Page 68 - 《中国药房》2023年5期
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他辅助药的报道，其中尤为重要的一类药物就是植物雌                            HSDYXY-2020005。
          激素  [11―12] ，其被认为是一种更安全、更有前途的雌激素                    2 方法与结果
          替代品。                                                2.1 样品的制备
              本课题组前期研究表明，菟丝子醇提物有显著的拟                          2.1.1 阳性对照药混悬液的制备 取戊酸雌二醇适量，
                                                    [13]
          雌激素活性，且其拟雌激素活性成分多为黄酮类 。本                            用蒸馏水配制质量浓度为0.01 mg/mL的混悬液，备用。
          研究首先对菟丝子总黄酮的拟雌激素作用进行验证，建                            2.1.2 供试品溶液的制备 分别称取 10 个不同产地菟
          立 10 批菟丝子总黄酮的指纹图谱；然后以小鼠子宫系                          丝子药材适量，粉碎过筛，按文献[13]方法制备总黄酮浸
          数、子宫内膜厚度为指标对共有峰进行活性检识，再采                            膏（以芦丁计，总黄酮的纯度为29.84%～31.68%）。取菟
          用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱（UPLC-Q-                         丝子总黄酮浸膏 1 g，用 80% 甲醇溶解并定容于 10 mL
          TOF-MS）技术对菟丝子总黄酮成分进行表征，明确菟丝                         容量瓶中，从中取 1 mL 溶液转移至 5 mL 容量瓶中，以
          子总黄酮中拟雌激素作用的活性成分，以期为植物雌激                            80% 甲醇定容，过 0.22 μm 微孔滤膜，即得供试品溶液，
          素类药物的开发提供参考。                                        备用。
          1 材料                                                2.1.3 对照品溶液的制备 分别精密称取绿原酸、金丝
                                                              桃苷、山柰酚、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素、芹菜素对照品
          1.1 主要仪器
                                                              适量，以 80% 甲醇溶解，并定容于 10 mL 容量瓶中，过
              本研究所用主要仪器有 LE2O4E/O2 型电子分析天
                                                              0.22 µm微孔滤膜，即得混合对照品溶液。
          平（瑞士 Mettler Toledo 公司），Acquity 型超高效液相色
                                                              2.2 菟丝子总黄酮拟雌激素作用考察
          谱（UPLC）仪、PGA495 型质谱仪（美国 Waters 公司），
                                                              2.2.1 分组与给药 将小鼠随机分为空白对照组、阳性
          CKX53型倒置显微镜（日本Olympus公司），YN-02B1型
                                                              对照组（戊酸雌二醇，0.075 mg/kg，剂量根据本课题组前
          生物组织包埋机（深圳市永年科技有限公司）等。
                                                              期预实验结果设置）和不同产地（S1～S10）菟丝子总黄
          1.2 主要药品与试剂
                                                              酮组（8 g/kg，以菟丝子生药量计，剂量根据本课题组预
              绿原酸、山柰酚、槲皮素、异鼠李素、槲皮苷、芹菜素
                                                              实验结果设置），每组10只。给药组小鼠灌胃相应药物，
          对 照 品（批 号 分 别 为 20160312、20130621、20151225、
                                                              空白对照组灌胃等体积蒸馏水，每天早晚各给药 1 次 ，
          20160615、20150813、20170224，纯度≥98%）均购自中
                                                              连续4 d。
          国食品药品检定研究院；金丝桃苷对照品（纯度≥98%，
                                                              2.2.2 小鼠子宫系数和子宫内膜厚度的检测 末次给
          批号111521-201903）购自上海金穗生物有限公司；戊酸
                                                              药1 h后，将各组小鼠脱颈处死，剖取子宫，称定质量，并
          雌二醇（阳性对照药，批号20191038）购自拜耳医药保健
                                                              计算子宫系数（子宫系数＝子宫质量/体质量×100%）。
          有 限 公 司 ；苏 木 素 染 液 、伊 红 染 液（批 号 分 别 为               将子宫置于10%甲醛溶液中固定1～2 d，再进行组织包
          20190504、20190103）购自北京索莱宝生物科技公司。                    埋、切片、染色、脱水、胶封，采用显微镜观察小鼠子宫特
          菟丝子药材（编号 S1～S10）购自不同的菟丝子种植基                         征变化，并测量子宫内膜厚度。采用 SPSS 19.0 软件对
          地，经哈尔滨商业大学药学院曲中原教授鉴定为旋花科                            数据进行统计分析，数据均以 x±s 表示，多组间比较采
          植物南方菟丝子 C. australis R.Br. 或菟丝子 C. chinensis        用单因素方差分析，组间两两比较采用 LSD-t 检验。检
          Lam.的干燥成熟种子，其药材产地信息见表1。                             验水准α＝0.05。结果显示，与空白对照组相比，阳性对
                      表1 菟丝子药材产地信息                            照组和 S1～S10 菟丝子总黄酮组小鼠子宫系数和子宫
           编号             产地                   采摘时间           内膜厚度（S3、S7 菟丝子总黄酮组除外）均显著增加
           S1             黑龙江萝北县               2019年9月       （P＜0.05 或 P＜0.01）。空白对照组子宫内膜上皮、间
           S2             广西南宁                 2019年6月
           S3             安徽大别山                2018年10月       质、腺体无增生，肌层排列紧密，子宫内膜壁薄，无明显
           S4             甘肃秦岭                 2019年12月       增厚及突出。阳性对照组和 S1～S10 菟丝子总黄酮组
           S5             内蒙古阿拉善               2019年10月       小鼠子宫内膜增厚明显，内膜上皮由低柱状形态进展为
           S6             云南文山                 2019年6月        高柱状形态，内膜间质疏松。结果见图1～图3。
           S7             安徽六安                 2018年10月
           S8             山东济宁                 2019年9月        2.3 不同产地菟丝子总黄酮的指纹图谱建立
           S9             河南焦作                 2018年10月       2.3.1 色谱条件 色谱柱为 Agilent Eclipse Plus C18 R
           S10            内蒙古锡林郭勒              2019年10月
                                                              RHD（3.0 mm×150 mm，1.8 μm）；保护柱为 ACQUITY
          1.3 动物                                              UPLC R BEH C18；柱温为 40 ℃；流速为 0.3 mL/min；进
              本研究所用动物为雌性未成年ICR小鼠，体质量为                         样量为2 µL；流动相为0.1%甲酸溶液（A）-乙腈溶液（B），
         （10±2） g，购自长春国家生物产业基地实验动物中心，                         梯度洗脱（0～2 min，10%B→19%B；2～5 min，19%B；
          动物生产许可证号为SCXK（吉）-2020-0002。本实验经                     5～6  min，19%B→44%B；6～14  min，44%B→60%B；
          哈尔滨商业大学实验动物伦理委员会批准，批准号为                             14～19 min，60%B→95%B；19～20 min，95%B→100%B）。


          · 570 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 5                               中国药房  2023年第34卷第5期
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