Page 73 - 《中国药房》2022年21期
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CONCLUSIONS Jinbei oral liquid has a certain anti-influenza A H1N1 virus infection effect of rats and can help the body resist
          secondary S. pneumoniae infection by restoring the type 17 antibacterial immune function.
          KEYWORDS    Jinbei oral liquid；influenza A H1N1；Streptococcus pneumoniae；secondary bacterial infection


              全世界每年有 29 万～65 万人死于流感，而甲型                      ELISA试剂盒（批号均为06/2022）均购自上海酶联生物
          H1N1 流感病毒一直是全世界季节性流感的主要病原                          科技有限公司；其余试剂均为分析纯或实验室常用规
            [1]
          体 。流感造成的死亡通常是由继发性细菌性肺炎引起                           格，水为蒸馏水。
          的，与流感相关的重症病例和死亡病例超过95%伴有细                          1.3 动物
                [2]
          菌感染 。肺炎链球菌是继发性细菌感染中最常见的细                               本研究所用动物为 SPF 级 BALB/c 雌性小鼠，6 周
                [3]
          菌之一 。尽管有抗生素和流感疫苗的使用，病毒合并                           龄，体质量为 14～18 g，由北京维通利华实验动物技术
          细菌感染导致的死亡仍是一个严重的问题。                                有限公司提供，动物生产许可证号为 SCXK（京）2021-
              金贝口服液由黄芪、党参、北沙参、丹参、当归、川                        0006。所有小鼠随机分笼饲养（每笼 8 只），饲养期间自
          芎、金银花、连翘、黄芩、川贝母、清半夏、甘草共12味中                        由摄食、饮水，保持 12 h 昼夜节律，饲养环境通风良好，
          药材组成，具有益气养阴、祛痰化瘀的功效，主要用于特                          温度适宜（20～25 ℃）。本研究实验方案合理，符合动物
          发性肺纤维化属气阴两虚兼痰瘀交阻证的治疗。方中                            实验的“3R”原则。
          黄芪、黄芩以及丹参均有一定的抗 H1N1 病毒活性                  [4－6] ；  1.4 病毒毒株和细菌株
          且黄芪的乙醇提取物对变形杆菌、伤寒沙门氏菌等多种                               甲型流感病毒 A/PR/8/34 株（H1N1）由山东省医学
          常见细菌均有一定的抑制作用 ；丹参的乙醇提取物对                           科学院基础医学研究所提供。肺炎链球菌 Streptococ‐
                                    [6]
                                                       [6]
          金黄色葡萄球菌等 9 种常见细菌均有明显抑制作用 。                         cus pneumoniae 购自北京北纳创联生物技术研究院，编
          然而，目前对金贝口服液抗菌、抗病毒作用的研究较少。                          号为BNCC338425。
          鉴于此，本研究拟建立体内 H1N1 病毒感染小鼠模型和                        2 方法
          继发性肺炎链球菌感染小鼠模型，探究金贝口服液对                            2.1  金贝口服液抗小鼠甲型H1N1流感病毒作用研究
          H1N1 病毒感染和继发性肺炎链球菌感染的治疗作用，                         2.1.1  分组、造模、给药及取样           按随机数字表法将 48
          以期为其临床抗病毒应用提供数据支持。                                 只小鼠随机分为6组，每组8只，分别为空白组、模型组、
          1 材料                                               磷酸奥司他韦胶囊组（阳性对照组，25.6 mg/kg，为临床
          1.1  主要仪器                                          等效剂量）和金贝口服液高、中、低剂量组（剂量分别为
              本研究所用的主要仪器有 LC480 型实时荧光定量                      15.6、7.8、3.9 mL/kg，分别为成人剂量的 2、1、0.5 倍等效
          PCR 仪[罗氏诊断产品（上海）有限公司]、Spectra Max                  剂量）。小鼠适应性饲养 5 d 后，空白组小鼠滴鼻 20 μL
          M5 型酶标仪（美国 Molecular Devices 公司）、Sorvall ST        生理盐水，其余各组小鼠经乙醚麻醉后滴鼻20 μL含0.8
          8R 型高速冷冻离心机（美国 Thermo Fisher Scientific 公          个半数致死量（median lethal dose，LD50 ）的 H1N1 病毒
                                                               [7]
          司）、MJ-250-Ⅱ型霉菌培养箱（上海一恒科学仪器有限                       液 。滴鼻后 2 h，以小鼠灌胃容积 0.1 mL/10 g 为标准，
          公司）、CKX-31型倒置显微镜（日本Olympus公司）。                     空白组和模型组小鼠均灌胃蒸馏水，其余组小鼠均灌胃
          1.2  主要药品与试剂                                       相应药液，每日 1 次，连续灌胃 6 d。每天监测小鼠体质
              金贝口服液（批号 2101001，规格 10 mL/支）购自山                量并计算体质量变化率[体质量变化率（%）＝每日体质
          东宏济堂制药集团股份有限公司；磷酸奥司他韦胶囊                            量/初始体质量×100%]。末次灌胃24 h后，将小鼠摘眼
         （批号 02220001031，规格以奥司他韦计为 75 mg/粒）购                 球取血，而后处死，取其肺组织。全血在 4 °C 下放置过
          自宜昌东阳光长江药业股份有限公司；病毒基因组                             夜后，以9 000 r/min离心20 min，取上清，置于－80 ℃冰
          DNA/RNA提取试剂盒（批号W0202）购自天根生化科技                      箱保存，备用。称定小鼠肺组织质量并计算肺指数[肺
         （北京）有限公司；SYBR Green One-Step 实时荧光定量                 指数（%）＝肺组织质量/体质量×100%]，然后将一部分
          PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）试剂盒（批号      肺组织用4%多聚甲醛固定，另一部分肺组织于－80 ℃
          D7268M）购自上海碧云天生物技术有限公司；小鼠肿                         冰箱中保存，备用。以上实验均在 BSL-2 实验室中
          瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor α，TNF-α）、白细          进行。
          胞介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6 酶联免疫吸附           2.1.2  小鼠肺病毒载量测定            采用 qRT-PCR 法测定。
          测 定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试      取“2.1.1”项下－80 ℃保存的小鼠肺组织置于组织研磨
          剂 盒（批 号 分 别 为 9680025291221、9680010021121、         机中制备组织匀浆，以 1 000 r/min 离心 3 min，取上清，
          9680026141221）均购自武汉爱博泰克生物科技有限公                     按病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒方法提取肺组织中
          司 ；小鼠干扰素 β（interferon-β，IFN-β）、IL-17、IL-23         总 RNA。采用 SYBR Green One-Step qRT-PCR 试剂盒


          中国药房    2022年第33卷第21期                                            China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 21  ·2623·
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