Page 60 - 《中国药房》2023年23期
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中、高剂量组大鼠分别腹腔注射 6.665、13.33、26.66 2.9 大鼠牙周组织中 OPG、RANKL、SDF-1、CXCR4
mg/kg 苍术素 ，且同时灌胃等体积的生理盐水；甲硝唑 蛋白表达的检测
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组大鼠灌胃0.05 g/kg甲硝唑 ，且同时腹腔注射等体积 采用Western blot法进行检测。利用RIPA裂解缓冲
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的生理盐水；AMD3100组大鼠灌胃1 mg/kg AMD3100 ， 液提取“2.4”项下牙周组织总蛋白。经BCA法对蛋白进
且同时腹腔注射等体积的生理盐水；苍术素高剂量+ 行定量后，将蛋白进行煮沸变性。取 40 μg 蛋白样品进
AMD3100 组大鼠腹腔注射 26.66 mg/kg 苍术素，且同时 行12%聚丙烯酰胺凝胶电泳（电压100 V，电泳时间2 h）
灌胃 1 mg/kg AMD3100；对照组、模型组大鼠均需灌胃 分离，转移（电流250 mA，转膜时间1.5 h）到聚偏二氟乙
且腹腔注射等量的生理盐水。各组大鼠每天给药（或生 烯膜上，以 5% 脱脂牛奶进行封闭；加入一抗 OPG（稀释
理盐水）1次，持续4周。 比例 1∶3 000）、RANKL（稀释比例 1∶2 000）、SDF-1（稀
2.3 大鼠牙龈指数评定 释比例 1∶3 000）、CXCR4（稀释比例 1∶2 000）、GAPDH
末次给药（或生理盐水）24 h后，全部大鼠均进行牙 （稀释比例 1∶4 000），4 °C 孵育过夜；洗膜后，加入二抗
龈指数评定。利用牙周探针探测牙龈边缘，根据大鼠牙 （稀释比例1∶2 000），室温孵育1 h；加入ECL试剂显色，
龈出血、水肿、溃疡形成等情况来评定牙龈指数。评定 利用Image J软件评估蛋白灰度值。目的蛋白的相对表
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标准如下 ：牙龈正常，记 0 分；牙龈轻微水肿但探针滑 达水平用目的蛋白条带灰度值与内参蛋白（GAPDH）条
带灰度值的比值表示。
动后无出血现象，记1分；探针滑动后牙龈出血，记2分；
2.10 统计学方法
牙龈自发出血或有溃疡形成，记3分。
利用SPSS 25.0软件进行统计分析。符合正态分布
2.4 标本收集与处理
且方差齐性的数据以 x±s 表示。多组数据间的比较采
牙龈指数评定结束后，麻醉所有大鼠（每组 18 只），
用单因素方差分析，进一步两组数据间的比较采用
腹主动脉取血，经离心后得血清，用于 ELISA 实验。血
SNK-q检验。检验水准α＝0.05。
液收集完成后，每组随机选取6只大鼠，处死，收集大鼠
3 结果
上颌骨组织用于亚甲蓝染色。处死各组剩余的 12 只大
3.1 苍术素对大鼠牙龈指数的影响
鼠，收集大鼠的牙周组织，分为两部分（每部分包含各组
与对照组比较，模型组大鼠牙龈指数显著升高（P＜
6 只大鼠的牙周组织），一部分固定于 4% 多聚甲醛中用
0.05）；与模型组比较，苍术素低、中、高剂量组和甲硝唑
于 HE 染色和 TRAP 染色，另一部分冻存于－80 ℃冰箱
组大鼠牙龈指数显著降低（P＜0.05），AMD3100 组大鼠
中用于Western blot实验。
牙龈指数显著升高（P＜0.05）；与苍术素高剂量组比较，
2.5 大鼠血清中IL-6、TNF-α水平检测
苍术素高剂量+AMD3100 组大鼠牙龈指数显著升高
采用 ELISA 法进行检测。取“2.4”项下血清，冰上
（P＜0.05）。结果见表1。
解冻后，严格按照试剂盒说明书操作步骤检测大鼠血清
表1 各组大鼠牙龈指数及血清中 IL-6、TNF-α 水平比
中IL-6、TNF-α水平。
较（x±s，n＝18）
2.6 大鼠牙槽骨吸收检测
分组 牙龈指数/分 IL-6/（pg/mL） TNF-α/（pg/mL）
采用亚甲蓝染色法进行检测。将“2.4”项下的大鼠 对照组 0.00±0.00 65.53±3.15 128.65±5.74
上颌骨组织煮沸后剥离软组织，然后加入 0.1% 亚甲蓝 模型组 2.15±0.13 a 132.27±7.34 a 259.45±11.73 a
苍术素低剂量组 1.78±0.12 b 115.58±5.36 b 214.43±10.05 b
孵育 2 min，通过光学显微镜观察并记录第一磨牙到第
苍术素中剂量组 1.29±0.12 b 98.85±4.23 b 179.94±9.03 b
三磨牙处釉-牙骨质界到牙槽嵴顶的距离，将该距离作 苍术素高剂量组 0.28±0.02 b 77.64±3.15 b 149.25±7.05 b
为牙槽骨吸收值。 甲硝唑组 0.26±0.01 b 78.86±4.03 b 148.87±7.11 b
AMD3100组 2.58±0.10 b 179.93±6.58 b 301.45±13.39 b
2.7 大鼠牙周组织病理损伤观察
苍术素高剂量+AMD3100组 1.51±0.13 c 107.72±4.87 c 193.36±8.72 c
采用 HE 染色法进行观察。将“2.4”项下固定于 4%
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与苍术素
多聚甲醛的牙周组织脱钙后包埋在石蜡中，用切片机切 高剂量组比较，P＜0.05。
成4 μm厚的切片，经HE染色、磷酸盐缓冲液冲洗切片、 3.2 苍术素对大鼠血清中IL-6、TNF-α水平的影响
梯度乙醇和二甲苯脱水、中性树脂封片并晾干后，通过 与对照组比较，模型组大鼠血清中 IL-6、TNF-α 水
光学显微镜观察牙周组织的病理变化。 平显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，苍术素低、中、高
2.8 大鼠牙周组织中破骨细胞数检测 剂量组和甲硝唑组大鼠血清中IL-6、TNF-α水平均显著
采用TRAP染色法进行检测。取“2.7”项下切片，按 降低（P＜0.05），AMD3100组大鼠血清中IL-6、TNF-α水
照 TRAP 染色试剂盒操作步骤进行染色、吹干后，利用 平显著升高（P＜0.05）；与苍术素高剂量组比较，苍术素
中性明胶封片，通过光学显微镜观察牙周组织中破骨细 高剂量+AMD3100 组大鼠血清中 IL-6、TNF-α 水平显著
胞并统计细胞数。 升高（P＜0.05）。结果见表1。
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