Page 48 - 《中国药房》2023年20期

4 讨论
HDAC1 62 kDa HDAC1 62 kDa
β-actin 43 kDa β-actin 43 kDa 胶质瘤是人神经系统最常见且难治疗的恶性肿瘤，
0.8 0.8 其复发率高，现有治疗方案效果有限，因此寻找安全、有
0.6
0.6
相对表达量 0.4 a b 相对表达量 0.4 b b 效的治疗药物非常重要。中医药具有毒副作用小、药效
持久、靶点多及作用较安全等特点，在提高患者生活质
0.2
0.2
[11]
量、延长生存期方面具有显著优势，颇受临床关注 。
0 0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ Ⅱ Ⅲ 挖掘具有胶质瘤临床治疗和患者预后改善潜力的中药
A. U87细胞 B. U251细胞
Ⅰ：对照组；Ⅱ：人参皂苷 Rh 2 30 μmol/L 组；Ⅲ：人参皂苷 Rh 2 50 及活性成分是目前的研究方向之一。考虑到人参皂苷
μmol/L组；a：与对照组比较，P＜0.05；b：与对照组比较，P＜0.01。 Rh2对肿瘤细胞的体内外抑制活性以及对大鼠胶质瘤
图3 人参皂苷 Rh2对人胶质瘤细胞中 HDAC1 蛋白表 细胞增殖、凋亡的影响，本研究选择了 2 种常用人胶质
达的影响 瘤细胞系——U87、U251 细胞，初步评价了该成分的抗
3.4 人参皂苷 Rh2对人胶质瘤细胞凋亡相关蛋白表达 肿瘤活性。
的影响 有研究发现，人参皂苷 Rh2 能通过抑制 HDAC1、
经30、50 μmol/L的人参皂苷Rh2作用48 h后，U87、 HDAC2、HDAC6 的表达而发挥抑制白血病细胞增殖的
[12]
作用 ，因此该成分可能是一种天然的 HDAC 抑制剂
U251 细胞中 Bcl-2 蛋白的表达水平均较对照组显著降
（histone deacetylase inhibitor，HDACi）。已有研究表明，
低，Bax、cleaved caspase-3 蛋白的表达水平均较对照组
HDAC1在结肠癌、肝癌等多种肿瘤细胞中呈高表达，可
显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。结果见图4。
参与组蛋白和非组蛋白的去乙酰化，并且与患者的不良
Bax 20 kDa 预后存在密切关联 [13―14] 。本研究在前期研究的基础上，
Bcl-2 26 kDa 通过 Western blot 实验检测发现，人参皂苷 Rh2可下调 2
种人胶质瘤细胞中 HDAC1 蛋白的表达，且这种作用有
cleaved caspase-3 17 kDa
一定的浓度依赖趋势。可见，HDAC1 有望成为肿瘤治
β-actin 43 kDa
疗的潜在靶点。
对照组 人参皂苷Rh 2 人参皂苷Rh 2
30 μmol/L组 50 μmol/L组 本研究采用CCK-8实验、流式细胞术实验检测了人
0.6
对照组 参皂苷 Rh2对人胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响，结果显
b 人参皂苷Rh 2 30 μmol/L组 b
人参皂苷Rh 2 50 μmol/L组 示，人参皂苷 Rh2能有效抑制 2 种人胶质瘤细胞增殖并
0.4
a
相对表达量 a a a 促进其凋亡。为了进一步明确人参皂苷Rh2对胶质瘤细
胞凋亡的影响机制，本研究针对经典的 Bcl-2 家族蛋白
0.2
介导的细胞凋亡途径进行了探索。在 Bcl-2 家族蛋白
0 中，Bax是促凋亡关键蛋白，可促进肿瘤细胞凋亡；Bcl-2
Bax Bcl-2 cleaved caspase-3 是抑制凋亡的关键蛋白，可抑制肿瘤细胞凋亡。现有研
A. U87细胞
究表明，促凋亡蛋白 Bax 可增加线粒体外膜的通透性，
Bax 20 kDa 有利于细胞色素C等介质被释放到细胞质中，从而激活

Bcl-2 26 kDa 下游 caspase-3，活化产物 cleaved caspase-3 可通过破坏
[15]
细胞来促进细胞凋亡 ；抑凋亡蛋白 Bcl-2 则可通过与
cleaved caspase-3 17 kDa
[16]
Bax 蛋白形成异二聚体而发挥凋亡抑制作用 。可见，
β-actin 43 kDa
[17]
细胞凋亡受 Bax、Bcl-2 蛋白的共同调控。Wang 等 通
对照组 人参皂苷Rh 2 人参皂苷Rh 2
30 μmol/L组 50 μmol/L组 过实验证实，下调 HDAC1 可影响 Bcl-2/caspase 信号通
1.0 对照组
b 路的表达，从而促进肿瘤细胞的凋亡。本研究 Western
人参皂苷Rh 2 30 μmol/L组
0.8 a
人参皂苷Rh 2 50 μmol/L组 blot实验结果显示，人参皂苷Rh2能显著促进2种人胶质
a
相对表达量 0.6 a b a 瘤细胞中 Bax、cleaved caspase-3 蛋白的表达，抑制 Bcl-2
蛋白的表达。
0.4
0.2 综上所述，人参皂苷Rh2能抑制人胶质瘤U87、U251
细胞增殖并促进其凋亡，其作用可能与下调 HDAC1 蛋
0
Bax Bcl-2 cleaved caspase-3 白的表达和激活 Bcl-2 家族蛋白介导的凋亡途径有关。
B. U251细胞
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与对照组比较，P＜0.01。 在后续研究中，本课题组拟构建HDAC1转染细胞株，进
图4 人参皂苷Rh2对人胶质瘤细胞凋亡相关蛋白表达 一步对人参皂苷 Rh2的上述作用进行验证，以期为其分
的影响 子机制的阐释提供参考。
· 2474 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 20 中国药房 2023年第34卷第20期