Page 62 - 《中国药房》2022年24期
P. 62

缺血性脑卒中（ischemic stroke，IS）约占卒中总人数               ASP-9100）均购自北京中杉金桥生物技术有限公司；其
                                                        [1]
          的 80％，是世界第二大死亡原因和第三大致残原因 。                          余试剂均为实验室常用规格，水为纯净水。
          时间窗内静脉溶栓和动脉取栓是 IS 急性期的有效治疗                          1.3 动物
          手 段 。 脑 缺 血 再 灌 注 损 伤（cerebral  ischemia-               80只SD雄性大鼠，体质量（200±20）g，购于成都达
               [2]
          reperfusion injury，CIRI）是 IS 预后不良的重要因素。细            硕实验动物有限公司，实验动物生产许可证号为SCXK
          胞凋亡在CIRI病理进程中发挥着重要作用，受p53、Bcl-                     （川）2020-030。动物饲养环境：温度（22±2）℃，相对湿
          2、Bax、Caspase-3 等基因的调控，已有研究证实抑制细                    度（50±10）％。本实验通过陕西中医药大学伦理委员
                                       [3]
          胞凋亡可减轻CIRI，保护神经功能 。                                 会审批，批准号为SUCMDL20210907001。
              平肝活血散是陕西省名中医王晓玲教授治疗卒中                           2 方法
          的经验方，由天麻15 g、赤芍12 g、三七6 g、益母草15 g、                  2.1 造模
          竹茹 10 g 组成，具有平肝熄风、活血化瘀、清热化痰之                            大鼠造模前适应性喂养1周，然后参考相关文献 ，
                                                                                                           [8]
          功。前期研究证实，该方能促进脑出血患者脑水肿消                             采用线栓法造模，具体操作如下：大鼠麻醉后固定于木
          退，改善超敏 C 反应蛋白、肿瘤坏死因子表达                 [4－5] 。方中    板上，沿颈部正中作 2 cm 左右纵行切口，钝性分离右侧
          主药在CIRI中发挥神经保护作用，可有效抑制神经元凋                          颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉；使用手术线结扎颈总动
          亡 [6－7] ，但其作用机制尚不明确。为此本研究考察了平                       脉近心端，另在颈外动脉和颈内动脉（两者分叉部位上
          肝活血散对大鼠 CIRI 的影响，初探其作用机制，旨在为                        约2 mm处）用手术线各打一活结，在颈总动脉靠近分叉
          明确平肝活血散治疗CIRI的作用机制提供参考。                             前1 cm作一“V”切口，线栓进入方向为颈总动脉→颈内
          1 材料                                                动脉，进线栓长度 17～18 mm，感觉线栓有轻微阻力时
          1.1 主要仪器                                            停止推进，此时线栓前端到达大鼠大脑中动脉起始处，
              本研究所用主要仪器包括TB-718EL型组织包埋机                       立即夹闭颈内动脉防止线栓脱落；1 h后拔出线栓，观察
         （湖北泰维科技实业股份有限公司）、Nikon Eclipse E100                  大鼠眼球颜色，以白色变为红色，表示 CIRI 模型造模完
          型显微镜（日本 Nikon 公司）、RT-6100 型酶标仪（美国                   成。大鼠造模清醒后，依照Longa评分法对神经功能进
          Rayto公司）、D3024R型台式高速冷冻离心机[大龙兴创                      行评分：0分表示无神经功能缺损症状，1分表示左前爪
          实验仪器（北京）有限公司]、Mini-PROTEAN Tetra 型电                 或后肢无法完全伸展，2分表示行走时左转或追尾，3分
          泳仪（美国Bio-Rad公司）、Odyssey型双色红外荧光成像                    表示爬行时向左倾倒，4 分表示意识丧失或不能自主行
                                                                [9]
          系统（美国Li-Cor公司）等。                                    走 ；1～3分表明CIRI模型造模成功，评分为0或4分的
          1.2 药品与试剂                                           大鼠被剔除。假手术组大鼠仅分离血管不插线栓。
              平肝活血散配方颗粒剂（批号分别为 0052263、                       2.2 分组与给药
          0060273、0041413、8111413、0095043，剂量与平肝活血                 80 只大鼠选取 12 只作为假手术组，剩余大鼠按
          散剂量等效）购自广东一方制药有限公司；通心络胶囊                           “2.1”项下方法进行造模，结果有60只大鼠造模成功，成
         （批号 219980015，规格 0.26 g/粒）购自石家庄以岭药业                  功率为88％。将造模成功的大鼠随机分为模型组、阳性
          股份有限公司；4％多聚甲醛溶液（批号AR1068）购自武                        对照组（通心络胶囊0.325 g/kg，根据成人与大鼠等效剂
          汉博士德生物工程有限公司；2，3，5-氯化三苯基四氮唑                         量系数换算临床等效剂量）和平肝活血散低、中、高剂量
         （TTC）试剂（批号DY30104-10g）购自上海迪医明生物科                     组（3.02、6.04、12.08  g/kg，按 临 床 等 效 剂 量 的 50％ 、
          技有限公司；尼氏染液（批号G1036）、TUNEL试剂盒（批                      100％、200％设置），每组12只。假手术组及模型组大鼠
          号G1507）、BCA蛋白定量检测试剂盒（批号G2026）、聚                     灌胃等体积水，各给药组大鼠灌胃相应剂量药液（以水
          偏二氟乙烯膜（批号 G6015）均购自武汉赛维尔生物科                         为溶剂制备的混悬液），每日1次，连续14 d。
          技有限公司；小鼠β-肌动蛋白（β-actin）单克隆抗体（批号                     2.3 检测指标
          8227）、兔抗抑癌p53单克隆抗体（批号33889）、兔抗B淋                    2.3.1 神经功能评分 观察各组 9 只大鼠干预第 1、7、
          巴细胞瘤2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）单克隆抗体（批号              14天的Longa评分。
          196495）、兔抗 Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl-2-associated X pro‐    2.3.2 脑梗死体积 采用TTC法测定。干预14 d后，从
          tein，Bax）多克隆抗体（批号 32503）、兔抗胱天蛋白酶 3                  每组取3只大鼠，麻醉处死后取脑组织，沿冠状面切片，
         （Caspase-3）单克隆抗体（批号 184787）、兔抗活化 Cas‐                厚约2 mm，于2％TTC试剂中37 ℃避光染色30 min，再
          pase-3（Cleaved Caspase-3）多克隆抗体（批号 32042）均           于 4 ℃预冷的 4％多聚甲醛溶液中固定 2 h，拍照后用
          购自英国Abcam公司；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔和                          Image-Pro Plus 6.0软件分析，记录大鼠脑梗死体积（染为
          羊抗小鼠免疫球蛋白 G 二抗（批号分别为 ZB-2306、                       灰白色）及全脑体积（染为红色），计算脑梗死体积百分


          · 3000 ·    China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 24                            中国药房  2022年第33卷第24期
   57   58   59   60   61   62   63   64   65   66   67