Page 18 - 《中国药房》2023年12期

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表3 HJB对2种细胞活性氧的影响（x±s，n＝3） 诱导其凋亡；马玉坤等 从狼毒大戟中分离得到了 HJB
组别 MDA-MB-231细胞 MDA-MB-468细胞 单体，并发现该成分对人肝癌BEL-7402细胞、肺癌NCI-
空白对照组 55.99±1.16 22.40±2.58 H460细胞均具有较好的抑制活性；Wang等 发现，HJB
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HJB 10 μmol/L组 71.92±1.76 a 48.07±2.20 a
HJB 20 μmol/L组 120.53±3.67 a 86.53±4.27 a 可抑制人肝癌HepG-2细胞增殖并诱导其凋亡。由此可
HJB 40 μmol/L组 171.03±1.60 a 137.88±3.46 a 见，HJB有可能成为治疗癌症的候选药物。本课题组在
a：与空白对照组比较，P＜0.05 前期研究中选择了4种TNBC细胞和1种正常人乳腺细
胞，筛选结果显示，HJB 对正常人乳腺细胞 MCF-10A 的
Bcl-2 26 kDa
IC50 为（45.60±3.52）μmol/L，对 MDA-MB-231、MDA-
Bax 20 kDa MB-468 细胞均表现出明显的增殖抑制作用，且较对于
MDA-MB-436、BT-549 细胞的作用更明显，故选择前 2
Cyt-C 14 kDa
种TNBC细胞作为研究对象。本研究结果显示，HJB对
MDA-MB-231、MDA-MB-468 细 胞 的 IC50 分 别 为
caspase-9 46 kDa
（21.57±1.04）、（18.99±0.53）μmol/L。综合前期研究和
cleaved caspase-9 37 kDa 本研究结果发现，HJB对正常人乳腺细胞的毒性作用较
弱，但对2种TNBC细胞的增殖具有抑制作用，且有一定
caspase-3 35 kDa 的时间-浓度依赖趋势。
活性氧水平升高和线粒体膜电位下降是促进肿瘤
cleaved caspase-3 17 kDa
细胞凋亡的关键因素 。与正常细胞相比，肿瘤细胞对
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外源性活性氧更为敏感 。可见，促进肿瘤细胞产生活
GAPDH 37 kDa
性氧的药物可表现出一定的抗癌作用。研究指出，活性
空白对照组 HJB 10 HJB 20 HJB 40
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μmol/L组 μmol/L组 μmol/L组 氧的过量产生与线粒体功能障碍有关 。肿瘤细胞最
图7 HJB 对 MDA-MB-231 细胞凋亡相关蛋白表达影 常见的代谢异常是线粒体功能障碍，当细胞被凋亡信号
响的电泳图 诱导刺激破坏时，其线粒体膜电位将首先发生下降 。
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表4 HJB 对 MDA-MB-231 细胞凋亡相关蛋白表达的 因此，降低线粒体膜电位可促进肿瘤细胞凋亡。激光共
影响（x±s，n＝3） 聚焦显微镜观察和流式细胞术实验结果表明，HJB可提
组别 Bcl-2 Bax Cyt-C caspase-9 cleaved caspase-9 caspase-3 cleaved caspase-3 高2种TNBC细胞的凋亡率，降低线粒体膜电位，升高活
空白对照组 1.34±0.10 0.30±0.02 0.37±0.06 0.69±0.03 0.39±0.03 1.30±0.07 0.32±0.03 性氧水平。这提示 HJB 的促凋亡作用可能与降低线粒
a
HJB 10 μmol/L组 0.92±0.04 0.51±0.03 0.91±0.08 0.52±0.03 a 0.74±0.10 a 1.07±0.05 0.57±0.06 a
a
a
a
HJB 20 μmol/L组 0.75±0.04 0.73±0.05 1.15±0.07 0.42±0.03 a 0.80±0.04 a 0.90±0.03 0.69±0.04 a 体膜电位和升高活性氧水平有关。
a
a
a
a
a
a
HJB 40 μmol/L组 0.58±0.05 1.50±0.16 1.44±0.13 0.21±0.03 a 1.06±0.12 a 0.67±0.11 1.35±0.09 a 线粒体凋亡通路的调控与Bcl-2家族促凋亡蛋白和
a
a
a：与空白对照组比较，P＜0.05 抗凋亡蛋白的比例有关。研究表明，Bcl-2 为抗凋亡蛋
表5 HJB 对 MDA-MB-468 细胞凋亡相关蛋白表达的 白，Bax为促凋亡蛋白，当细胞接收到凋亡刺激信号后，
影响（x±s，n＝3） Bcl-2和Bax可形成多聚体，从而可增加细胞线粒体膜的
组别 Bcl-2 Bax Cyt-C caspase-9 cleaved caspase-9 caspase-3 cleaved caspase-3 通透性，导致Cyt-C从线粒体转移到细胞质，进一步激活
空白对照组 1.44±0.10 0.51±0.06 0.54±0.06 1.26±0.08 0.44±0.02 1.24±0.07 0.10±0.03 [27]
HJB 10 μmol/L组 1.14±0.05 0.78±0.06 0.81±0.03 1.10±0.07 a 0.55±0.03 a 1.12±0.05 0.31±0.03 a caspase 信号通路 。其中，当 caspase-9 被激活后，其发
a
a
a
a
HJB 20 μmol/L组 0.91±0.04 0.86±0.13 1.07±0.07 0.78±0.05 a 0.67±0.06 a 0.82±0.03 0.40±0.03 a 生自身裂解产生 cleaved caspase-9，并促使下游凋亡执
a
a
a
a
HJB 40 μmol/L组 0.59±0.03 1.13±0.11 1.24±0.09 0.68±0.04 a 1.14±0.09 a 0.60±0.08 0.82±0.09 a 行因子 caspase-3 转化为 cleaved caspase-3，最终导致细
a
a
a
a
a：与空白对照组比较，P＜0.05 胞凋亡 。Western blot 实验结果表明，HJB 可下调 2 种
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4 讨论 TNBC细胞中Bcl-2的表达，上调Bax的表达，促进Cyt-C
TNBC 异质性强，恶性程度、复发率和转移率均高， 的释放和 caspase-9、caspase-3 的活化，提示 HJB 可能是
严重危害女性健康，因此有效抑制 TNBC 复发转移、降 通过激活线粒体凋亡通路来促进TNBC细胞的凋亡。
低患者病死率成为临床亟待解决的问题 [6，14―15] 。研究表 综上所述，HJB 对 MDA-MB-231、MDA-MB-468 细
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明，中药抗癌具有突出优势 。狼毒大戟为 2020 年版 胞的增殖具有抑制作用，并可诱导其凋亡。但本研究并
《中国药典》（一部）记载的中药狼毒的基原植物，是符合 未设计通路抑制剂和阳性对照药，且仅在细胞层面进行
中医“以毒攻毒法”的常用肿瘤治疗药物 。HJB是从狼 了初步研究，具体体内作用机制尚有待进一步探讨。
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毒大戟根部提取的二萜类化合物，是重要的抗肿瘤活性 参考文献
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成分之一 。王晓丽等 [19―20] 研究发现，HJB 可浓度依赖 [ 1 ] SUNG H，FERLAY J，SIEGEL R L，et al. Global cancer
性地抑制人脑胶质瘤 U251、白血病 K562 细胞增殖，并 statistics 2020：GLOBOCAN estimates of incidence and
· 1420 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 12 中国药房 2023年第34卷第12期