Page 63 - 《中国药房》2022年24期

比＝（脑梗死面积×厚度）/（全脑面积×厚度）×100％。 表1 各组大鼠的Longa评分比较（x±s，n＝9，分）
2.3.3 神经元损伤 采用尼氏染色。干预14 d后，从每 组别 第1天 第7天 第14天
假手术组 0 0 0
组取4只大鼠，麻醉处死后取脑组织，于4％多聚甲醛溶
模型组 2.33±0.71 a 2.67±0.50 a 2.22±0.67 ad
液中固定 24 h，行脱水包埋，切片，梯度乙醇水化，甲苯 阳性对照组 2.22±0.44 2.00±0.50 b 1.33±0.50 bce
胺蓝染液染色后冰醋酸分化，二甲苯透明后，中性树胶 平肝活血散低剂量组 2.11±0.78 2.44±0.53 1.78±0.44 e
平肝活血散中剂量组 2.33±0.50 1.89±0.60 b 1.56±0.53 bc
封固，置于显微镜下观察，使用 Image-Pro Plus 6.0 软件 平肝活血散高剂量组 2.33±0.50 2.11±0.60 b 1.67±0.50 bcd
分析神经元密度（模型组大鼠在取材时死亡1只）。 a：与假手术组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与同组
2.3.4 神经元凋亡 采用TUNEL染色。每组取“2.3.3” 第1天比较，P＜0.01；d：与同组第7天比较，P＜0.05；e：与同组第7天比
项下4只已处死大鼠的脑组织切片，脱蜡，用梯度乙醇水 较，P＜0.01
3.2 大鼠脑梗死情况
化，蛋白酶 K 工作液修复，破膜后加 buffer 室温平衡，加
与假手术组比较，模型组大鼠右脑呈现明显的灰白
反应液，4′，6-二脒基-2-苯基吲哚染色，封片，置于显微
色梗死区，其脑梗死体积百分比显著升高（P＜0.05）。
镜下观察（凋亡细胞的细胞核为绿色荧光，正常细胞核
与模型组比较，阳性对照组和平肝活血散中、高剂量组
为蓝色荧光）。
大鼠脑梗死体积百分比均显著降低（P＜0.05 或 P＜
2.3.5 脑缺血皮层中凋亡相关蛋白表达 采用 Western
0.01）。结果见图1、表2。
blot法检测。干预14 d后，从每组取3只大鼠，麻醉后予
生理盐水心脏灌流，冰上取脑。右脑组织裂解，提取总
蛋白，用BCA法检测蛋白定量，添加1/5体积的5×上样
缓冲液，蛋白煮沸变性，电泳后转至聚偏二氟乙烯膜上，
室温封闭 1 h，加入 p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved
Caspase-3、β-actin 一抗（稀释比例均为 1∶1 000），4 ℃摇
假手术组 模型组 阳性对照组 平肝活血散 平肝活血散 平肝活血散
床过夜；用1×TBST缓冲液清洗3次，加入相应二抗（稀 低剂量组 中剂量组 高剂量组
释比例均为 1∶10 000），室温避光孵育 2 h，用 1×TBST 图1 各组大鼠脑组织TTC结果
缓冲液清洗3次。运用Odyssey型双色红外荧光成像系 表2 各组大鼠脑梗死体积百分比和神经元密度测定结
统成像、拍照。借助 Image J 软件计算目标蛋白条带与 果
内参（β-actin）灰度值的比值，以此作为目标蛋白的表达 组别 脑梗死体积百分比 神经元密度[M（P 25，P 75），模型组n＝3，
（x±s，n＝3）/% 其余组n＝4]/mm 2
水平。 假手术组 0 1 603.09（1 462.56，1 651.52）
2.4 统计学方法 模型组 28.73±2.04 a 1 279.74（1 140.58，1 290.66） a
阳性对照组 5.71±1.34 c 1 863.68（1 810.47，1 982.37） b
采用SPSS 22.0软件进行统计分析。符合正态分布
平肝活血散低剂量组 18.57±3.29 1 525.32（1 436.64，1 712.23） d
的数据以 x±s 表示，方差齐性时，多组间比较采用单因 平肝活血散中剂量组 5.51±1.61 c 1 586.72（1 460.51，2 484.44） b
素方差分析，并采用LSD法进行两两比较；方差不齐时， 平肝活血散高剂量组 3.62±0.72 b 1 634.47（1 520.55，2 356.20） b
a：与假手术组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与模型
多组间比较采用 Tamhane’s T2 检验。不符合正态分布
组比较，P＜0.01；d：与阳性对照组比较，P＜0.05
且方差不齐的数据，以 M（P25，P75 ）表示，并采用 Kruskal-
3.3 大鼠神经元损伤情况
Wallis H 检验。Longa 评分使用两因素重复测量资料的
假手术组大鼠脑缺血皮层细胞排列整齐，结构完
方差分析进行组间比较。检验水准α＝0.05。
整，着色均匀，尼氏小体染色规则。模型组大鼠脑缺血
3 结果
皮层细胞紊乱，形态不规则，尼氏小体缺失形成空泡。
3.1 大鼠神经功能评分 与假手术组比较，模型组大鼠尼氏小体数量明显减少。
与假手术组比较，模型组大鼠干预第 1、7、14 天的 与模型组比较，阳性对照组和平肝活血散中、高剂量组
Longa评分均显著升高（P＜0.05）。与模型组比较，阳性 大鼠脑缺血皮层神经元损伤均有不同程度减轻，尼氏小
对照组和平肝活血散中、高剂量组大鼠干预第7和14天 体数量明显增加。结果见图2。
的 Longa 评分均显著降低（P＜0.05）。与同组干预第 1 与假手术组比较，模型组大鼠脑缺血皮层神经元密
天比较，阳性对照组和平肝活血散中、高剂量组大鼠第 度显著降低（P＜0.05）。与模型组比较，阳性对照组和
14 天的 Longa 评分均显著降低（P＜0.01）。与同组干预 平肝活血散中、高剂量组大鼠脑缺血皮层神经元密度均
第7天比较，模型组、阳性对照组和平肝活血散低、高剂 显著增加（P＜0.05）。与阳性对照组比较，平肝活血散
量组大鼠第 14 天的 Longa 评分均显著降低（P＜0.05 或 低剂量组大鼠脑缺血皮层神经元密度显著降低（P＜
P＜0.01）。结果见表1。 0.05）。结果见表2。

中国药房 2022年第33卷第24期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 24 · 3001 ·