Page 80 - 《中国药房》2023年11期
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VEGFA）、碱性成纤维细胞生长因子 2（basic fibroblast               购自武汉云克隆科技股份有限公司；苏木素-伊红（HE）
          growth factor 2，bFGF2）等参与了骨血管的生成和骨再                 染色试剂盒（批号RE1100）购自武汉百杰康生物科技有限
          生，以促进骨修复。在这一阶段，应用具有活血祛瘀功                            公司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗
          效的中药，能够改善血液循环，促进骨折部位血管再生、                          （批号B210317234）购自武汉塞维尔生物科技有限公司。
          骨痂形成，加速骨的形成           [4―7] 。在骨痂改造塑形期内，破            1.3 主要仪器
          骨细胞、成骨细胞和骨细胞三者之间相互协调，碱性磷                                本研究所用主要仪器有EYELA N-1100型旋转蒸发
          酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、骨钙素（osteocalcin，       仪（日本东京理化器械株式会社），TC-15 型套式恒温器
          OC）等的表达水平也发生了变化。在这一阶段，应用具                          （山东新华医疗器械股份有限公司），FD-1A-50型真空冷
          有强筋健骨功效的中药，可以促进成骨细胞增殖，有效                            冻干燥机（江苏天翎仪器有限公司），JE303GE型电子天
          提高骨密度，促进骨痂改造与塑形              [8―10] 。               平（梅特勒-托利多仪器有限公司），H1650R型台式高速
              接骨膏由土家药材独正杆、刺老苞、刺五加组方而                          冷冻离心机（湘仪离心机仪器有限公司），KD-BM&BL
          成，经粉碎、混匀、炼蜜调制成膏药，具有活血化瘀、祛瘀                          型生物组织包埋一体机、KD-2258 型石蜡切片机、KD-P
          生新、接骨疗伤的功效，外敷可用于闭合性骨折，在恩施                           型生物组织摊片机（金华市科迪仪器设备有限公司），
          土家族苗族自治州中心医院临床应用 30 余年，疗效显                          CKX41型显微镜（日本Olympus公司）。
          著 。 其 中 ，独 正 杆 为 葡 萄 科 植 物 蛇 葡 萄 Ampelopsis         2 方法
          brevipedunculata（Maxim）trautv 的干燥根，临床用于活            2.1 接骨膏不同极性部位的制备
          血化瘀、消肿止痛；刺老苞为五加科植物楤木 Aralia                             按接骨膏处方比例，取独正杆 800 g、刺老苞 800 g、
          chinensis L.的干燥根皮，临床用于散瘀消肿、活血止血；                    刺五加 400 g，混匀，粉碎，过 100 目筛；以 8 倍体积的
          刺五加为五加科植物刺五加 Acanthopanax senticosus                75%乙醇溶液回流提取2次，滤过，合并滤液，回收溶剂，
         （Rupr.et Maxim.）Harms的干燥根和根茎或茎，临床用于                  冷冻干燥，即得醇提物（得率为 14.37%）。取 180 g 醇提
          祛风湿、强筋骨。接骨膏虽然疗效显著，但其以药材粉                            物进行粉碎，过200目筛，悬浮于适量水中，依次使用等
          末直接入药使用的方式，限制了其活性成分快速、充分                            体积的乙酸乙酯、正丁醇萃取2次，回收溶剂，冷冻干燥，
          地释放，故存在给药剂量大、外敷接触面积大、患者依从                           即得乙酸乙酯部位、正丁醇部位（得率分别为 3.31%、
          性欠佳的缺陷。因此，为了提高接骨膏的临床疗效以及                            4.90%）。
          患者的依从性，本研究将接骨膏中的3味药材按临床应                                取醇提物、乙酸乙酯部位、正丁醇部位样品适量，粉
          用比例组方后，分别制备其醇提物、乙酸乙酯部位和正                            碎，过200目筛，与蜂蜜按质量比1∶3调制成黏稠度适宜
          丁醇部位，并对比这3个部位对新西兰兔骨折愈合的影                            的膏药，常温密封保存1周后，在纱布上将药膏涂布制成
          响，从而筛选接骨膏促进骨折愈合的活性部位，以期为                            5 cm（长）×3 cm（宽）×0.2 cm（厚）的载药纱布块，备用 。
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          临床用药提供实验依据。                                         2.2 造模、分组及干预
          1 材料                                                    将兔固定后，以苯巴比妥钠（1 mL/kg）经耳缘静脉
          1.1 动物                                              麻醉，在兔左前肢桡骨侧备皮、消毒；沿桡骨前内侧，以
              本研究所用动物为清洁级新西兰兔，共26只，雄性，                        桡骨中、下1/3段交界处为中心，依次切开皮肤、浅筋膜、
          体质量2.0～2.2 kg，购自湖北省逸挚诚生物科技有限公                       深筋膜，钝性分离肌肉、暴露桡骨；在桡骨中段，用咬骨
          司，动物生产许可证号为SCXK（鄂）2016-0020。兔饲养                     钳造成桡骨中段 5 mm 的骨缺损，保证尺骨完整性。经
          于三峡大学动物实验中心，饲养条件为温度（20～                             X 线检测后，若兔桡骨中段骨组织完全缺损无连接、尺
                                                                                    [12]
          25） ℃、相对湿度（55±5）%，在此期间自由进食、饮水。                      骨无损伤则表明造模成功 。术后3 d内肌内注射青霉
          本实验经三峡大学实验动物福利与伦理委员会批准（批                            素预防感染，每天2次。
          准号为20200187）。                                           本研究共有25只兔造模成功。随机挑选24只造模
          1.2 药品与试剂                                           成功的兔分为模型对照组、醇提物组、乙酸乙酯部位组、
              独正杆、刺老苞、刺五加由湖北省建始县民族药材                          正丁醇部位组，每组6只。造模成功1 d后，在兔造模伤
          基地提供，经恩施土家族苗族自治州中心医院药学部主                            口背面上下5 cm区域备皮，将各组载药纱布采用夹板固
          任张思波中药师鉴定为真品；苯巴比妥钠注射液（批号                            定在备皮部位的中央区域，每 3 d 换药 1 次，持续 4 周。
          2012231）购 自 天 津 金 耀 药 业 有 限 公 司 ；蜂 蜜（批 号            模型对照组不外敷药物，仅以同样大小的夹板包扎固
          2021032501）购自福建省神蜂科技开发有限公司；OC、                      定，夹板更换时间同3个给药组。
          VEGFA、TNF-α、IL-6、bFGF2、ALP 酶联免疫吸附测定                 2.3 兔骨折部位愈合进程检测
         （ELISA）试 剂 盒 以 及 豚 鼠 抗 兔 bFGF2 多 克 隆 抗 体                 各组兔在造模当天和给药第7、14、21、28天时，采用
         （批 号 分别为 L210511009、L210512940、L210507091、           X 线观察骨痂阴影情况，骨折线模糊、消失的时间以及
          L210506259、L20603515、L210527105、PAA551Rb51）均        骨髓腔贯通时间。


          · 1350 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 11                            中国药房  2023年第34卷第11期
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