度试验 液，再按“2.2.2”项下方法制备健脾化瘀方供试品溶液，
取“2.2.3”项下混合对照品溶液和苦参碱对照品溶 然后按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录各成分的峰面
液，按“2.1”项下色谱条件分别连续进样测定 6 次，记录 积并按外标法计算样品中8种成分的含量。每批样品平
峰面积。结果显示，绿原酸、香草酸、对香豆酸、阿魏酸、 行测定3次，取平均值，结果见表3。
橙皮苷、槲皮素、佛手柑内酯、苦参碱峰面积的RSD分别 3 讨论
为 0.85%、1.43%、1.03%、1.02%、1.08%、1.72%、0.66%、 3.1 检测波长的确定
0.36%（n＝6），表明仪器精密度良好。 笔者前期在选择检测波长时，取健脾化瘀方样品分
2.4.3 重复性试验 别在203、225、246、283、310 nm波长下进行了扫描，通过
取健脾化瘀方样品浓缩液（编号S1），按“2.2.2”项下 观察各波长下的色谱峰数量、峰形以及响应程度，发现
方法平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进 样品在283 nm波长下的色谱峰形状较好、易于观察，色
样测定，记录峰面积，以外标法计算样品含量。结果显 谱峰数量相比在其他波长下更多，且基线比较稳定，故
示，绿原酸、香草酸、对香豆酸、阿魏酸、橙皮苷、槲皮素、 最后确定以283 nm作为检测波长。另外，苦参是健脾化
佛手柑内酯、苦参碱的平均含量分别为 0.048、0.030、 瘀方治疗肝癌术后复发的起主要药效作用的中药之一，
0.158、0.025、0.024、0.019、0.015、14.00 mg/g，RSD 分别 但其活性成分苦参碱在283 nm波长下的色谱峰响应低，
[4]
为 0.59%、0.39%、1.81%、1.36%、2.21%、2.01%、1.14%、 故本研究根据相关文献报道 ，选择211 nm作为检测波
1.18%（n＝6），表明该方法重复性良好。 长单独对苦参碱进行了指纹图谱鉴定和含量测定。
2.4.4 稳定性试验 3.2 流动相及洗脱条件的确定
取健脾化瘀方样品浓缩液（编号S1），按“2.2.2”项下 笔者前期分别以甲醇-甲酸溶液、甲醇-0.1%磷酸溶
方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别在 0、 液、甲醇-0.05% 磷酸溶液作为流动相进行考察，结果显
3、6、9、12、24 h进样测定，记录峰面积。结果显示，绿原 示以甲醇-0.05%磷酸溶液作为流动相进行梯度洗脱时，
酸、香草酸、对香豆酸、阿魏酸、橙皮苷、槲皮素、佛手柑 各色谱峰的基线更稳定、分离度更高，样品出峰数量更
内 酯 、苦 参 碱 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 0.88%、0.92%、 多。同时，通过对洗脱条件的不断优化，以调整成分出
0.50%、1.93%、0.40%、1.15%、1.17%、1.34%（n＝6），表明 峰时间、提高色谱峰分离度，最后确定了文中的梯度洗
供试品溶液在24 h内稳定性良好。 脱条件。
2.4.5 加样回收率试验 3.3 指纹图谱结果分析
取已知成分含量的健脾化瘀方样品浓缩液（编号 本研究建立了健脾化瘀方的 HPLC 指纹图谱，通过
S1），共6份，每份精密移取0.75 mL，按1∶1（m/m）加入各 方法学考察，可知其精密度、重复性、稳定性试验的RSD
单一对照品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液， 均小于 3.00%，符合指纹图谱建立要求。该指纹图谱共
按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算加样回收率。结果 确定了 27 个共有峰，指认了 8 个化学成分，根据相似度
表3 不同批次健脾化瘀方中8种成分的含量测定结果（n＝3）

绿原酸 香草酸 对香豆酸 阿魏酸 橙皮苷 槲皮素 佛手柑内酯 苦参碱
编号
含量/（mg/g） RSD/% 含量/（mg/g） RSD/% 含量/（mg/g） RSD/% 含量/（mg/g） RSD/% 含量/（mg/g） RSD/% 含量/（mg/g） RSD/% 含量/（mg/g） RSD/% 含量/（mg/g） RSD/%
S1 0.046 2.17 0.030 1.95 0.156 2.25 0.025 2.43 0.023 2.19 0.019 2.89 0.014 2.17 14.05 0.71
S2 0.024 2.44 0.025 2.28 0.145 1.73 0.030 2.00 0.036 1.15 0.017 2.11 0.016 1.30 14.90 1.34
S3 0.033 1.73 0.030 1.95 0.146 2.05 0.028 1.79 0.019 2.40 0.023 1.39 0.018 1.40 18.10 2.76
S4 0.052 1.92 0.027 2.11 0.116 1.31 0.006 2.53 0.034 1.47 0.025 1.01 0.017 1.48 16.19 1.91
S5 0.021 2.71 0.028 2.04 0.150 2.75 0.029 2.47 0.029 1.72 0.023 2.28 0.023 1.09 23.19 1.12
S6 0.048 1.33 0.034 2.52 0.170 1.48 0.031 1.86 0.023 2.12 0.021 1.92 0.021 2.38 21.27 1.50
S7 0.040 2.50 0.028 1.23 0.119 0.84 0.022 1.71 0.014 1.79 0.026 1.17 0.020 2.01 23.00 0.87
S8 0.050 2.00 0.032 1.41 0.118 1.29 0.024 2.50 0.020 2.25 0.019 2.64 0.014 1.79 24.11 1.29
S9 0.047 2.13 0.028 1.61 0.164 1.53 0.027 2.78 0.022 2.05 0.024 1.05 0.027 2.78 14.90 1.34
S10 0.061 2.49 0.028 1.79 0.295 1.69 0.062 1.21 0.053 1.15 0.019 1.32 0.024 1.88 18.29 2.02

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