Page 68 - 《中国药房》2022年8期
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米黄素双棕榈酸酯的含量最高              [6－8] 。枸杞子中类胡萝卜          酯对照品各适量，加二氯甲烷溶解，制成上述4种成分质
        素的质量控制以多指标含量测定为主，采用外标法需要                            量浓度分别为5.967 5、3.043 2、28.594 0、846.053 3 μg/mL
        多个对照品，而该类对照品价格昂贵且其溶液稳定性不                            的单一对照品储备液。
        佳，使得实验成本较高。一测多评法是借助单一对照品                            2.1.2  混合对照品溶液          于避光条件下，精密量取
        （参照物）测定样品中多个成分（待测成分）含量的分析                          “2.1.1”项下各单一对照品储备液1 mL，置于同一10 mL
        方法，能够较好地解决中药质量控制中对照品缺乏这一                            量瓶中，用含 0.1％BHT 的无水乙醇稀释至刻度，摇匀，
        问题  [9－10] 。基于此，本研究采用高效液相色谱法联合一                     即得玉米黄质、β-胡萝卜素、β-隐黄素棕榈酸酯、玉米黄
        测多评法，建立同时测定枸杞子中玉米黄质、β-胡萝卜                           素双棕榈酸酯质量浓度分别为0.596 8、0.304 3、2.859 4、
        素、β-隐黄素棕榈酸酯、玉米黄素双棕榈酸酯含量的方                           84.605 3 μg/mL的混合对照品溶液。
        法，并与外标法测定结果进行比较，旨在为枸杞子中类                            2.1.3  供试品溶液       于避光条件下，取枸杞子药材，粉
        胡萝卜素的质量控制提供参考。                                      碎，取粉末约 1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密
        1 材料                                                加入混合溶剂[正己烷-无水乙醇-丙酮-甲苯（10 ∶ 6 ∶ 7 ∶ 7，
        1.1 主要仪器                                            V/V/V/V），下同]20 mL，密塞，称定质量，超声（频率 28
            本研究所用主要仪器包括 1260 型高效液相色谱仪                       kHz，功率 200 W）处理 30 min，放冷，再次称定质量，用
        （美国 Agilent 公司），e2695 型高效液相色谱仪（美国                   混合溶剂补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液2 mL，
        Waters 公司），UltiMate 3000 型高效液相色谱仪（美国                置于5 mL量瓶中，用含0.1％BHT的无水乙醇稀释至刻
        Thermo Fisher Scientific 公司），XPE26 型百万分之一电          度，摇匀，即得供试品溶液。
        子天平（瑞士 Mettler Toledo 公司），CQ-200B-DST 型超            2.2 色谱条件
        声波清洗仪（上海跃进医用光学器械厂）等。                                    以YMC C30 （4.6 mm×250 mm，5 μm）为色谱柱，以甲
        1.2  主要药品与试剂                                        醇-乙腈-水（81 ∶ 14 ∶ 5，V/V/V）为流动相A、二氯甲烷为流
            β- 胡 萝 卜 素 对 照 品 [ 批 号 100445-201802，纯 度        动相 B 进行梯度洗脱（0～20 min，70％A→50％A；20～
        29.8％（以 C40H56计，供高效液相色谱法测定）]购自中国                    48 min，50％ A；48～50 min，50％ A→70％ A；50～55
        食 品 药 品 检 定 研 究 院 ；玉 米 黄 质 对 照 品（批 号                min，70％A）；柱温为 20 ℃；流速为 1.0 mL/min；检测波
        AF8062716，纯度 98.80％）购自成都埃法生物科技有限                    长为450 nm；进样量为20 μL。在该色谱条件下，混合对
        公司；玉米黄素双棕榈酸酯对照品（批号 0309S，纯度                         照品溶液、供试品溶液（编号 S20）和空白溶液（混合溶
        72.76％）购自法国 Extrasynthese 公司；β-隐黄素棕榈酸               剂）的高效液相色谱图见图1。
        酯 对 照 品（批 号 2017.06.12，纯 度 98.6％）购 自 瑞 士            2.3  方法学考察
        Carote Nature公司；正己烷、甲醇、乙腈、二氯甲烷均为色                   2.3.1  线性关系考察        精密量取玉米黄质、β-胡萝卜
        谱纯，无水乙醇、丙酮、甲苯、二丁基羟基甲苯（butylated                     素、β-隐黄素棕榈酸酯、玉米黄素双棕榈酸酯对照品储
        hydroxy toluene，BHT）均为分析纯，水为超纯水。                    备液 1、2、0.5、0.5 mL，各 4 份，置于同一 50、25、10、5 mL
            20 批次枸杞子药材样品来源信息见表 1。各样品                        量瓶中，用含0.1％BHT的无水乙醇稀释至刻度，作为线
        经宁夏医科大学马学琴教授鉴定，均为茄科植物枸杞                             性 1、2、3、4 溶液；精密量取上述对照品储备液 5、5、2、
        Lycium barbarum L.的干燥果实。                            2.5 mL，置于 10 mL 量瓶中，用含 0.1％BHT 的无水乙醇

                   表1 枸杞子药材样品来源信息                           稀释至刻度，作为线性 5 溶液。取各线性溶液，按“2.2”
         编号      产地       采收时间   编号       产地      采收时间      项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以峰面积为纵坐
         S1    青海德令哈       2019年  S11   甘肃靖远       2020年    标（A）、质量浓度为横坐标（c）绘制标准曲线，结果见表2。
         S2    青海德令哈       2019年  S12   甘肃靖远       2020年    2.3.2  检测限和定量限试验           精密量取“2.1.2”项下混
         S3    青海德令哈       2019年  S13   宁夏中宁       2017年
         S4    青海德令哈       2019年  S14   宁夏中宁       2017年    合对照品溶液，用含 0.1％BHT 的无水乙醇定量稀释成
         S5    青海德令哈       2019年  S15   宁夏中宁       2018年    适宜浓度的溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，分别
         S6    甘肃靖远        2017年  S16   宁夏中宁       2018年    以信噪比3 ∶ 1和10 ∶ 1计算检测限和定量限。结果显示，
         S7    甘肃靖远        2018年  S17   宁夏中宁       2019年
         S8    甘肃靖远        2018年  S18   宁夏中宁       2019年    玉米黄质、β-胡萝卜素、β-隐黄素棕榈酸酯、玉米黄素双棕
         S9    甘肃靖远        2019年  S19   宁夏中宁       2020年    榈酸酯的检测限分别为0.017 9、0.036 5、0.085 8、0.112 8
         S10   甘肃靖远        2019年  S20   宁夏中宁       2020年
                                                            μg/mL，定量限分别为 0.059 7、0.121 7、0.285 9、0.282 0
        2 方法与结果                                             μg/mL。
        2.1  溶液的制备                                          2.3.3  精密度试验      精密吸取“2.1.3”项下供试品溶液，
        2.1.1  对照品储备液        于避光条件下，精密称取玉米黄                 按“2.2”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录峰面积。
        质、β-胡萝卜素、β-隐黄素棕榈酸酯、玉米黄素双棕榈酸                         结果显示，玉米黄质、β-胡萝卜素、β-隐黄素棕榈酸酯、玉


        ·958 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 8                                    中国药房    2022年第33卷第8期
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