Page 62 - 《中国药房》2022年8期
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势；当萃取温度为 50 ℃时，挥发油萃取率达到峰值；随                         著影响（P＞0.05）。最终得到艾纳香挥发油最优萃取工
        后随着萃取温度的增加，挥发油萃取率开始降低。因                             艺为 A2B2C3，即萃取温度 50 ℃、萃取压力 30 MPa、萃取
        此，选择萃取温度45～55 ℃进行后续研究。                              时间50 min。
        2.2.3  萃取时间      取艾纳香药材粉末 10 g，精密称定，                2.3.2  验证实验      取艾纳香药材粉末 10 g，精密称定，
        置于 50 mL 超临界萃取反应釜中，设定萃取压力 30                        置于50 mL超临界萃取反应釜中，按上述最优萃取工艺萃
        MPa、萃取温度50 ℃，在参照相关文献             [14－15] 的基础上，考     取艾纳香挥发油，并按“2.1”项下公式计算艾纳香挥发油
        察不同萃取时间（20、30、40、50、60 min）对艾纳香挥发                   萃取率。实验平行验证3次。结果显示，艾纳香挥发油萃
        油萃取率的影响，详见图1C。由图1C可知，随着萃取时                          取率分别为4.66％、4.61％、4.64％，平均为4.64％（RSD＝
        间的延长，艾纳香挥发油萃取率逐渐升高，且以 20～30                         0.54％，n＝3），表明优化所得萃取工艺稳定、可行。
        min 内的变化较为明显，而 30 min 后则趋于稳定。综合                     2.4 水蒸气蒸馏法提取艾纳香挥发油
        考虑艾纳香挥发油萃取率及成本，选择萃取时间 30～                               取艾纳香药材粉末50 g，精密称定，置于1 L圆底烧
        50 min进行后续研究。                                       瓶中，参照2020年版《中国药典》（四部）通则“2204”项下
        2.3 正交实验                                           “挥发油测定（甲法）”操作 。结果显示，艾纳香挥发油
                                                                                  [16]
        2.3.1  正交实验方案设计与结果             在单因素实验的基             萃取率为0.99％。
        础上，以萃取温度（A）、萃取压力（B）、萃取时间（C）为考                       2.5 艾纳香挥发油成分GC-MS分析
                                                  4
        察因素，以艾纳香挥发油萃取率为指标，采用L9 （3）正交                        2.5.1  供试品溶液的制备          分别精密称取超临界 CO2
        实验设计进行工艺优化。艾纳香挥发油萃取工艺的因                             萃取法（最优工艺）和水蒸气蒸馏法所得的艾纳香挥发
        素与水平见表 1，正交实验方案设计与结果见表 2，方差
                                                            油各 0.1 g，置于 10 mL 量瓶中，加入乙酸乙酯溶解并稀
        分析结果见表3。
                                                            释至刻度，摇匀，经 0.45 µm 微孔滤膜滤过，即得供试品
              表1   艾纳香挥发油萃取工艺的因素与水平                         溶液，备用。
         水平        A/℃           B/MPa         C/min        2.5.2 GC 条件    色谱柱为 HP-5MS 弹性石英毛细管柱
         1         45             25            30         （60 m×0.25 mm，0.25 μm）；载气为高纯氦气（99.999％），
         2         50             30            40
         3         55             35            50          流量为 1.0 mL/min；汽化室温度为 250 ℃；柱前压力为
        表 2   艾纳香挥发油萃取工艺的正交实验方案设计与                          16.85 psi；溶剂延迟时间为 3 min；升温程序为初始温度
              结果                                            50 ℃，保持2 min，以5 ℃/min升温至310 ℃，保持3 min；
                                                            运行时间为57 min；不分流进样，进样量为1 µL             [8，15] 。
         试验号     A       B        C     D（空白）  挥发油萃取率/％
         1       1        1       1      1        4.32      2.5.3 MS 条件    离子源为电子轰击离子源，离子源温
         2       1        2       2      2        4.56      度为230 ℃；四极杆温度为150 ℃；电子能量为70 eV；发
         3       1        3       3      3        4.46
         4       2        1       2      3        4.43      射电流为 34.6 μA；倍增器电压为 1 682 Ｖ；接口温度为
         5       2        2       3      1        4.64      280 ℃；扫描范围为m/z 29～500      [8，15] 。
         6       2        3       1      2        4.57      2.5.4 GC-MS 分析      取“2.5.1”项下供试品溶液，按
         7       3        1       3      2        4.39
         8       3        2       1      3        4.56     “2.5.2”“2.5.3”项下条件进样，得到超临界 CO2萃取法和
         9       3        3       2      1        4.43      水蒸气蒸馏法所得艾纳香挥发油的总离子流图（图 2）。
                 4.45     4.38    4.48   4.46
         K1
                 4.55     4.59    4.47   4.51               经与 NIST 2014、Wiley 275 标准质谱图进行对比、鉴定
         K2
                 4.46     4.48    4.50   4.48              （相似度＞90％），采用峰面积归一化法计算各成分的相
         K3
         R       0.10     0.21    0.03   0.05
                                                            对含量，结果见表 4。由表 4 可知，从超临界 CO2萃取法
                        表3   方差分析结果                         所得艾纳香挥发油中共鉴定出39种成分，其总相对含量
        误差来源 偏差平方和     自由度     方差    方差比    临界值    显著性      占艾纳香挥发油总量的82.584％，主要为醛酮类成分（5
        A       0.018   2     0.009   6.0     19   P＞0.05   种，占39.424％）、醇类成分（16种，占28.381％）、烷烃类
        B       0.064   2     0.032   21.3    19   P＜0.05
        C       0.001   2     0.001   0.3     19   P＞0.05   成分（2种，占9.390％）及烯类成分（8种，占4.092％）等，其
        误差      0.003   2                          P＞0.05   中相对含量最高的为花椒油素（34.829％），其次为 L-龙
            由表2、表3可知，萃取压力对艾纳香挥发油萃取率                         脑（17.458％）、7-（2-羟基异丙基）-1，4a-二甲基十氢萘-1-
        的影响最大，其次为萃取温度，而萃取时间的影响最                             醇（5.223％）、二十四烷（5.165％）、三十三烷（4.225％）、
        小。萃取压力对艾纳香挥发油萃取率有显著影响（P＜                           （+）-2- 樟 脑（3.946％）、叶 绿 醇（2.401％）、β- 石 竹 烯
        0.05），萃取温度和萃取时间对艾纳香挥发油萃取率无显                        （1.641％）、豆甾醇（1.211％）；从水蒸气蒸馏法所得艾纳


        ·952 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 8                                    中国药房    2022年第33卷第8期
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