Page 102 - 《中国药房》2022年7期

醇稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度分别为没食子酸
120 μg/mL、儿茶素160 μg/mL、鞣花酸160 μg/mL的混合
对照品溶液。 50
40
2.2.4 供试品溶液的制备 精密称取金樱子或盐金樱 30
U/mV
子粉末（过50目筛）0.5 g，置于具塞锥形瓶中，加80％甲 20
醇 25 mL，称定质量，超声（150 W，40 kHz）提取 30 min； 10
放冷，再次称定质量，用80％甲醇补足质量，摇匀，滤过， 0
取续滤液过0.45 μm微孔滤膜，即得。 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
t/min
2.2.5 方法学考察 对方法的精密度、重复性、稳定性
图2 金樱子HPLC指纹图谱
考察如下。
（1）精密度试验：取金樱子样品（编号S1），按“2.2.4”
项下方法制备供试品溶液，按“2.2.2”项下色谱条件连续
进样6次。以没食子酸为参照峰，计算各共有峰相对保 50
留时间和相对峰面积。结果各峰相对保留时间与相对 40
峰面积RSD均小于3％，表明仪器精密度良好。 30
（2）重复性试验：取金樱子样品（编号 S1），共 6 份， U/mV 20
按“2.2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.2”项下色谱 10
条件进样测定。以没食子酸为参照峰，计算各共有峰相 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
对保留时间和相对峰面积。结果各峰相对保留时间与 t/min
相对峰面积RSD均小于3％，表明方法的重复性良好。
图3 盐金樱子HPLC指纹图谱
（3）稳定性试验：取金樱子样品（编号S1），按“2.2.4”
项下方法制备供试品溶液，分别于 0、2、4、8、12、24 h 时
按“2.2.2”项下色谱条件进样测定。以没食子酸为参照 20
峰，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积。结果各 U/mV 10
峰相对保留时间与相对峰面积RSD均小于3％，表明金 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
樱子供试品溶液在24 h内稳定性良好。 t/min
2.2.6 指纹图谱的建立、相似度评价及色谱峰指认 分 1：没食子酸；3：儿茶素；8：鞣花酸
别取10批金樱子和盐金樱子，按“2.2.4”项下方法制备供 图4 混合对照品溶液HPLC图
试品溶液，按“2.2.2”项下色谱条件依次进样测定，记录
*
测定结果可知，金樱子盐炙前后的ΔE 值在 4.06～18.59
色谱图。将色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价
之间，即通过肉眼可以区分判断同批次药材的生品与盐
系统（2012版）》中，分别以S1、Y1样品图谱为参照图谱，
炙品。利用 R 语言的 ggsignif 与 ggplot2 数据包，将金樱
选择中位数法，时间窗宽度为 0.1 min，多点校正后，以
Mark峰进行峰匹配，生成对照图谱并计算相似度。结果 子生品与盐炙品的色度值绘制成柱状图，同时作t检验，
共标定10个共有峰（见图2、图3），其中金樱子生品相似 结果见图 5。t 检验结果表明金樱子盐炙前后的色度值
*
*
*
度 为 0.980、0.972、0.986、0.983、0.986、0.988、0.996、 L 、b 、E 有显著性差异。因此，在金樱子盐炙过程中观
*
*
0.991、0.988、0.995，盐炙品相似度为0.990、0.988、0.997、 察色度值L 与色度值b 的变化对于区分生品与盐炙品有
0.994、0.987、0.980、0.986、0.991、0.997、0.979，表明各批 一定意义。
次之间差异较小、质量较稳定。盐炙品与生品相比，5、 表6 金樱子与盐金樱子色度值测定结果
6、10号峰峰面积升高而8号峰峰面积下降；与混合对照
生品 盐炙品 * * * *
品图谱（图 4）比较，确定 1 号峰为没食子酸、3 号峰为儿 编号 L * a * b * E * 编号 L * a * b * E * ΔL Δa Δb ΔE
茶素、8号峰为鞣花酸。 S1 29.46 17.83 28.25 44.54 Y1 34.14 20.43 31.76 50.91 4.68 2.60 3.51 6.40
2.2.7 色度值的测定 取金樱子与盐金樱子粉末约2.0 g， S2 27.69 26.40 29.45 48.28 Y2 31.47 21.42 32.63 50.14 3.78 －4.98 3.18 7.01
S3 28.92 22.33 29.11 46.72 Y3 30.05 23.34 32.88 50.29 1.13 1.01 3.77 4.06
以D65光源白色板作为背景校正色差仪后，对粉末色度 S4 32.76 20.18 31.20 49.54 Y4 28.67 25.84 32.48 50.44 －4.09 5.66 1.28 7.10
*
*
*
值（L 、a 、b）进行采集，平行 3 次，取平均值，记录结果 S5 34.57 19.71 28.46 48.92 Y5 31.42 18.35 33.95 49.76 －3.15 －1.36 5.49 6.47
*
*2
*
见表 6。样品总色度值（E）的计算公式为 E ＝（L +a + S6 24.21 31.43 20.42 44.62 Y6 32.15 23.25 35.10 52.97 7.94 －8.18 14.68 18.59
*2
S7 22.41 36.01 23.12 48.31 Y7 30.54 22.34 31.96 49.53 8.13 －13.67 8.84 18.20
*
*2
*2
b ） 。ΔE ＝（ΔL +Δa +Δb ） ，其中ΔL 、Δa 、Δb 表示 S8 25.20 29.78 23.78 45.69 Y8 31.88 23.66 35.23 53.08 6.68 －6.12 11.45 14.60
*2
1/2
*2
*
*
*
1/2
*
盐炙前后相应色度值的变化，ΔE 表示样品炮制前后的 S9 25.36 32.00 25.40 48.09 Y9 31.42 19.87 30.55 48.12 6.06 －12.13 5.15 14.50
*
[12]
颜色变化；当ΔE ＞3.5时，其色差可被肉眼识别 。根据 S10 25.64 32.96 27.44 49.97 Y10 29.39 26.42 30.96 50.20 3.75 －6.54 3.52 8.32
·864 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 7 中国药房 2022年第33卷第7期