Page 48 - 《中国药房》2023年16期
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卒中是一种急性脑血管疾病，是由于脑血管突然破                          多克隆抗体和鼠源 β-肌动蛋白（β-actin）多克隆抗体（批
          裂或阻塞致血液供应不足而引发的脑组织损伤性疾病。                            号分别为08D01、ZP8069BP69、BST17874165、ZP7411BP11、
         《柳叶刀》最新报告指出，全球卒中发病率逐年增高，现                            BOS6738BP3380、AC-15）均购自武汉博士德生物工程
                                                  [1]
          已成为世界第二大死亡原因和第三大残疾原因 。卒中                            有限公司；辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔 IgG
          通常分为缺血性和出血性两大类，其中缺血性脑卒中约                            二抗（批号7074S）购自美国CST公司；BCA蛋白定量试
          占70%，缺血再灌注损伤是其重要的病理机制之一 。                           剂盒、超敏 ECL 化学发光试剂盒、HRP 标记的山羊抗鼠
                                                     [2]
              贯叶金丝桃，又名圣·约翰草，为藤黄科植物贯叶金                         IgG二抗（批号分别为OS28、EL2001001、916A035）均购
          丝桃 Hypericum perforatum L. 的干燥地上部分，始载于              自爱必信（上海）生物科技有限公司；TRIzol 试剂、HiFi-
         《本草纲目》。该药被2020年版《中国药典》（一部）收录，                        Script cDNA链合成试剂盒、UltraSYBR Mixture（批号分
          性寒、味辛，归肝经，具有疏肝解郁、清热利湿、消肿通乳                          别为 01761、33020、30506）均购自江苏康为世纪生物科
                [3]
          的功效 。贯叶金丝桃作为抗抑郁药物在欧洲已有数百                            技有限公司；PCR引物由生工生物工程（上海）股份有限
          年的历史，以其提取物为主要成分的药物更是抑郁症治                            公司合成，引物序列及产物长度见表1。
                  [4]
          疗的首选 。此外有研究表明，贯叶金丝桃对卒中后抑                                      表1 PCR引物序列及产物长度
          郁表现出较好的治疗效果 。近期研究指出，贯叶金丝                            基因                   引物序列              产物长度/bp
                                 [5]
          桃对缺血性脑损伤有保护作用              [6―7] 。缺血性脑损伤的病          EPO         上游：5′-CTGCTCCACTCCGAACAATCACTG-3′  127
                                                                          下游：5′-CCTGGTCATCTGTCCCCTGTCC-3′
          理机制较为复杂，其中促红细胞生成素（erythropoietin，
                                                              EPOR        上游：5′-GAGCCCAGAGAGCGAGTTTGAAG-3′  91
          EPO）介导的 Janus 激酶 2（Janus kinase 2，JAK2）/信号转                     下游：5′-CCACCACAGGCAGCCATCATTC-3′
          导及转录激活因子 3（signal transduction and activator of     JAK2        上游：5′-TCGCTGCCGAGGGATGTGAG-3′  146
          transcription 3，STAT3）信号通路已被证实与保护脑缺血                            下游：5′-TCTTGTTCCTGTTGCCTGCTTCTG-3′
                                                              STAT3       上游：5′-GAGGCAGGAGAATCGCTTGAACC-3′  97
          再灌注损伤的作用有关 。基于此，本研究拟利用改良                                        下游：5′-TCTCAGACTGTCGCCCAGGATG-3′
                               [8]
          线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型，探讨贯叶                            β-actin     上游：5′-CCATCAGCCAGCAGTCGTCTAATC-3′  124
          金丝桃对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，并初步分                                        下游：5′-AGAGCAGCAACTTCTTCGTCACAC-3′
          析其潜在分子机制是否与 EPO 介导的 JAK2/STAT3 信                    1.3 实验动物
          号通路有关，以期为贯叶金丝桃的临床应用提供参考。                                SPF级雄性SD大鼠75只，体重160～180 g，由北京
          1 材料                                                维通利华实验动物技术有限公司提供，动物生产许可证
          1.1 主要仪器                                            号为 SCXK（京）2016-0006。所有动物均饲养于天津市
              本研究所用主要仪器包括 Ci-L 型显微镜、Ni-U 型                    医药科学研究所动物房内，自由摄食、饮水。本研究所
          荧光显微镜（日本Nikon公司），Infinite M2000型酶标仪                 涉及的动物操作均符合天津市医药科学研究所实验动
         （瑞士TECAN公司），Mini PROTEAN Tetra型电泳仪（美                 物伦理的相关规定，并经过伦理委员会批准（批准编码
          国Bio-Rad公司），ImageQuant LAS 500型一体化成像仪               IMPS-EAEP-Z-Z2019017-01）。
         （美国 GE 公司），ABI7500 型反转录聚合酶链式反应                       2 方法
         （RT-PCR）仪（美国ABI公司）等。                                 2.1 贯叶金丝桃提取物浸膏的制备
          1.2 主要药品与试剂                                             取贯叶金丝桃药材 5 850 g，粉碎，用 70% 乙醇冷浸
              贯叶金丝桃药材（产地四川，批号20190503）购自安                     提取7 d×3次，合并提取液，浓缩干燥，即得贯叶金丝桃
          徽亳州中药材批发市场，经天津市医药科学研究所王文                            提取物浸膏（每克浸膏相当于生药14.48 g）。
          彤研究员鉴定为藤黄科植物贯叶金丝桃 H. perforatum                     2.2 大鼠脑缺血再灌注损伤模型的建立
          L.的干燥地上部分；尼莫地平片（阳性对照，批号2003004，                         采用改良线栓法制备大鼠大脑左侧中动脉闭塞再
          规格20 mg）购自天津市中央药业有限公司；注射用盐酸                         灌注模型：在麻醉（注射用盐酸替来他明盐酸唑拉西泮
          替来他明盐酸唑拉西泮（批号8ADTA，规格为替来他明                          25 mg/kg+盐酸赛拉嗪注射液 2.5 mg/kg，肌内注射，后
          125 mg+唑拉西泮125 mg）购自法国Virbac公司；盐酸赛                  同）状态下，于大鼠颈部正中2 cm切口，钝性分离左侧颈
          拉嗪注射液（批号20201118，规格2 mL∶0.2 g）购自吉林                  总、颈内和颈外动脉，用3-0号无菌手术线结扎颈总和颈
          省华牧动物保健品有限公司。                                       外动脉，用动脉夹夹闭颈内动脉远心端；于颈内动脉近
              TTC试剂（批号L09A10S83253）购自上海源叶生物                   心端备线，在颈总动脉距离分叉约1 cm处用眼科剪剪一
          科 技 有 限 公 司 ；苏 木 精 、伊 红 染 色 液（批 号 分 别 为             小口，将线栓送入切口，经颈内动脉顺行至线栓标记黑
          G1140、G1100）均 购 自 北 京 索 莱 宝 科 技 有 限 公 司 ；           点处，结扎颈内动脉近心端以固定线栓，造成缺血；缺血
                                                                                      [9]
          TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒（荧光素）购自瑞士 Roche                      2 h 后取出线栓，实现再灌注 。其中，部分大鼠（10 只）
          公司；兔源EPO、促红细胞生成素受体（erythropoietin re‐               仅分离血管但不结扎、不插线栓，将其作为假手术组。
                                                                                                      [10]
          ceptor，EPOR）、JAK2、磷酸化 STAT3（p-STAT3）、STAT3          参考Zea-Longa评分法，评分1～3分为造模成功 。

          · 1962 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 16                            中国药房  2023年第34卷第16期
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