Page 60 - 《中国药房》2022年11期
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1.2                         Daudi细胞                 4.0                        Daudi细胞
                          a          a       JeKo-1细胞                                           JeKo-1细胞
                 1.0                                                 3.5     a           a
                                                                     3.0
                基因表达水平  0.6                                         基因表达水平  2.5
                 0.8
                                                                     2.0
                                                                     1.5
                 0.4
                 0.2                                                 1.0
                                                                     0.5
                  0                                                   0
                      miRNA-18a   miRNA-4802                             ULK1 mRNA    ATG7 mRNA
              A. 2种细胞中miRNA-18a、miRNA-4802的表达水平检测结果                B. 2种细胞中ULK1、ATG7 mRNA的表达水平检测结果
                                                                     4.0                       Daudi细胞
                                                                                               JeKo-1细胞
                         Daudi细胞 JeKo-1细胞                            3.5     a          a
                                                                    蛋白表达水平  2.0
                     ULK1               150 kDa                      3.0
                                                                     2.5
                     ATG7                78 kDa                      1.5
                                                                     1.0
                                                                     0.5
                     β-actin             42 kDa                       0
                                                                           ULK1       ATG7
                  C. 2种细胞中ULK1、ATG7蛋白表达的电泳图                       D. 2种细胞中ULK1、ATG7蛋白的表达水平检测结果
            a：与Daudi细胞相比，P＜0.001
                图3 Daudi细胞和JeKo-1细胞中miRNA-18a、miRNA-4802和ULK1、ATG7表达差异的考察结果

        3.4  miRNA-18a mimics 处理 JeKo-1 细胞后自噬活性             mimics 和 miRNA-4802 mimics 处理后，JeKo-1 细胞对
        的变化                                                 ADR、VCR 的耐药性均显著降低（P＜0.001）。Western
            Western blot 实验结果显示，与 Control mimics 处理         blot 实验结果显示，经 miRNA-18a mimics 和 miRNA-
        组 相 比 ，miRNA-18a mimics 处 理 组 JeKo-1 细 胞 中          4802 mimics处理后，ADR、VCR均可显著升高JeKo-1细
        ULK1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均显著降低，p62 蛋白表达                      胞 中 cleaved caspase-9、cleaved caspase-6 的 表 达 水 平
        水平显著升高（P＜0.001）。自噬流实验结果显示，与                        （P＜0.001）。结果见图 6。这表明，miRNA-18a mimics
        Control mimics 处理组相比，miRNA-18a mimics 处理组           和 miRNA-4802 mimics 很可能通过抑制淋巴瘤细胞的
        JeKo-1 细胞中无明显 LC3-Ⅱ蛋白荧光斑块。透射电镜                      自噬活性来抑制其对ADR和VCR的耐药性。
        观察结果显示，与 Control mimics处理组[自噬溶酶体数                   4 讨论
        量 为（2.9 ± 0.1）个] 相 比 ，miRNA-18a mimics 处 理 组            淋巴瘤细胞的耐药性一直是淋巴瘤基础研究和临
        JeKo-1 细胞中自噬溶酶体数量[（0.2±0.1）个]显著减少                   床诊疗的重要关注点 。淋巴瘤细胞的耐药性是指淋
                                                                               [15]
        （P＜0.01）。结果见图4。这表明，经miRNA-18a mimics                巴瘤细胞通过多种途径实现减少或者阻止化疗药物的
        处理后，JeKo-1细胞的自噬活性降低。                                杀伤力，从而实现促进自身生存的目的。一般情况下，
        3.5  miRNA-4802 mimics处理JeKo-1细胞后自噬活性               淋巴瘤细胞常通过以下途径实现耐药性：减少化疗药物
        的变化                                                 进入细胞内；增加化疗药物排出细胞外；改变细胞代谢
            Western blot 实验结果显示，与 Control mimics 处理         途径；增强化疗药物致DNA损伤的修复；抑制化疗药物
        组 相 比 ，miRNA-4802 mimics 处 理 组 JeKo-1 细 胞 中         引起的细胞凋亡       [16－18] 。相关研究发现，上述多种途径均
        ATG7、LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著降低，p62 蛋白表达水                      有细胞自噬过程的参与，尤其在增强 DNA 修复和抑制
        平显著升高（P＜0.001）。自噬流实验结果显示，与Con-                      细胞凋亡过程中，自噬发挥着重要作用                [19－22] 。
        trol mimics 处理组相比，miRNA-4802 mimics 处理组                 自噬在细胞内受多种途径的分子调控，其核心调控
        JeKo-1 细胞中无明显 LC3-Ⅱ蛋白荧光斑块。透射电镜                      机制主要包括雷帕霉素信号通路和腺苷酸活化蛋白激
        观察结果显示，与Control mimics处理组[自噬溶酶体数量                   酶通路    [23 － 25] 。值得注意的是，某些非编码 RNA，如
        为（3.6±0.1）个]相比，miRNA-4802 mimics处理组JeKo-1           miRNA 已被证实广泛参与细胞自噬的调节过程                    [26－27] 。
        细胞自噬溶酶体数量[（0.3±0.1）个]显著减少（P＜                        基于此，本研究聚焦 miRNA 对淋巴瘤细胞自噬的调控
        0.01）。结果见图 5。这表明，经 miRNA-4802 mimics 处              过程。自噬小体的触发和延展是成熟的分子调控过程，
        理后，JeKo-1细胞的自噬活性降低。                                 该过程中涉及3个关键的自噬小体起始蛋白复合物，其
        3.6 JeKo-1细胞经miRNA-18a mimics和miRNA-4802            中 ULK1 基因编码的蛋白质与 ATG13 蛋白、200 kDa 的
        mimics处理后耐药性的变化                                     黏着斑激酶家族相互作用蛋白（focal adhesion kinase
            细胞相对活性实验结果显示，使用 miRNA-18a                       family interacting protein of 200 kDa，FIP200）形成的蛋


        ·1334 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 11                                 中国药房    2022年第33卷第11期
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