Page 21 - 《中国药房》2023年12期

关 。2020 年版《中国药典》以香豆素类成分欧前胡素 2 方法与结果
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作为单一指标对白芷进行质量评价 。陈琳等 和吴宝 2.1 供试品溶液的制备
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成等 分别基于 5～9 种香豆素类成分的含量对不同产 取两种基原的白芷样品粉末 50 mg，放入 1.5 mL
地的白芷质量进行了评价，但研究结果存在一定差异。 离心管中，加入 400 μL 提取液（乙腈与甲醇的体积比
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目前从白芷中分离出的香豆素类成分多达50多种 ，仅 为 1∶1），涡旋混匀 30 s 后，低温超声提取 30 min（5 ℃，
以1种或几种特定香豆素类成分作为质量评价指标不符 40 kHz），静置 30 min（－20 ℃），于 4 ℃下以 13 000×g
合中药整体性的特点，也无法体现不同基原白芷的质量 离心15 min；取上清液，用氮气吹干，再用120 μL复溶液
差异。因此，有必要对两种基原白芷的整体香豆素类成
（乙腈与水的体积比为 1∶1）复溶，低温超声萃取 5 min
分进行系统分析。
（5 ℃，40 kHz），再于 4 ℃下以 13 000×g 离心 5 min，取
本研究采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱
上清液作为供试品溶液。
高分辨质谱联用（UPLC-Q-Exactive-MS/MS）的非靶向
2.2 色谱条件
代谢组学技术分析杭白芷和祁白芷的香豆素类成分，运
色谱柱为BEH C18 （100 mm×2.1 mm，1.8 µm）；以水
用主成分分析（principal component analysis，PCA）、偏最
（含0.1%甲酸）为流动相A，乙腈-异丙醇溶液（体积比为
小 二 乘 法 判 别 分 析（partial least squares discriminant
1∶1，含 0.1% 甲酸）为流动相 B 进行梯度洗脱（0～3.0
analysis，PLS-DA）和正交偏最小二乘法判别分析（or‐
min，95%A→80%A；3.0～9.0 min，80%A→5%A；9.0～
thogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-
13.0 min，5%A；13.0～13.1 min，5%A→95%A；13.1～
DA）方法对得到的香豆素类成分进行鉴定并筛选差异
16.0 min，95%A）；流速为 0.40 mL/min；柱温为 40 ℃；进
成分，进而对不同基原的白芷进行聚类分析，寻找对两
样量为10 μL。
种基原白芷质量差异贡献最大的香豆素类成分，以期为
2.3 质谱条件
白芷的来源鉴别、质量评价以及综合开发利用提供科学
采用正负离子扫描模式，质量扫描范围（m/z）为
依据。
1 材料 50～1 000；离子喷雾电压中正离子电压为5 000 V，负离
子电压为 4 000 V，去簇电压为 80 V；喷雾气压力为 50
1.1 主要仪器
psi，辅助加热气压力为50 psi，气帘气压力为30 psi；离子
本研究所用主要仪器包括 MS105DU 型电子天平
源加热温度为500 ℃；循环碰撞能为20～60 V。
（瑞士 Mettler Toledo 公司）、Centrifuge-5424R 型冷冻离
心机（德国 Eppendorf 公司）、Wonbo-96c 型高通量组织 2.4 数据处理与统计分析
破碎仪（上海万柏生物科技有限公司）、LNG-T88 型台 取供试品溶液适量，按“2.2”“2.3”项下色谱和质谱
式快速离心浓缩干燥器（太仓市华美生化仪器厂）、 条件进样分析，将原始的质谱数据导入代谢组学处理软
JXDC-20型氮气吹扫仪（上海净信实业发展有限公司）、 件 Progenesis QI 中进行基线过滤、峰识别和积分、保留
Vanquish Horizon型UHPLC液相色谱系统和Q-Exactive 时间校正、峰对齐，最终得到一个保留时间、质荷比和峰
型质谱仪系统（美国Thermo Fisher Scientific公司）。 强度的数据矩阵。数据矩阵用80%规则来去除缺失值，
1.2 主要药品与试剂 再进行空缺值填补。为减小样品制备及仪器不稳定带
从四川、河南、河北等地采集了杭白芷 A. dahurica 来的误差，本研究将总峰归一化后取其对数值用于后续
cv. ‘Hangbaizhi’与祁白芷 A. dahurica cv. ‘Qibaizhi’根 分析。将预处理后的数据矩阵导入人类代谢组数据库
部材料共 18 份（来源信息见表 1），采集时间为 2019 年 （the Human Metabolome Database，HMDB）化学小分子
（杭白芷采收期为6月中下旬－7月上旬，祁白芷采收期 数据库（https：//hmdb.ca/）进行成分鉴定分类，筛选出两
为 8－9 月），将其根部材料自然风干并储存于南方医科 种基原白芷中的香豆素类成分；将鉴定所得的数据导入
大学中医药学院标本馆。上述样品均由南方医科大学 SIMCA 14.1 软件进行无监督的 PCA 和有监督的 PLS-
中医药学院田恩伟副教授鉴定，均为真品。实验用试剂 DA、OPLS-DA多元统计分析，使用200次循环交互验证
均购自美国 Thermo Fisher Scientific 公司，甲醇、乙腈为 来评估模型的稳定性。基于OPLS-DA模型得到的变量
质谱纯，水为超纯水。 重要性投影（variable importance in projection，VIP）和

表1 白芷药材来源信息 SPSS 26.0 软件进行 t 检验得到的 P 值，以 VIP 值＞1.0、
样品批次 产地 采集地点经纬度 基原植物鉴定 品种编号 P＜0.05 的成分为差异成分；再根据差异成分，用 SPSS
S1～S6 四川广元 N：31°56′38″；E：105°38′39″ 杭白芷 HBZ
S7～S12 河南禹州 N：34°12′01″；E：113°34′32″ 祁白芷 QBZ 26.0软件对两种基原白芷作聚类分析，以检查所筛得差
S13～S18 河北安国 N：38°25′11″；E：115°19′37″ 祁白芷 QBZ 异成分的可靠性。

中国药房 2023年第34卷第12期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 12 · 1423 ·